環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Environmental endocrine disruptors,EEDs)暴露可能誘發(fā)糖脂代謝紊亂,增加Ⅱ型糖尿病、肥胖等代謝綜合征的發(fā)病風(fēng)險。壬基酚(nonylphenol,NP)作為EEDs的典型代表,可通過消化道、皮膚接觸等途徑被機(jī)體吸收并隨血液分布到多種組織和器官內(nèi)蓄積。中國及歐美多個國家人群尿液中均能檢出NP。體外培養(yǎng)提示NP暴露可導(dǎo)致β細(xì)胞分泌功能障礙。圍產(chǎn)期NP暴露可引起F1、F2子代出現(xiàn)典型的代謝綜合征癥狀。雖然相關(guān)研究證實(shí)了NP會對機(jī)體產(chǎn)生有害作用,但是染毒劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于環(huán)境中人群實(shí)際NP暴露劑量。為了更好的接近普通人群NP的環(huán)境暴露,并進(jìn)一步探究NP是否有低劑量效應(yīng),在NP染毒劑量方面采取環(huán)境濃度相同數(shù)量級設(shè)計(jì),設(shè)定為0.02,0.2,2μg/kg/day三個劑量梯度。本研究通過灌胃的方式模擬人群接觸NP的主要途徑,進(jìn)行長期低濃度NP暴露,建立動物模型。初步探討低濃度NP長期暴露是否影響胰腺糖代謝功能及其可能存在的作用機(jī)制。高脂飲食是導(dǎo)致胰島素抵抗發(fā)生的重要因素之一,本實(shí)驗(yàn)還探究了不同劑量NP暴露是否促進(jìn)高脂飲食致糖代謝紊亂的作用。第一部分低濃度壬基酚長期暴露致大鼠糖代謝紊亂的研究目的:探究低濃度NP長期暴露對大鼠胰腺糖代謝功能的影響。方法:SPF級SD大鼠(150±10)g,雌雄各半,隨機(jī)分為4組,20只/組。分組如下:對照組(C組,玉米油),低劑量(L組,0.02μg/kg/day NP),中劑量組(M組,0.20μg/kg/day NP),高劑量組(H組,2.00μg/kg/day NP)。灌胃體積為5 ml/kg.bw。每日晨連續(xù)空腹灌胃NP180天。90天時進(jìn)行大鼠口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT);180天后麻醉處死大鼠。定期監(jiān)測大鼠體重和空腹血糖水平(FBG)變化;ELISA檢測大鼠血清空腹胰島素(FINS)水平;鏡下觀察大鼠胰腺組織病理結(jié)構(gòu)改變;高效液相色譜法(HPLC)檢測大鼠血清和胰腺中NP含量;RT-q PCR和Western Blot檢測葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK)、解偶聯(lián)蛋白-2(uncoupling protein2,UCP-2)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(Glucose transporter 2,GLUT-2)等糖代謝相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.與對照組比較,NP(低、中、高劑量)暴露180天導(dǎo)致大鼠胰腺質(zhì)量降低(F=109.905,P0.001),胰腺系數(shù)減小(F=136.200,P0.001)。NP暴露劑量與大鼠胰腺重量與系數(shù)的變化存在劑量-效應(yīng)關(guān)系,即胰腺重量和胰腺系數(shù)隨著NP暴露劑量升高而減小。2.與對照組比較,NP(低、中、高劑量)暴露可致大鼠空腹血糖升高(F90天=189.311,P180天0.001;F180天=160.785,P180天0.001)。NP暴露劑量與空腹血糖水平存在劑量-效應(yīng)關(guān)系,即空腹血糖水平隨著NP暴露劑量升高而升高。與對照組比較,NP(低、中、高劑量)暴露可致大鼠180天空腹胰島素水平降低(F=100.89,P0.001)。與對照組比較,NP暴露(低、中、高劑量)組大鼠瘦素水平升高(F=76.628,P0.001)。3.與對照組比較,NP暴露90天可導(dǎo)致大鼠口服糖耐量異常,OGTT曲線下面積增大(F=361.423,P0.001)。NP染毒劑量與大鼠OGTT曲線下面積(The area under curve of OGTT,OGTT-AUC)呈劑量-效應(yīng)關(guān)系,OGTT-AUC隨著NP暴露劑量增加而增大。4.與對照組比較,NP(低、中、高劑量)暴露可致90天胰島素抵抗指數(shù)增大(F=196.857,P0.001)和胰島素敏感指數(shù)減小(F=199.032,P0.001)。5.與對照組比較,NP暴露(L、M、H組)可致大鼠90天,180天血清(F血清90天=322.289,P血清90天0.001;F血清180天=396.446,P血清180天0.001)與胰腺組織(F胰腺90天=501.091,P胰腺90天0.001;F胰腺180天=534.124,P胰腺180天0.001)中NP濃度升高,血清與胰腺組織中NP濃度與NP暴露劑量之間存在劑量-效應(yīng)關(guān)系,即血清與胰腺中NP濃度隨著NP暴露劑量增加而升高。6.與對照組比較,NP暴露組(L、M、H組)均出現(xiàn)不同程度胰腺細(xì)胞胞質(zhì)疏松,細(xì)胞水腫、壞死,胰腺細(xì)胞出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤,隨著NP暴露劑量增加病理改變加重。7.與對照組比較,NP暴露(L、M、H組)可致大鼠胰腺180天葡萄糖激酶(GK)(F=131.434,P0.001)和葡糖糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT-2)(F=245.555,P0.001)基因相對表達(dá)量下調(diào),解偶聯(lián)蛋白(UCP-2)基因相對表達(dá)量上調(diào)(F=109.761,P0.001)。8.NP暴露180天后,與對照組比較,NP暴露(L、M、H組)可致大鼠胰腺葡萄糖激酶(GK)(F=240.362,P0.001)和葡糖糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT-2)(F=360.413,P0.001)的蛋白相對表達(dá)量下調(diào),胰腺解偶聯(lián)蛋白(UCP-2)蛋白相對表達(dá)量下調(diào)(F=103.312,P0.001)。結(jié)論:1.低濃度NP(0.2,2μg/kg/day)暴露180天后可在血清和胰腺中蓄積,造成胰腺病理損傷,誘導(dǎo)大鼠糖耐量異常和胰島素抵抗,誘發(fā)大鼠糖代謝紊亂。2.低濃度NP(0.2,2μg/kg/day)暴露180天后胰腺UCP-2、GK和GLUT-2等糖代謝關(guān)鍵基因和蛋白的表達(dá)異常,這可能是NP暴露致糖代謝紊亂的機(jī)制之一。第二部分壬基酚促進(jìn)高脂飼料致大鼠糖代謝紊亂的研究目的:探討不同劑量NP聯(lián)合高脂飼料暴露對大鼠糖代謝的影響是否存在交互效應(yīng)。方法:SPF級SD大鼠(150±10)g,雌雄各半,隨機(jī)分為8組,20只/組。分組如下:普通飼料對照組(C組,玉米油+普通飼料),普通飼料低劑量(L組,0.02μg/kg/day NP+普通飼料),普通飼料中劑量組(M組,0.20μg/kg/day NP+普通飼料),普通飼料高劑量組(H組,2.00μg/kg/day NP+普通飼料),高脂飼料對照組(CH組,玉米油+高脂飼料),高脂飼料低劑量組(LH組,0.02μg/kg/day NP+高脂飼料),高脂飼料中劑量組(MH組,0.20μg/kg/day NP+高脂飼料),高脂飼料高劑量組(HH組,2.00μg/kg/day NP+高脂飼料)。灌胃體積為5 ml/kg,連續(xù)灌胃NP180天。糖代謝相關(guān)生化指標(biāo)及分子檢測方法同第一部分。結(jié)果:1.與普通飼料對照組比較,高脂飼料對照組大鼠90天、180天體重呈增加趨勢(P90天=0.556,P180天=0.970),90天、180天空腹血糖水平升高(P90天0.001,P180天0.001),90天空腹胰島素水平升高(P90天=0.003),180天空腹胰島素水平降低(P180天0.001),90天口服糖耐量異常,OGTT曲線下面積(OGTT-AUC)增大(P0.001),90天、180天胰島素抵抗指數(shù)增大(P90天0.001,P180天0.001),90天、180天胰島素敏感指數(shù)減小(P=0.034,P0.001)。2.與普通飼料對照組比較,高脂飼料對照組胰腺組織出現(xiàn)輕度水腫,RT-q PCR結(jié)果顯示:高脂飼料對照組胰腺GK與GLUT-2的基因相對表達(dá)水平均下降(PGK0.001,PGLUT-20.001),UCP-2基因相對表達(dá)量增加(PUCP-20.001),WB結(jié)果顯示:高脂飼料對照組胰腺GK、GLUT-2及UCP-2的蛋白相對表達(dá)水平均下降(PGK0.001,PGLUT-20.001,PUCP-2=0.001)。3.NP(低、中、高劑量)聯(lián)合高脂飼料暴露對大鼠180天空腹血糖的影響存在交互效應(yīng)(F低=14.582,P低=0.001;F中=4.981,P中=0.032;F高=12.359,P高=0.001);對大鼠OGTT-AUC的影響存在交互效應(yīng)(F低=34.865,P低0.001;F中=4.853,P中=0.034;F高=65.007,P高0.001)。低劑量(F90天=19.624,P90天0.001;F180天=44.020,P180天0.001)、中劑量(F90天=10.959,P90天=0.002;F180天=50.540,P180天0.001)、高劑量(F90天=31.728,P90天=0.001;F180天=24.983,P180天0.001)NP聯(lián)合高脂飼料暴露對90天、180天胰島素敏感指數(shù)的影響存在交互效應(yīng)。NP(低、中、高劑量)聯(lián)合高脂飼料暴露對180天胰島素抵抗指數(shù)的影響存在交互效應(yīng)(F低=31.488,P低0.001;F中=49.972,P中0.001;F高=15.139,P高0.001)。NP(低、中、高劑量)聯(lián)合高脂飼料暴露對胰腺UCP-2基因的表達(dá)量存在交互效應(yīng)(F低=54.624,P低0.001;F中=45.16,P中0.001;F高=246.982,P高0.001),對胰腺GLUT-2蛋白表達(dá)量的影響存在交互效應(yīng)(F低=17.137,P低0.001;F中=38.198,P中0.001;F高=4.847,P高=0.048)。4.低劑量NP聯(lián)合高脂飼料暴露對大鼠90天空腹血糖的影響存在交互效應(yīng)(F=8.785,P=0.005),對大鼠90天胰島素抵抗指數(shù)的影響存在交互效應(yīng)(F=6.429,P=0.016)。5.中劑量NP聯(lián)合高脂飼料暴露對90天和180天空腹胰島素水平的影響存在交互效應(yīng)(F90天=5.521,P90天=0.024;F180天=15.884,P180天0.001),對胰腺GK基因相對表達(dá)量的影響存在交互效應(yīng)(F=10.307,P=0.004),對胰腺UCP-2的蛋白表達(dá)量存在交互效應(yīng)(F=14.191,P=0.003)。6.高劑量NP聯(lián)合高脂飼料暴露對胰腺GK和GLUT-2兩個基因相對表達(dá)量的影響存在交互效應(yīng)(FGK=6.629,PGK=0.018;FGLUT-2=7.45,PGLUT-2=0.013),對胰腺GK和UCP-2兩個蛋白表達(dá)量的影響存在交互效應(yīng)(FGK=4.847,PGK=0.048;FUCP-2=103.780,P UCP-20.001)。結(jié)論:NP和高脂飼料聯(lián)合暴露可增加糖代謝紊亂發(fā)生風(fēng)險,在0.20μg/kg/day、2.00μg/kg/day劑量下聯(lián)合作用最明顯。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

污染狀況l,NP）是壬基酚聚氧乙烯醚（nonylphenol etho之一，主要作為抗氧化劑、乳化劑、油漆、]。NP 分子式為 C9H19C6H4OH，相對分子量子機(jī)構(gòu)與動物雌激素結(jié)構(gòu)類似[2]，是一種常tal endocrine disruptors,EEDs)，NP 暴露后可 在自然環(huán)境中極不穩(wěn)定，極易降解為 NP。.43 mg/L），但易溶于有機(jī)溶劑。NP 在環(huán)境物臟器中蓄積，NP 可能會通過食物鏈最終脅。

（F=361.423,P＜0.001）。NP 染毒劑量與大鼠 OGTT-AUC 呈劑量-效應(yīng)關(guān)系，OGTT-AUC 隨著 NP 暴露劑量增加而增大。如圖 1-2。圖1-2-1 各組大鼠90天OGTT曲線（ x±s,n=10）Fig.1-2-1 OGTT curve in groups in rats in oral glucose tolerance test at 90 day（ x±s,n=10）

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 楊靜29圖1-2-2 90天各組大鼠OGTT曲線下面積（ x±s,n=10）Fig.1-2-2 The area under curve of OGTT in groups in rats at day 90（ x±s,n=10）注：avs C,P<0.05;bvs L,P <0.05;cvs M,P <0.05。3.5 NP 暴露 180 天各組大鼠胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)與對照組比較，NP（低、中、高劑量）暴露可致 90 天胰島素抵抗指數(shù)增大（F=196.857,P＜0.001）和胰島素敏感指數(shù)減小（F=199.032,P＜0.001）；NP 暴露劑量與 90 天胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)大小存在劑量-效應(yīng)關(guān)系，即 90天胰島素抵抗指數(shù)隨著 NP 暴露劑量增加而增大，90 天胰島素敏感指數(shù)隨著 NP暴露劑量增加而減小。與對照組比較，NP（低、中、高劑量）暴露可致 180 天胰島素抵抗指數(shù)增大（F=48.053,P＜0.001）和胰島素敏感指數(shù)減小（F=50.866,P＜0.001），低劑量組（0.02 μg/kg.bw）180 天胰島素抵抗指數(shù)最大，180 天胰島素敏感指數(shù)最小。如表 1-6。表 1-6 各組大鼠 NP 暴露 180 天胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)（ x±s,n=10）Tab.1-6 The effect of NP exposure on IRI and ISI on day 180（ x±s

【參考文獻(xiàn)】

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2 丁世彬;張國富;吳衛(wèi)東;;環(huán)境內(nèi)分泌干擾物與代謝綜合征[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年02期

3 王強(qiáng);蔡玉嬌;鄭月萍;張慧;吳沂芮;張嶺;陸榮柱;;雙酚A對脂代謝和肥胖的影響及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2014年04期

4 孔皓;韋國利;蔣淑麗;張紀(jì)亮;;三苯基錫對大鼠肥胖發(fā)生的影響[J];生態(tài)毒理學(xué)報;2012年04期

5 孫婉婉;畢宇芳;;雙酚A與胰島素抵抗及2型糖尿病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

6 蒲亞蘭;劉麗玲;甘立強(qiáng);傅躍先;;二VA英誘導(dǎo)胎鼠腭裂組織中TGF-β3表達(dá)變化[J];中國公共衛(wèi)生;2011年09期

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本文編號：2828635