目的過氧化物氧還原蛋白(peroxiredoxin-1,Prx-1)是一種新型過氧化物酶,本研究利用慢病毒載體使小鼠肺組織高表達(dá)Prx-1,觀察Prx-1對(duì)SiO_2誘導(dǎo)的矽肺肺組織炎癥的影響,并初步探討其作用機(jī)制,為矽肺靶向治療新靶點(diǎn)的選擇提供新方向。方法12周雄性C57小鼠隨機(jī)分為4組,每組10只:1)對(duì)照組:給予生理鹽水;2)矽肺組:經(jīng)支氣管插管灌注SiO_2懸液(5mg/只);3)轉(zhuǎn)染對(duì)照組:經(jīng)支氣管插管灌注SiO_2懸液(5mg/只)+空載慢病毒(10~7TU/只);4)Prx-1轉(zhuǎn)染組:經(jīng)支氣管插管灌注SiO_2懸液(5mg/只)+Prx-1慢病毒(10~7TU/只)。模型制備后,小鼠常規(guī)飼養(yǎng)1周。1周后,H.E染色觀察肺組織形態(tài)變化,免疫組化法檢測(cè)8-OHdG、CD68、M1型巨噬細(xì)胞(iNOS)表達(dá)情況,FinePointe WBP全身體積描積系統(tǒng)檢測(cè)肺功能,免疫印跡法檢測(cè)Prx-1、NF-κB和P-Src蛋白表達(dá)水平、H.E染色高倍視野下計(jì)數(shù)肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)量,Real-time PCR檢測(cè)IL-1β、TNF-α、TGF-β1。結(jié)果1 H.E染色顯示:對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)正常,肺泡間隔纖細(xì),炎細(xì)胞浸潤(rùn)少;矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組肺組織可見明顯矽結(jié)節(jié),肺泡腔及肺泡間隔有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);與矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較,Prx-1轉(zhuǎn)染組肺組織病變減輕,矽結(jié)節(jié)變小。2免疫組化結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組8-OHdG、CD68、iNOS陽(yáng)性表達(dá)評(píng)分明顯上升;與矽肺組比較,轉(zhuǎn)染對(duì)照組8-OHdG、CD68、iNOS陽(yáng)性表達(dá)評(píng)分無明顯變化,但Prx-1轉(zhuǎn)染組三項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的陽(yáng)性表達(dá)評(píng)分明顯下降。3肺功能結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組潮氣量(TVb)、每分鐘通氣量(MVb)、最大呼氣流速(PEF)降低,呼吸頻率(f)增快;與矽肺組比較,轉(zhuǎn)染對(duì)照組的各項(xiàng)呼吸檢測(cè)指標(biāo)無明顯區(qū)別,但Prx-1轉(zhuǎn)染組TVb、MVb、PEF增加,f降低。4肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組巨噬細(xì)胞數(shù)量增加較對(duì)照組明顯增加,兩組增加幅度相一致;與矽肺組和比較,Prx-1轉(zhuǎn)染組巨噬細(xì)胞數(shù)量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5免疫印跡結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組Prx-1、NF-κB和P-Src蛋白表達(dá)上調(diào);與矽肺組比較,Prx-1轉(zhuǎn)染組Prx-1蛋白表達(dá)進(jìn)一步上調(diào),但NF-κB和P-Src蛋白表達(dá)下降。6 Real time-PCR結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組IL-1β、TNF-α、TGF-β1表達(dá)量明顯增加;與矽肺組比較,Prx-1組IL-1β、TNF-α、TGF-β1表達(dá)量明顯下調(diào)。結(jié)論P(yáng)rx-1高表達(dá)具有抑制矽肺小鼠肺組織炎癥的作用,這種作用與抑制ROS/NF-Κb/Src通路激活,減少巨噬細(xì)胞向M1型分化和IL-1β、TNF-α等炎癥因子合成有關(guān)。圖10幅;表4個(gè);參51篇。
【學(xué)位單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R135.2
【部分圖文】：

2：PCR 反應(yīng) Reps：40，95℃ 5s，60℃ 30~34s；RT-PCR 儀開始擴(kuò)增。學(xué)分析 采用 SPSS13.0 和 graghpad 統(tǒng)計(jì)軟件結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)有計(jì)量資料采用 ±S 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述。兩兩均數(shù)比較采組間比較采用單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以 P＜鼠肺組織 HE 染色肺組織 HE 染色結(jié)果見圖 1。對(duì)照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)較完炎細(xì)胞浸潤(rùn)。矽肺組小鼠肺組織內(nèi)可見明顯矽結(jié)節(jié)，肺泡間隔有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。與矽肺組比較，轉(zhuǎn)染對(duì)化，而 Prx-1 轉(zhuǎn)染組肺組織病變減輕，矽結(jié)節(jié)明顯變小，減少。

*為與對(duì)照組比，P＜0.05；#為與矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組比，P＜0.05圖 2 各組小鼠肺功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Fig.2 Test results of lung function indicators of mice in each group表 1 各組小鼠肺功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Table 1 Test results of lung function indicators of mice in each group組別 F(BPM) TVb(ml) MVb(ml) 對(duì)照組 406.84±18.76 0.43±0.05 174.97±22.61 矽肺組468.02±30.78*0.34±0.03*132.69±11.03*染對(duì)照組 463.42±17.17 0.30±0.03 139.17±11.03 rx-1 轉(zhuǎn)染組 434.53±42.94#0.39±0.04#165.58±34.03#F 值 14.46 18.68 6.88

- 16 -照組；B：矽肺組；C：轉(zhuǎn)染對(duì)照組；D：Prx-1 轉(zhuǎn)組；E：染色評(píng)分結(jié)果 *為與對(duì)照組矽肺組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組比，P＜0.05圖 4 Prx-1 高表達(dá)對(duì)小鼠矽肺肺組織 ROS 水平的影響 The high expression of Prx-1 effect on the level of ROS in lung tissues of silico組小鼠肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)灌洗液提取細(xì)胞后，制成細(xì)胞圖片并行 HE 染色，顯微鏡下隨 200 個(gè)細(xì)胞，進(jìn)行巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果如圖 5 所示：對(duì)照組巨噬.60±1.82），矽肺組巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增加（24.60±5.46），差P＜0.05）；與矽肺組比較，轉(zhuǎn)染對(duì)照組巨噬細(xì)胞數(shù)量（23.00（P＞0.05），而 Prx-1 轉(zhuǎn)染組巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯下降（15.00計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2820289