發(fā)布時間：2020-08-26 20:47

【摘要】：目的探討VEGFR-3調(diào)控矽肺大鼠早期肺淋巴管增生的作用機(jī)制,同時通過檢測矽肺發(fā)生過程中炎癥因子、致纖維化因子的變化進(jìn)一步闡明肺淋巴循環(huán)在矽肺發(fā)病機(jī)制中的重要作用,為有效防治矽肺提供新的理論依據(jù)。方法SPF級成年雄性大鼠96只,體重250-300g,隨機(jī)分為對照組、動式染塵組、藥物促進(jìn)淋巴管增生組和手術(shù)阻斷淋巴管增生組。每組大鼠按采樣時間(7d、14d、28d和56d)分為4個亞組,每個亞組6只。采用HOPE-MED8050系列動式染毒控制裝置(倉內(nèi)濃度2000mg/m~3)給予動式染塵組大鼠動式染塵3小時;對照組大鼠不染塵;藥物促進(jìn)淋巴管增生組大鼠除每天給予與動式染塵組相同的處理外另給予大鼠腹腔注射丹參酮IIA磺酸鈉(15mg/(kg·d));手術(shù)阻斷淋巴管增生組大鼠先手術(shù)結(jié)扎胸導(dǎo)管,之后每天給予動式染塵3小時處理。取大鼠右下肺進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋,利用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肺組織炎性病變情況;Masson、天狼猩紅染色觀大鼠肺組織內(nèi)膠原沉積情況;免疫組化法檢測肺組織內(nèi)淋巴管增生情況;其余肺組織利用勻漿器進(jìn)行勻漿提取總蛋白,用Western blot技術(shù)定量檢測大鼠肺組織內(nèi)平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、磷脂酰肌醇激酶(Phosphoinositide 3 kinase,PI3K)、磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(phosphos-erine/threonine protein kinase,P-AKT)、血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothel-ial growth factor receptor-3,VEGFR-3)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth fa-ctor-β,TGF-β)、核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor(NF)-κB p65,NF-κBp65)等因子的表達(dá)情況;收集各組大鼠胸導(dǎo)管淋巴液,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked im munosorbent assay,ELISA)檢測淋巴液內(nèi)腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表達(dá)水平。結(jié)果1 HE、Masson以及天狼猩紅染色結(jié)果顯示,采用HOPE-MED8050動式染塵裝置成功建立了大鼠矽肺模型。2免疫組化結(jié)果表明,與對照組比較,動式染塵組、藥物促進(jìn)淋巴管增生組和手術(shù)阻斷淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)出現(xiàn)不同程度的淋巴管增生。相較于動式染塵組(4.16±0.28),藥物促進(jìn)淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)淋巴管增生數(shù)量升高(5.83±0.76),手術(shù)阻斷淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)淋巴管增生數(shù)量較動式染塵組有所降低(2.66±0.76)。3采用Western blot技術(shù)對各組大鼠肺組織內(nèi)調(diào)控淋巴管增生因子VEGFR-3蛋白定量測定結(jié)果顯示,較對照組相比,三組大鼠肺組織內(nèi)VEGFR-3含量都有所增加。與動式染塵組(0.97±0.03)相比,藥物促進(jìn)淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)VEGFR-3含量明顯上調(diào)(1.54±0.03),手術(shù)阻斷淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)VEGFR-3含量下調(diào)(0.87±0.01)。4對與淋巴管增生有關(guān)的信號通路蛋白PI3K、P-AKT進(jìn)行蛋白定量分析發(fā)現(xiàn),結(jié)果與VEGFR-3在各組肺組織內(nèi)含量變化相同。5對四組大鼠肺纖維化程度進(jìn)行評定,結(jié)果表明致纖維化因子TGF-β、α-SMA的表達(dá)在除對照組外含量都有不同程度的增加且變化趨勢相同。而與動式染塵組(3.09±0.06和3.10±0.05)相比,藥物促進(jìn)淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)TGF-β(2.61±0.09)和α-SMA(2.63±0.01)含量降低,手術(shù)阻斷淋巴管增生組大鼠肺組織內(nèi)TGF-β(3.99±0.01)和α-SMA(4.01±0.04)含量升高。6對各組大鼠肺組織內(nèi)炎癥因子NF-κBp65的定量分析結(jié)果顯示,藥物促進(jìn)淋巴管增生組的大鼠肺組織內(nèi)NF-κBp65含量較各個時間點(diǎn)的動式染塵組相比有所降低,手術(shù)處理組大鼠肺內(nèi)NF-κBp65含量與染塵組和對照組相比較,蛋白含量增加。7 ELISA試劑盒對大鼠胸導(dǎo)管淋巴液內(nèi)炎癥因子TNF-α表達(dá)水平進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示與大鼠肺組織內(nèi)NF-κBp65在各個分組各時間點(diǎn)的表達(dá)情況一致。結(jié)論1藥物促進(jìn)矽肺早期大鼠肺淋巴管增生可延緩矽肺發(fā)病進(jìn)程。2 VEGFR-3在矽肺肺淋巴循環(huán)中占有重要地位,可以調(diào)控淋巴管增生。3 VEGFR-3通過影響PI3K/AKT信號通路調(diào)控矽肺早期肺淋巴管增生。圖12幅;表13個;參152篇。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R135.2
【圖文】：

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文持毯上進(jìn)行術(shù)后保暖，待其蘇醒。在此期間，為了盡快恢復(fù)接受手術(shù)大鼠的意識，可用注射器緩慢給予手術(shù)大鼠口服生理鹽水。待大鼠意識充分清醒后，屏障環(huán)境下飼養(yǎng) 1 天，后給予與動式染塵組大鼠相同的處理。每天更換 3 次高壓滅菌過的墊料，防止在飼養(yǎng)過程中出現(xiàn)傷口感染導(dǎo)致大鼠死亡，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

HE染色（×100）

Masson染色（×100）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 周智;賀大璞;;肺淋巴循環(huán)的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2015年07期

2 張海東;王瑞;曲瑋;王輝;楊飛飛;于頤光;;高濃度矽塵接觸對大鼠氧化應(yīng)激的作用研究[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇;2014年12期

3 王曄;楊茜;程薇波;梁銳超;薛靈抒;曹瑩瑩;;用HOPE-MED8050動式染塵控制系統(tǒng)建立大鼠矽肺模型[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2013年07期

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本文編號：2805675