【摘要】：自抗生素問世以后,臨床上的患者因致病菌感染的患病率大幅度降低。抗生素的廣泛應用雖然給人類健康帶來了福音,但也產(chǎn)生了諸多負面影響,比如:細菌耐藥問題越來越嚴重以至達到了難以控制的地步、新抗生素的研制與開發(fā)腳步遲滯、新種耐藥菌無抗可抵等等。共生細菌(大腸埃希氏菌,肺炎克雷伯菌)將耐藥基因傳遞給人體和環(huán)境中的其他病原體,引起耐藥性的傳播并成為耐藥基因的儲存庫。且研究發(fā)現(xiàn)終端食品中分離的耐藥細菌與感染人類的耐藥細菌相關(guān)性最大,本次實驗希望通過分離獲得零售食品和病人糞便中的耐ESBLs、耐碳青霉烯類和耐多粘菌素類的耐藥細菌,了解我市目前部分地區(qū)耐ESBLs、耐碳青霉烯類和耐多粘菌素的耐藥細菌的污染情況。因此本課題所選目標耐藥菌株為大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯桿菌,研究將從幾種零售食品及病人的糞便中采集篩查樣本菌株,然后通過PCR、基因測序等技術(shù)對分離菌株的耐藥基因攜帶情況進行統(tǒng)計分析。由于抗生素的過度使用,超級細菌的出現(xiàn)對人類構(gòu)成了重大威脅,尋找新的抗生素替代品迫在眉睫。國內(nèi)外研究人員高度重視在食品領(lǐng)域?qū)で蟀踩行У纳镆志夹g(shù)。乳酸菌屬在世界范圍內(nèi)被認為是食品級安全微生物,并且部分菌株被FAO和WHO列為益生菌。我們不僅可以將乳酸菌以食品添加劑的形式直接添加到食物中來改善人體健康,而且可以利用其發(fā)酵代謝產(chǎn)物特別是乳酸菌細菌素作為食品防腐劑和抗生素替代物來抑制大量致病菌的生長。因其發(fā)酵代謝產(chǎn)物具有無毒無害、安全高效等優(yōu)點,近年來作為生物抑菌劑得到廣泛應用。目前廣泛應用的代謝產(chǎn)物只有少數(shù)的幾種,其中細菌素一類被應用的較為廣泛。因細菌素自身的性質(zhì)特點,并非所有代謝產(chǎn)生的細菌素在任何環(huán)境下都能發(fā)揮效用,只有不斷的挖掘新型高效細菌素類產(chǎn)品,才能繼續(xù)推動生物抑菌技術(shù)的發(fā)展。因此本實驗要選用幾種實驗室已知的乳酸菌的代謝產(chǎn)物對篩選出來的耐藥菌株進行簡單的抑制作用探究,為尋求高效、穩(wěn)定的生物抗菌劑提供參考。耐藥細菌菌株及耐藥基因獲得結(jié)果如下:(1)從哈爾濱市部分生鮮超市和醫(yī)院采集零售食品和病人糞便樣本共120份(食品、糞便各60份),用三種不同抗菌譜的抗生素篩選出耐藥菌株共388株。(2)樣品陽性率情況:食品檢出率73.33%,糞便檢出率65.00%,檢出率基本持平;耐藥菌株分布情況:耐藥大腸218株多于耐藥肺克170株,從耐藥類型上看,ESBLs菌株276株、KPC菌株68株、PO菌株44株,整體來看,ESBLs菌株占比最大,環(huán)境污染相對較為嚴重。(3)通過分子生物學技術(shù)獲得耐藥基因分布情況如下:ESBLs菌株中檢出CTX-M-7/8(頻數(shù)159、占比57.61%)、CTX-M-11/12(頻數(shù)135、占比48.91%);KPC菌株中檢出blaIMP(頻數(shù)6、占比8.82%)、blaNDM(頻數(shù)7、占比10.29%);PO菌株中檢出MCR-1(頻數(shù)4、占比9.09%)�？梢钥闯�,ESBLs菌株中耐藥基因攜帶率較高,PO菌株中僅檢出一種耐藥基因型,沒有分布分散,趨于集中流行趨勢。通過以上檢測結(jié)果獲得了我市部分區(qū)域的耐藥基因傳播情況,為預防和追溯ESBLs、KPC、PO類耐藥基因的傳播和流行提供參考依據(jù),為臨床用藥和環(huán)境中抗生素的使用做出指導,為管控和治理我市抗生素濫用情況做出警示。抑菌試驗:本研究選用的四種乳酸菌對耐藥菌株的抑制作用沒有顯現(xiàn)。
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R155.5
【圖文】：

圖 1-1 食物鏈中耐藥菌的不同傳播途徑Fig.1-1 Different routes of transmission of drug-resistant bacteria in the food chain.4.3 食品中耐藥基因水平轉(zhuǎn)移機制近幾十年來，致病菌耐藥性的不斷出現(xiàn)和擴張已經(jīng)成為嚴峻的公共衛(wèi)生問題。越來越

水平基因轉(zhuǎn)移機制Fig.1-2Horizontalgenetransfermechanism

圖 2-1 ESBLs 分離鑒定程序圖Fig.2-1 ESBLs Separation and identification program diagra抗生素以工作濃度向 EC 肉湯中滴加至頭孢噻肟的終濃加入到 90mL 的 EC 肉湯中，封好袋子。

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本文編號：2796409