【摘要】：研究目的:由食源性致病菌引發(fā)的食品安全問題屬于嚴重的公共衛(wèi)生問題,而副溶血性弧菌是我國重點監(jiān)控的食源性致病菌之一。目前對副溶血性弧菌的檢測方法多存在操作復雜費時等問題,且因食品樣品組分復雜,難以達到靈敏檢測要求。因此建立快速、準確、靈敏的副溶血性弧菌檢測方法,對預防和控制由副溶血性弧菌污染引發(fā)的食品安全問題十分必要。本論文旨在構建靈敏度高、準確性好的副溶血性弧菌檢測方法,并對所建立的檢測方法進行評價,論文的研究工作可為食品中食源性致病菌的監(jiān)測提供一定的理論依據(jù)和檢測新方法,并為確保我國食品安全提供一定的技術支撐。研究方法:本論文建立了兩種新的副溶血性弧菌檢測方法。1.基于免疫磁分離技術可視化檢測副溶血性弧菌。該方法通過免疫磁分離技術富集分離副溶血性弧菌,利用二氧化錳納米探針特異性結合副溶血性弧菌,形成免疫磁珠-副溶血性弧菌-二氧化錳納米探針復合物。再在外加磁場下分離,利用抗壞血酸對磁分離產(chǎn)物進行消解。當待檢樣品中含有副溶血性弧菌時,二氧化錳納米探針會與磁富集得到的副溶血性弧菌特異性結合,經(jīng)抗壞血酸還原作用產(chǎn)生大量的錳離子,錳離子使金納米粒子聚集,金納米溶液呈藍色;反之,當待檢樣品中無副溶血性弧菌時,二氧化錳納米探針被洗去,金納米溶液呈分散狀態(tài)下的紅色。據(jù)此實現(xiàn)對待檢樣品中副溶血性弧菌的快速可視化檢測;2.基于分子印跡技術檢測副溶血性弧菌。該方法以副溶血性弧菌為模板,以聚二甲基硅氧烷聚合物,制備印跡聚合物薄膜,采用化學氣相沉積法在制備的印跡聚合物薄膜表面修飾含氟硅烷化物層。通過印跡聚合物薄膜與副溶血性弧菌的特異性結合,實現(xiàn)對副溶血性弧菌的快速、高效富集分離。進一步用煮沸法提取已捕獲的副溶血性弧菌DNA,進行聚合酶鏈式反應(PCR),實現(xiàn)對待檢樣品中副溶血性弧菌的快速準確檢測。研究結果:1.基于免疫磁分離技術可視化檢測副溶血性弧菌。該方法在最佳檢測條件下,副溶血性弧菌濃度在10~10~6 CFU·mL~(-1)范圍內(nèi),金納米溶液在525 nm處的吸光度與副溶血性弧菌濃度對數(shù)呈線性關系,線性方程為A_(norm)=-0.128 lg N+0.893(R~2=0.997),檢測限為10 CFU·mL~(-1),相對標準偏差為6.48%~9.65%(n=3),加標回收率在95.78%~101.83%之間。研究結果表明該方法特異性評價實驗結果良好。應用該方法檢測蛤蜊樣品,副溶血性弧菌的測定范圍為10~10~6 CFU·mL~(-1)。該方法在45 min內(nèi)可完成檢測,裸眼即可判讀結果,能夠滿足對副溶血性弧菌的快速檢測要求;2.基于分子印跡技術檢測副溶血性弧菌。原子力顯微鏡表征結果顯示,獲得的印跡聚合物空腔在空間和結合位點上與副溶血性弧菌的尺寸和形態(tài)完全匹配。當富集時間為2 h時,印跡聚合物薄膜對副溶血性弧菌的富集可達3.7×10~7CFU·mL~(-1)。該方法對副溶血性弧菌的測定范圍為10~4~10~8 CFU·mL~(-1),檢測限為10~4CFU·mL~(-1),特異性評價實驗結果良好,已用于蛤蜊樣品檢測,副溶血性弧菌的測定范圍為10~4~10~8 CFU·mL~(-1),結果滿意。研究結論:1.基于免疫磁分離技術檢測副溶血性弧菌,結合了免疫磁珠的高效富集和金納米的靈敏信號放大,無需增菌過程。2.基于分子印跡技術檢測副溶血性弧菌,提出了一種新型的印跡聚合物薄膜,通過在聚二甲基硅氧烷表面修飾含氟硅烷化物層,提高了印跡聚合物薄膜對副溶血性弧菌的選擇性。3.成功建立了兩種副溶血性弧菌檢測方法,即基于免疫磁分離技術和基于分子印跡技術檢測副溶血性弧菌,并對檢測效果進行評價,兩種檢測方法特異性好、靈敏度高、成本低且操作簡單、快速。4.兩種檢測方法相互補充,具有較寬的測定范圍,且分別適用于不同的檢測場景,便于在基層檢測工作中普及應用。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R155.5

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本文編號：2791940