【摘要】：目的:通過建立H22荷瘤小鼠肝癌模型,觀察適宜銅濃度對H22荷瘤小鼠腫瘤生長的作用,并初步研究適宜銅濃度對H22荷瘤小鼠EGFR通路相關(guān)蛋白的影響,探討銅促進腫瘤細(xì)胞增殖的機制。方法:選取SPF級昆明小鼠160只,隨機分為對照組(水),對照組(水+四硫鉬酸銨鹽TM),加銅組(0.06,0.30,1.50 mg/kg)和銅+TM組(0.06+1,0.30+1,1.50+1 mg/kg),共8組。用不同濃度的硫酸銅溶液給小鼠灌胃4周,使小鼠體內(nèi)獲得銅蓄積。隨后,將H22腹水瘤細(xì)胞接種于小鼠右腿部,建立H22肝癌小鼠移植瘤模型。再根據(jù)相應(yīng)的分組及硫酸銅濃度繼續(xù)持續(xù)灌胃4周。接種腫瘤以后,每三天記錄腫瘤大小一次。8周后,處死小鼠,對移植瘤的發(fā)生率、大小及重量進行分析。收集相應(yīng)器官(脾臟和胸腺)并根據(jù)公式計算臟器指數(shù)。全自動生化分析儀檢測血清白蛋白(ALB)丙氨酸,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。用ICP-MS檢測小鼠血清中的銅濃度;用實時定量PCR(Real-timePCR)方法檢測腫瘤組織VEGF、bFGF和c-Myc的mRNA的表達(dá)水平。用Western blot檢測磷酸化EGFR(pEGFR)和磷酸化Erk1/2(pErk1/2)蛋白水平。免疫組化法檢測EGFR和c-Myc蛋白水平。所有數(shù)據(jù)均用SPSS軟件處理。結(jié)果:小鼠H22移植瘤的發(fā)生率達(dá)100%;與對照組(水)和銅+TM組相比,加銅組的腫瘤均有不同程度的增長,且呈劑量反應(yīng)關(guān)系;各組小鼠的肝功能指數(shù)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和白蛋白(ALB)之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)結(jié)果顯示各組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);ICP-MS檢測小鼠血清銅結(jié)果顯示,隨著不同的灌胃劑量的增加,小鼠體內(nèi)的血清銅含量不斷增加,且相應(yīng)的銅+TM組的血清銅低于加銅組,各組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),血清銅濃度與腫瘤重量之間的相關(guān)分析結(jié)果顯示,兩者之間具有相關(guān)性(r=0.316,P0.05);加銅組的VEGF、bFGF和c-Myc的mRNA的表達(dá)量均上升,且各組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。此外,在腫瘤組織中,加銅組與相應(yīng)的銅+TM組相比顯示,EGFR、pEGFR、pErk1/2和c-Myc蛋白的表達(dá)均被上調(diào)。結(jié)論:適宜的銅濃度能促進H22移植瘤小鼠肝腫瘤的生長,TM對腫瘤生長也有抑制作用,且本實驗所用的銅灌胃劑量是在機體的允許范圍內(nèi),未對機體的肝臟和免疫系統(tǒng)造成影響。相應(yīng)蛋白的表達(dá)改變提示銅促進腫瘤生長的機制可能是通過EGFR信號通路,這需要進一步的深入研究。這些證據(jù)為肝癌的預(yù)防提供了依據(jù),同時也為防治銅污染提供了證據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R114
【圖文】：

Cu對EGFR信號通路的調(diào)節(jié)

3）將 200 uL BCA 工作液加入以上各孔。（37℃，30 min）4）用酶標(biāo)儀測得的吸光度數(shù)據(jù)擬合蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，再通過樣本孔吸光度數(shù)據(jù)計算相應(yīng)樣本的蛋白濃度（。圖2 為本實驗BCA法得到的蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線）。圖 2 蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線10.3 Western-blot 檢測 pEGFR 和 pErk1/2 蛋白（1） 制膠1） 清洗玻璃板后再用蒸餾水沖洗晾干備用。2） 制膠a 8% 分離膠的配制（12 mL）：dd H2O：5.5 mL30%丙烯酰胺： 3.3 mLPH8.8 Tris ：3 mLSDS：120 μL過硫酸銨：120 μLTEMED ：7.2 μLb 15% 分離膠的配制（12 mL）dd H2O ：2.8 mL30%丙烯酰胺混合液： 6 mLPH8.8Tris ：

圖 3 H22 荷瘤小鼠模型各組腫瘤平均體積的變化趨勢A 組：對照組（水）；B 組：對照組（水+TM）；C 組：低銅組（0.06 mg/kg）；D 組：低銅+TM 組E 組：中銅組（0.30 mg/kg)；F 組：中銅+TM 組；G 組：高銅組（1.50 mg/kg）；H：高銅+TM 組

【參考文獻】

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本文編號：2775636