【摘要】：目的探討不同劑量丙烯酰胺暴露對(duì)大鼠腸道損傷的程度,以及干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)對(duì)丙烯酰胺暴露大鼠腸黏膜屏障功能和腸道菌群的保護(hù)效果。方法1.動(dòng)物分組:105只雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按體質(zhì)量隨機(jī)分為7組(正常對(duì)照組、低劑量丙烯酰胺組、中劑量丙烯酰胺組、高劑量丙烯酰胺組、干酪乳桿菌干預(yù)低劑量丙烯酰胺組、干酪乳桿菌干預(yù)中劑量丙烯酰胺組和干酪乳桿菌干預(yù)高劑量丙烯酰胺組),每組15只,每天保證足夠的基礎(chǔ)飼料及飲水。按以下方法給藥:正常對(duì)照組,給予生理鹽水灌胃;低、中、高劑量丙烯酰胺組分別給予5、15、30mg/(kg·bw·d)丙烯酰胺灌胃;干酪乳桿菌干預(yù)低、中、高劑量丙烯酰胺組先給予2.1x10~9 CFU/(kg·bw·d)干酪乳桿菌灌胃,1 h后分別給予5、15、30 mg/(kg·bw·d)丙烯酰胺灌胃。實(shí)驗(yàn)周期為4周。最后一次灌胃后,用清潔籠無菌收集各組大鼠糞便。禁食12 h后,60 mg/kg戊巴比妥鈉溶液麻醉,于腹主動(dòng)脈處取血,分離血漿,留取小腸組織,在距離回盲瓣5 cm處的小腸組織進(jìn)行固定和凍存,用于后續(xù)腸組織透射電鏡觀察和蛋白檢測(cè)。2.透射電鏡觀察大鼠小腸組織超微結(jié)構(gòu)的改變。3.采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)大鼠血漿中D-乳酸(d-lactic acid,D-LA)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)和腸脂肪酸結(jié)合蛋白(intestinal fatty acid-binding protein,iFABP)的水平變化。4.蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)各組大鼠小腸組織緊密連接蛋白ZO-1和occludin蛋白表達(dá)水平。5.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組大鼠糞便中大腸桿菌(Escherichia coli)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、乳酸桿菌(Lactobacillus)、脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)及柔嫩梭菌(Clostridium leptum)的含量。結(jié)果1.透射電鏡結(jié)果顯示,正常對(duì)照組大鼠小腸微絨毛排列整齊、豐富;與正常對(duì)照組相比,低劑量丙烯酰胺組大鼠小腸微絨毛無明顯變化,中、高劑量丙烯酰胺組大鼠小腸微絨毛排列稀疏、脫落,微絨毛長(zhǎng)度分別縮短了17.6%和36.2%,具有顯著性差異(P0.05);干酪乳桿菌干預(yù)低、中、高劑量丙烯酰胺組大鼠小腸微絨毛排列情況均得到不同程度的改善,微絨毛長(zhǎng)度分別增長(zhǎng)了42.9%、50.0%和29.8%,具有顯著性差異(P0.05)。2.與正常對(duì)照組相比,低劑量丙烯酰胺組大鼠血漿中D-LA、DAO和iFABP水平均無明顯變化,中、高劑量丙烯酰胺組大鼠血漿中D-LA、DAO和iFABP水平明顯升高(P0.05);干酪乳桿菌干預(yù)中、高劑量丙烯酰胺組大鼠血漿中D-LA、DAO和iFABP水平顯著降低(P0.05)。3.與正常對(duì)照組相比,低、中、高劑量丙烯酰胺組大鼠小腸緊密連接蛋白ZO-1表達(dá)水平顯著降低(P0.05),中、高劑量丙烯酰胺組大鼠小腸緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)水平顯著降低(P0.05);而干酪乳桿菌干預(yù)低、中劑量丙烯酰胺組大鼠小腸緊密連接蛋白ZO-1表達(dá)水平顯著升高(P0.05),干酪乳桿菌干預(yù)中、高劑量丙烯酰胺組大鼠小腸緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。4.與正常對(duì)照組相比,中、高劑量丙烯酰胺組大鼠糞便中大腸桿菌和糞腸球菌的數(shù)量明顯升高(P0.05),雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯降低(P0.05),脆弱擬桿菌和柔嫩梭菌的數(shù)量無明顯變化(P0.05);而干酪乳桿菌干預(yù)組大鼠糞便中大腸桿菌和糞腸球菌的數(shù)量均有不同程度的減少,雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量均有不同程度的增加,脆弱擬桿菌和柔嫩梭菌的數(shù)量無明顯變化(P0.05)。結(jié)論1.低劑量的丙烯酰胺對(duì)大鼠的腸道損傷程度較輕,而中、高劑量的丙烯酰胺則會(huì)造成大鼠腸黏膜屏障功能的破壞和腸道菌群的失衡,并且隨著劑量的增加,所造成的損傷越嚴(yán)重。2.干酪乳桿菌對(duì)丙烯酰胺所誘導(dǎo)的腸道損傷具有一定程度的保護(hù)效果,其機(jī)制可能與改善腸黏膜屏障功能,調(diào)節(jié)腸道菌群有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R151
【圖文】：

結(jié) 果結(jié) 果干酪乳桿菌對(duì)丙烯酰胺暴露大鼠小腸組織超微結(jié)構(gòu)的影響透射電鏡結(jié)果顯示，正常對(duì)照組大鼠小腸微絨毛排列整齊、豐富；與正常相比，低劑量丙烯酰胺組大鼠小腸微絨毛無明顯變化，中、高劑量丙烯酰胺小腸微絨毛排列稀疏、脫落，微絨毛長(zhǎng)度分別縮短了 17.6%和 36.2%，具有差異（P＜0.05）；干酪乳桿菌干預(yù)低、中、高劑量丙烯酰胺組大鼠小腸微絨情況均得到不同程度的改善，微絨毛長(zhǎng)度分別增長(zhǎng)了 42.9%、50.0%和 29.8%顯著性差異（P＜0.05）。（圖 1 和表 1）

2 干酪乳桿菌對(duì)大鼠小腸緊密連接蛋白 ZO-1 和 occludin 的影響；(B)低劑量丙烯酰胺組；(C)中劑量丙烯酰胺組；(D)高劑量丙烯酰胺劑量丙烯酰胺組；(F)干酪乳桿菌干預(yù)中劑量丙烯酰胺組；(G)干酪乳組照組相比，P＜0.05；b與低劑量丙烯酰胺組相比，P＜0.05；c與中劑量05；d與高劑量丙烯酰胺組相比，P＜0.05。菌對(duì)丙烯酰胺暴露大鼠腸道菌群的影響株擴(kuò)增曲線標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行稀釋，稀釋的濃度梯度為 10 倍，反應(yīng)得到各圖 3），結(jié)果顯示，各菌株的熒光強(qiáng)度隨著 DNA 拷貝數(shù)的增加程度時(shí)，熒光強(qiáng)度不會(huì)繼續(xù)增加，進(jìn)入平臺(tái)期，因此，在達(dá)和 DNA 拷貝數(shù)的線性關(guān)系是后續(xù)對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行定量計(jì)算

17圖 6 干酪乳桿菌對(duì)大鼠腸道菌群的影響正常對(duì)照組；(B)低劑量丙烯酰胺組；(C)中劑量丙烯酰胺組；(D)高劑量丙烯酰胺組；(E)干桿菌干預(yù)低劑量丙烯酰胺組；(F)干酪乳桿菌干預(yù)中劑量丙烯酰胺組；(G)干酪乳桿菌干預(yù)量丙烯酰胺組a與正常對(duì)照組相比，P＜0.05；b與低劑量丙烯酰胺組相比，P＜0.05；c與中劑量丙烯酰胺比，P＜0.05；d與高劑量丙烯酰胺組相比，P＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

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本文編號(hào)：2771572