發(fā)布時(shí)間：2020-07-07 02:20

【摘要】：目的:金屬鎳廣泛應(yīng)用于工業(yè)和人們?nèi)粘Ｉ钪?是導(dǎo)致過(guò)敏性接觸性皮炎最常見(jiàn)的過(guò)敏原。鎳過(guò)敏一旦發(fā)生便可持續(xù)數(shù)年甚至終身,目前對(duì)于鎳過(guò)敏的治療均只能控制癥狀,無(wú)法降低對(duì)鎳的過(guò)敏性,因此闡明鎳過(guò)敏的發(fā)病機(jī)制,尋找鎳過(guò)敏早期生物學(xué)效應(yīng)指標(biāo),對(duì)鎳過(guò)敏的早期診斷和治療均具有重要意義。本研究首先以鎳暴露工人為研究對(duì)象,探索鎳暴露工人外周血淋巴細(xì)胞亞群和血清細(xì)胞因子的改變,尋找鎳過(guò)敏早期生物學(xué)效應(yīng)指標(biāo);同時(shí)通過(guò)構(gòu)建鎳致敏小鼠模型,檢測(cè)鎳致敏小鼠淋巴細(xì)胞增殖、活化功能的改變,為鎳過(guò)敏的發(fā)病機(jī)制提供線索。方法:以整群抽樣的方法,選擇湖北省某電子廠70名鎳作業(yè)工人為暴露組,同地區(qū)某食品廠126名工人為對(duì)照組,開(kāi)展橫斷面分子流行病學(xué)研究。通過(guò)2.5%和5.0%硫酸鎳斑貼實(shí)驗(yàn)將暴露組分為斑貼陰性組和斑貼陽(yáng)性組。暴露工廠車間空氣鎳暴露水平經(jīng)乙炔-空氣火焰原子吸收光譜法檢測(cè);暴露工人皮膚鎳濃度經(jīng)電感耦合等離子體質(zhì)譜法及外標(biāo)法檢測(cè);尿鎳濃度經(jīng)分光光度計(jì)法檢測(cè)。EDTA抗凝靜脈血做血常規(guī)分析;外周血淋巴細(xì)胞亞群百分比采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè),并結(jié)合血常規(guī)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值。流式液相多重蛋白定量技術(shù)檢測(cè)血清細(xì)胞因子水平。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以8周齡C57BL/6雌性小鼠為實(shí)驗(yàn)鼠,開(kāi)展淋巴細(xì)胞增殖、活化功能及NK細(xì)胞殺傷功能的研究。通過(guò)上背部皮內(nèi)注射聯(lián)合背部封閉涂抹致敏、右耳和下背部激發(fā)的方式構(gòu)建NiS04致敏小鼠模型,通過(guò)激發(fā)后48h雙側(cè)耳重量之差、激發(fā)后24h和48h耳腫、激發(fā)后48h激發(fā)部位皮膚變化與組織病理變化進(jìn)行模型評(píng)價(jià)。激發(fā)后48h取樣進(jìn)行各指標(biāo)檢測(cè)。其中,脾淋巴細(xì)胞增殖的檢測(cè)采用EDU滲入法,外周血淋巴細(xì)胞亞群分析、脾和淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞活化的檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù),脾NK細(xì)胞殺傷功能的檢測(cè)采用CCK-8法和CFSE/Annectin-V/7-AAD流式三染法;同時(shí)取激發(fā)后48h脾單個(gè)淋巴細(xì)胞體外NiS04共培養(yǎng)24h,進(jìn)行特異性淋巴細(xì)胞增殖和活化功能檢測(cè)。所有數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS Statistics 22.0軟件進(jìn)行分析。人群研究部分,年齡、BMI、外周血淋巴細(xì)胞亞群等指標(biāo)符合正態(tài)分布,以x±s的形式表示;尿鎳水平×100倍自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換、血清MCP-1+3自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布,以P50(P25,P75)的形式表示,以轉(zhuǎn)換后的形式用于差異性比較;該2類指標(biāo)在對(duì)照組與暴露組間的差異性比較采用t檢驗(yàn);在對(duì)照組、低暴露組、高暴露組三組間和對(duì)照組、斑貼陰性組、斑貼陽(yáng)性組三組間的比較采用單因素方差分析,三組間每?jī)蓛山M比較采用LSD-t檢驗(yàn),趨勢(shì)性檢驗(yàn)采用一般線性模型。血清IL-1β、IL-4、IL-6、TNF-α檢出率均低于50%,該類指標(biāo)檢出率與吸煙、飲酒在對(duì)照組與暴露組兩組間的差異性比較和在對(duì)照組、斑貼陰性組、斑貼陽(yáng)性組三組間的差異性比較采用Pearsonχ2檢驗(yàn)。血清IL-8、MIP-1β屬于偏態(tài)分布計(jì)量資料,以P50(P25,P75)的形式表示;在對(duì)照組與暴露組間的差異性比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn);在對(duì)照組、低暴露組、高暴露組三組間和對(duì)照組、斑貼陰性組、斑貼陽(yáng)性組三組間的比較以及三組間每?jī)蓛山M的比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。暴露組皮膚鎳濃度×100倍自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換、暴露工齡×100倍自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換呈正態(tài)分布,以P50(P25,P75)的形式表示,以轉(zhuǎn)換后的形式用于Pearson相關(guān)分析,原形式用于Spearman等級(jí)相關(guān)分析。其中,皮膚鎳濃度與尿鎳水平、總?cè)巳耗蜴囁脚c外周血淋巴細(xì)胞亞群等指標(biāo)、暴露組暴露工齡與外周血淋巴細(xì)胞亞群等指標(biāo)的相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析,總?cè)巳耗蜴囁脚c血清細(xì)胞因子水平、暴露組暴露工齡與血清細(xì)胞因子水平的相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究部分,所有指標(biāo)均以x±s的形式表示,對(duì)照鼠與鎳致敏鼠兩組間的差異性比較及不同濃度培養(yǎng)孔間的差異性比較均采用t檢驗(yàn)。選用雙側(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)用于本研究統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取P0.05。結(jié)果:1、分子流行病學(xué)研究:鎳暴露工廠車間空氣中鎳濃度范圍為0.0054mg/m3～0.3757mg/m3,低于《車間空氣中鎳及其無(wú)機(jī)化合物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB16210—1996)規(guī)定的可溶性鎳化合物最高容許濃度0.5mg/m3;暴露組皮膚鎳濃度為0.42(0.23,0.60)μg/cm2,尿鎳水平為13.60(7.35,28.76)μg/L,兩者呈正相關(guān)(r=0.332,P=0.012),同時(shí),暴露組尿鎳水平顯著高于對(duì)照組6.02(3.93,10.97)μg/L(P0.001)。暴露組斑貼陽(yáng)性工人共14人,斑貼陽(yáng)性率20.00%(14/70),證明我國(guó)當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)無(wú)法為高敏感個(gè)體提供足夠保護(hù)。暴露組外周血白細(xì)胞、CD4+/CD8'、嗜中性粒細(xì)胞分別為7.03±1.67×1O9/L、1.68±0.72、4.54±1.45×109/L,顯著高于對(duì)照組(6.23±1.35×109/L、1.27±0.43、3.7J±1.07× 1 09/L)(P0.05),CD8+T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞和血小板分別為 0.52±0.26× 1 09/L、0.34±0.18×109/L、200.66±69.01×109/L,顯著低于對(duì)照組(0.60±0.22×109/L、0.45±0.25× 1 09/L、229.85±51.48× 1 09/L)(P0.05)。暴露組血清 IL-4 檢出率為 10.00%,顯著低于對(duì)照組(51.61%)(P0.001):IL-8 水平為 6.70(5.61,9.61)pg/mL,顯著低于對(duì)照組[10.45(4.62,40.90)pg/mL](P=0.001);MIP-1β 水平為 51.72(27.43,79.29)pg/mL,顯著高于對(duì)照組[33.66(17.32,55.97)pg/mL](P=0.001),提示低濃度鎳暴露可致作業(yè)工人血常規(guī)指標(biāo)、淋巴細(xì)胞亞群及血清細(xì)胞因子發(fā)生改變。相關(guān)分析結(jié)果顯示:全人群尿鎳水平與外周血白細(xì)胞(r=0.244,P=0.001)、CD4+/CD8 +(r=0.177,P=0.015)、嗜中性粒細(xì)胞(r=0.285,P0.001)呈正相關(guān),與血清IL-8(r=-0.150,P=0.040)呈負(fù)相關(guān);按暴露組尿鎳水平中位數(shù)(13.60μg/L)將暴露組分為低暴露組(尿鎳≤13.60μg/L,n=35)和高暴露組(尿鎳13.60μg/L,n=35)后,低暴露組白細(xì)胞、CD4+/CD8+、嗜中性粒細(xì)胞分別為6.89±1.89×109/L、1.64±0.68、4.35±1.51×109/L,高暴露組分別為 7.16±1.44×109/L、1.72±0.77、4.73±1.39×109/L,均顯著高于對(duì)照組(6.23±1.35×109/L、1.27±0.43、3.71±1.07×109/L)(P0.05);血清 IL-8在低、高暴露組分別為 6.90(5.51,6.90)pg/mL 和 6.59(5.93,8.43)pg/mL,均顯著低于對(duì)照組[10.45(4.62,40.90)pg/mL](P0.05)。提示外周血白細(xì)胞、CD4+/CD8+、嗜中性粒細(xì)胞和血清IL-8等4項(xiàng)指標(biāo)對(duì)鎳暴露更敏感。尚未發(fā)現(xiàn)外周血淋巴細(xì)胞和血清細(xì)胞因子與工齡的相關(guān)關(guān)系(P0.05)。鎳暴露組中斑貼陽(yáng)性組尿鎳水平為13.66(7.71,30.04)μg/L,與斑貼陰性組[10.82(2.46,31.05)μg/L]差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.513);斑貼陽(yáng)性組外周血淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞分別為1.69±0.42×109/L、1.12±0.28×109/L,均同時(shí)顯著低于斑貼陰性組(2.08±0.67×109/L、1.45±0.51×109/L)和對(duì)照組(2.10±0.51×109/L、1.41±0.38×109/L)(P0.05),血清 MCP-1 為 116.49(48.76,147.80)pg/mL,顯著高于斑貼陰性組[57.03(37.43,85.85)pg/mL](P=0.002)和對(duì)照組[58.07(47.21,73.25)pg/mL](P=0.008),但斑貼陰性組和對(duì)照組該3項(xiàng)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示該3項(xiàng)指標(biāo)可能作為篩選鎳過(guò)敏的早期生物學(xué)效應(yīng)指標(biāo)。2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:鎳致敏鼠激發(fā)后48h雙側(cè)耳重量之差、激發(fā)后24h和48h耳腫分別為5.00±3.81mg、0.05±0.04mm、0.06±0.03mm,均顯著高于對(duì)照鼠(-0.17±1.47mg、0.00±0.01mm、0.01±0.01mm)(P0.05);鎳致敏鼠激發(fā)后48h激發(fā)耳毛細(xì)血管充血、皮膚微紅,背部激發(fā)處皮膚與對(duì)照鼠無(wú)明顯差異;鏡下可見(jiàn)鎳致敏鼠激發(fā)耳及背部激發(fā)處皮膚炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較對(duì)照鼠明顯。提示鎳致敏小鼠模型雖尚未出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的典型超敏反應(yīng)皮炎,但對(duì)致敏原已產(chǎn)生了可檢測(cè)的免疫應(yīng)答反應(yīng),可認(rèn)為遲發(fā)型超敏反應(yīng)形成。鎳致敏鼠外周血白細(xì)胞、B細(xì)胞分別為4.62±1.10×109/L、0.82±0.31×109/L,顯著低于對(duì)照鼠(6.10±0.93×109/L、1.43±0.46× 109/L)(P0.05),結(jié)合鎳致敏鼠激發(fā)部位皮膚組織出現(xiàn)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),推測(cè)該結(jié)果可能由于鎳致敏鼠外周血細(xì)胞向激發(fā)部位遷移所致;鎳致敏鼠脾T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞增殖百分比分別為(1.51±±0.26)%、(0.59±0.11)%,顯著高于對(duì)照鼠[(1.16±0.22)%、(0.42±0.11)%](P0.05),提示鎳CD8+T細(xì)胞可能參與鎳致過(guò)敏性接觸性皮炎的形成;鎳致敏鼠脾淋巴細(xì)胞CD69表達(dá)率為(0.80±0.24)%,顯著低于對(duì)照鼠[(1.58±0.32)%](P=0.001),CD44 的表達(dá)率在兩組間無(wú)明顯差異,但鎳致敏鼠淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞CD44表達(dá)率為(70.95±3.31)%,則顯著高于對(duì)照鼠[(60.23±4.96)%](P=0.001),提示鎳致敏鼠淋巴結(jié)部位的淋巴細(xì)胞發(fā)生活化;鎳致敏鼠脾NK細(xì)胞對(duì)YAC-1細(xì)胞的殺傷率(%)與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。鎳致敏鼠與對(duì)照鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)NiSO4體外共培養(yǎng)24h,對(duì)照鼠15μg/mLNiSO4培養(yǎng)孔CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞分別為2.00±0.89、2.00±1.67,顯著低于0μg/mLNiSO4培養(yǎng)孔(4.33±0.58、5.67±1.53)(P0.05),提示 NiS04對(duì) CD8+T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞存在毒效應(yīng),這與本研究第一部分發(fā)現(xiàn)鎳暴露工人外周血CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞下降一致;鎳致敏鼠15μg/mLNiS04培養(yǎng)孔T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞增殖數(shù)分別為33.07±6.32、24.47±5.25,顯著高于0μg/mLNiSO4培養(yǎng)孔(19.50±4.80、14.50±1.91)(P0.05),提示鎳致敏鼠產(chǎn)生鎳特異性T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞;而鎳致敏鼠CD8+T細(xì)胞在15μg/mL NiSO4培養(yǎng)孔為9.50±3.62,雖高于對(duì)照孔4.91±2.49,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),可能由于體外NiSO4共培養(yǎng)時(shí),CD8+T細(xì)胞對(duì)鎳的特異性免疫增殖效應(yīng)無(wú)法完全掩蓋鎳的毒效應(yīng)所致。結(jié)論:1、低濃度鎳暴露可致作業(yè)工人出現(xiàn)血常規(guī)指標(biāo)、外周血淋巴細(xì)胞亞群及血清細(xì)胞因子水平的改變,其中,白細(xì)胞、CD4+/CD8+、嗜中性粒細(xì)胞、IL-8等指標(biāo)對(duì)鎳暴露更為敏感;2、外周血淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞,以及血清MCP-1可能作為篩選鎳過(guò)敏人群的早期生物學(xué)效應(yīng)指標(biāo);3、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞均參與鎳致ACD的形成,但鎳對(duì)CD8+T細(xì)胞同時(shí)存在明顯的毒效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R135
【圖文】：

物學(xué)效應(yīng)指標(biāo)；斑貼陰性組外周血ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞為０．８１±０．３０ｘｌ０９／Ｌ，顯著高于斑貼陽(yáng)逡逑性組（０．６３±０．２２ｘｌ0９／Ｌ）邋００．００４）和對(duì)照組（０．７０±０．２0ｘｌ0７Ｌ）邋（Ｐ＝０．０１４），而斑貼逡逑陽(yáng)性組與對(duì)照組外周血ＣＤｆＴ細(xì)胞差異無(wú)顯著性（Ｆ＞０．０５），見(jiàn)圖１－４。逡逑ｒ—Ｐ＝０．００８逡逑？邐Ｐ＝０．００９邐５１邐１邐１逡逑５１邐｜邐：邐１邐尸＝０．０１３逡逑＾邋４－邋＾邋－邋１邋：＇逡逑ｘ邐４邐ｘ逡逑ｉ邐？：丨益：？奐邐，邐ｓ邋３＇逡逑Ｉ，邋Ｔ邋Ｔ邋＾邋ｆ，琴擎邋ｊ逡逑ｉ邐Ｈ逡逑0Ｊ邐．邐．邐１邐邋0Ｊ邐１邐１邐．邐逡逑刈Ｈｕｍ執(zhí)粘RG對(duì)照ｍ諛粘削？川斑阽ｍｎｍ逡逑（ｎ＝１２６）邋（ｎ＊＊５６）邋（ｎ＝１４）邐（ｎ＝邋１２６）邋（ｎ＂＊５６）邋（ｎ＝邋１４）逡逑Ｐ＝０．００４逡逑Ｉ邐Ｉ逡逑Ｐ＝０．０１４逡逑２．０Ｉ邐Ｉ逡逑?邐＂逡逑ｘ邐１．５－邐１逡逑－邐▲逡逑｜邋１0＇暴：蠢逡逑ｐ邋０５－邐＾邐－Ｎ＊１逡逑°邋ｏ．ｏ邐．邐．邐，邐逡逑對(duì)照ｍ諛ＷＡｍ約丨斑咕ｗｍ：ｉｉＬ逡逑（ｎ＝邋１２６）邋＜ｎ＊？５６）邐（ｎ＝邋１４）逡逑圖１－４對(duì)照組、斑貼陰性組、斑貼陽(yáng)性組外周血淋巴細(xì)胞、Ｔ細(xì)胞、ＣＤ４；Ｔ細(xì)胞比較逡逑２．８斑貼陽(yáng)性組與斑貼陰性組血清細(xì)胞因子的比較逡逑斑貼陽(yáng)性組與斑貼陰性組血清細(xì)胞因子水平的比較發(fā)現(xiàn)，斑貼陽(yáng)性組血清ＭＣＰ－１逡逑水平為丨邋１６．４９邋（４８．７６

３討論逡逑職業(yè)性過(guò)敏性接觸性皮炎（Ｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ邋ａｌｌｅｒｇｉｃ邋ｃｏｎｔａｃｔ邋ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，ＯＡＣＤ）為我逡逑國(guó)法定職業(yè)病，硫酸鎳是引起ＯＡＣＤ常見(jiàn)的過(guò)敏原。我國(guó)《工作場(chǎng)所空氣中鎳及其逡逑化合物的測(cè)定方法（ＧＢＺ／Ｔ１６０．１６—２００４）》規(guī)定乙炔－空氣火焰原子吸收光譜法為工逡逑作場(chǎng)所空氣中鎳及其化合物濃度的測(cè)定方法，當(dāng)前《車間空氣中鎳及其無(wú)機(jī)化合物Ｒ逡逑生標(biāo)準(zhǔn)》（ＧＢ１６２１０—丨９％）曾規(guī)定（按Ｎｉ計(jì)）可溶性鎳化合物最高容許濃度為逡逑０．５ｍｇ／ｍ３，金屬鎳及難溶性鎳化合物為ｌｍｇ／ｍ３，該標(biāo)準(zhǔn)的提出屯要廟十鎳的般山；逡逑性，不能保護(hù)感受性高的人員免受鎳的致敏作用［５７］。國(guó)外大部分國(guó)家＃５８］規(guī)定車間逡逑空氣中可溶性鎳化合物的職業(yè)接觸限值為０．１ｍｇ／ｍ３，遠(yuǎn)低于我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)。德國(guó)技術(shù)參逡逑３１逡逑

EDU澄入法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾琳巴細(xì)胞增殖百分比;^:對(duì)段鼠脾淋巴細(xì)胞:B:鑲致敏鼠脾淋巴細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙顯莉;刁穎;賀銀麗;徐艷峰;郭s

本文編號(hào)：2744502