【摘要】：目的:探討硫酸鈹(Beryllium sulfate,BeSO4)致人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)的炎癥反應(yīng)及其對(duì)micro RNA表達(dá)譜的影響。方法:1.以16HBE細(xì)胞為研究對(duì)象,用不同濃度BeSO4(0、100、150、200、250、300μmol/L)處理細(xì)胞48 h,采用MTT法檢測(cè)其對(duì)16HBE細(xì)胞活力的影響,分別使用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、免疫印跡試驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)16HBE細(xì)胞內(nèi)白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、干擾素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible Nitric Oxide Synthase,i NOS)的表達(dá)。2.采用small RNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)BeSO4處理后16HBE細(xì)胞內(nèi)miRNA的表達(dá),并按|log2Fold Change|1和P0.05的標(biāo)準(zhǔn),篩選差異表達(dá)較大的miRNAs。使用Target Scan、miRanda和Pita數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)部分miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),利用DAVID在線工具對(duì)靶基因進(jìn)行Gene Ontology(GO)分析和the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway富集分析,運(yùn)用Cytoscape軟件構(gòu)建靶基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)驗(yàn)證候選miRNAs的表達(dá)。3.選擇目標(biāo)miRNA進(jìn)行功能分析,構(gòu)建miRNA mimics、miRNA inhibitor,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)處理16HBE細(xì)胞,隨后用BeSO4處理,分別采用ELISA、Western Blot法檢測(cè)IL-10、TNF-α、IFN-γ、COX-2及i NOS的表達(dá),探討增加或減少miRNA在BeSO4誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用。使用miRanda、Target Scan、DIANA Tools和miRwalk數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)目標(biāo)miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并與m RNA測(cè)序結(jié)果(課題組前期轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果)取交集,繪制韋恩圖,采用Target Scan預(yù)測(cè)miR-663b和靶基因LIF的結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,BeSO4抑制16HBE細(xì)胞的活力,且存在劑量反應(yīng)關(guān)系,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),BeSO4對(duì)16HBE細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為260μmol/L;BeSO4可致16HBE細(xì)胞內(nèi)IL-10、TNF-α、IFN-γ、COX-2及i NOS等炎癥相關(guān)因子表達(dá)增加(P0.05)。2.small RNA測(cè)序:與對(duì)照組相比,BeSO4處理組16HBE細(xì)胞中有179個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,其中上調(diào)的有88個(gè)、下調(diào)的有91個(gè)。這些差異表達(dá)的miRNAs中已命名有93個(gè)、未命名有86個(gè)。3.符合差異表達(dá)篩選標(biāo)準(zhǔn)的miRNAs有28個(gè),包括18個(gè)上調(diào)的miRNAs和10個(gè)下調(diào)的miRNAs。對(duì)28個(gè)miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),23個(gè)miRNAs預(yù)測(cè)的共同靶基因轉(zhuǎn)錄本有27160(基因5140)個(gè),其余5個(gè)miRNAs沒(méi)有預(yù)測(cè)到共同的靶基因。預(yù)測(cè)得到的靶基因主要位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中,與轉(zhuǎn)錄、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白結(jié)合等生物學(xué)作用有關(guān)。q RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果表明miR-1306-5p、miR-193b-5p、miR-4485-3p和miR-877-5p表達(dá)上調(diào),miR-23b-5p和miR-663b表達(dá)下調(diào),與測(cè)序結(jié)果一致。4.與對(duì)照組相比,miR-663b mimics明顯下調(diào)16HBE細(xì)胞內(nèi)IL-10、TNF-α、IFN-γ、COX-2及i NOS等炎癥相關(guān)因子的表達(dá)(P0.05),減輕BeSO4對(duì)16HBE細(xì)胞的炎癥反應(yīng),而miR-663b inhibitor則增加了16HBE細(xì)胞內(nèi)IL-10、TNF-α、IFN-γ、COX-2及i NOS等炎癥相關(guān)因子的表達(dá)(P0.05)。5.預(yù)測(cè)到miR-663b的靶基因共有271個(gè),與m RNA測(cè)序結(jié)果有交集的有65個(gè)。通過(guò)軟件分析miR-663b與LIF的3’UTR存在結(jié)合位點(diǎn),LIF是miR-663b的潛在靶基因。而基因LIF主要參與JAK-STAT信號(hào)通路。結(jié)論:1.BeSO4可致16HBE細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。2.BeSO4可致16HBE細(xì)胞內(nèi)88個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào),91個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。3.miR-663b的潛在靶基因是LIF。miR-663b過(guò)表達(dá)可減輕BeSO4致16HBE細(xì)胞的炎癥反應(yīng);而miR-663b的下調(diào)則加重BeSO4致16HBE細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114
【圖文】：

第 3 章 結(jié) 果第 3 章 結(jié) 果對(duì) 16HBE 細(xì)胞活力的影響估 BeSO4對(duì) 16HBE 細(xì)胞的毒性作用，用濃度為 0、10ol/L 的 BeSO4處理 16HBE 細(xì)胞 48 h，MTT 檢測(cè) 16H對(duì)照組相比，不同濃度的 BeSO4抑制 16HBE 細(xì)胞的，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且 BeSO4對(duì) 1（IC50）約為 260 μmol/L，見圖 3.1。

圖 3.2 BeSO4對(duì) 16HBE 細(xì)胞內(nèi) IL-10、TNF-α和 IFN-γ的影響A：IL-10 蛋白表達(dá)量；B：TNF-α蛋白表達(dá)量；C：IFN-γ蛋白表達(dá)量（*與對(duì)照組相比，P＜0.05）3.3 BeSO4對(duì) 16HBE 細(xì)胞內(nèi) COX-2、iNOS 蛋白表達(dá)的影響用濃度為 0、100、150、200、250、300 μmol/L 的 BeSO4處理 16HBE 細(xì)胞48 h，用 Western Blot 法檢測(cè)細(xì)胞中 COX-2、iNOS 蛋白的表達(dá)水平。與對(duì)照組相比，不同濃度的 BeSO4處理增加 16HBE 細(xì)胞種 COX-2、iNOS 蛋白的表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且隨著 BeSO4濃度的增大，COX-2、iNOS蛋白的表達(dá)水平也逐漸增加，見圖 3.3。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周佳慧;王君艷;;炎癥反應(yīng)期間胃腸道的保護(hù)策略[J];影像研究與醫(yī)學(xué)應(yīng)用;2017年09期

2 ;每一餐都引發(fā)炎癥[J];大自然探索;2017年04期

3 ;健康老人抑郁癥狀與炎癥反應(yīng)相關(guān)[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年04期

4 楊良斌;;炎癥反應(yīng) 數(shù)據(jù)聚焦分析[J];科學(xué)觀察;2009年04期

5 劉國(guó)掾;;接種過(guò)金黃色葡萄球菌試驗(yàn)性傷口的炎癥反應(yīng)和血流[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).創(chuàng)傷與外科基本問(wèn)題分冊(cè);1989年01期

6 段林;高根五;;炎癥反應(yīng)物測(cè)定用于外科嚴(yán)重感染的早期診斷[J];醫(yī)學(xué)科技;1989年01期

7 王梅;袁玉剛;楊陽(yáng);孫云云;丁巖冰;楊林;;大黃早期干預(yù)對(duì)高脂血癥性胰腺炎炎癥反應(yīng)和血脂代謝的影響[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2019年12期

8 費(fèi)雯婕;張琳;宋光耀;;代謝性炎癥反應(yīng)與胰島素抵抗關(guān)系研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年10期

9 何賢輝;何健;歐陽(yáng)東云;;細(xì)胞自噬與炎癥反應(yīng)相互作用的研究進(jìn)展[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2013年02期

10 王娟,趙龍吟,司書毅;動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中的炎癥反應(yīng)[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2004年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張彥峰;莫紅纓;黎毅敏;;髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1結(jié)合多肽與膿毒癥炎癥反應(yīng)[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2009年

2 歐陽(yáng)文;何慧娟;王意;;圍術(shù)期炎癥反應(yīng)與術(shù)后認(rèn)知功能障礙(英文)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第二十次全國(guó)麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

3 濮紅梅;尹忠誠(chéng);劉秉成;李勝開;馮錦紅;;血液透析患者血清IL-10與炎癥反應(yīng)及營(yíng)養(yǎng)狀況的關(guān)系研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 陸志偉;黃慧;姜純國(guó);徐作軍;;輔助性T淋巴細(xì)胞與特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化關(guān)系的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

5 王婧;;血管重塑的炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)張錫鈞基金第十四屆全國(guó)青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文綜合摘要、中國(guó)生理學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2017年

6 張衛(wèi)茹;侯凡凡;劉尚喜;郭志堅(jiān);周展眉;;晚期糖基化終產(chǎn)物增加動(dòng)脈粥樣硬化部位的炎癥反應(yīng)[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

7 俞佳;王仲;;內(nèi)源性氣體信號(hào)分子硫化氫與炎癥反應(yīng)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十三次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)大會(huì)論文集[C];2010年

8 周曉艷;徐營(yíng)營(yíng);謝兆宏;許繼平;畢建忠;;炎癥反應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的研究進(jìn)展[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

9 肖晗;李昊;王晶晶;張幼怡;;白介素18剪切活化啟動(dòng)急性β腎上腺素受體激動(dòng)引起的心臟炎癥反應(yīng)及纖維化[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)張錫鈞基金第十四屆全國(guó)青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文綜合摘要、中國(guó)生理學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2017年

10 張會(huì)云;崔克亮;曹書華;;炎癥反應(yīng),凝血機(jī)制與MODS的發(fā)病機(jī)理的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診分會(huì)第五屆全國(guó)危重病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 王蔚;我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[N];大眾科技報(bào);2007年

2 楊一唯邋記者 王春;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 記者白毅;炎癥反應(yīng)中淋巴結(jié)重塑新機(jī)制被揭示[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

4 記者 徐瑞哲;第三者“插足”抑制炎癥反應(yīng)[N];解放日?qǐng)?bào);2007年

5 知陶;把炎癥反應(yīng)排除在外[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

6 記者 耿挺;尋找炎癥反應(yīng)蛋白[N];上海科技報(bào);2007年

7 信文;“IL-10”蛋白調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 韓秀霞;Capase-12蛋白參與炎癥反應(yīng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

9 北京協(xié)和醫(yī)院教授 陳德昌;諾獎(jiǎng)為科研帶來(lái)的啟示[N];健康報(bào);2019年

10 陳金偉;通心絡(luò)可抑制動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高琳;MiRNA-137通過(guò)靶向調(diào)控MK2抑制脊髓損傷后炎癥反應(yīng)及凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2019年

2 王楠;超短波通過(guò)調(diào)節(jié)MK2/TNF-α通路抑制炎癥反應(yīng)促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2019年

3 梁珂;脾酪氨酸激酶在動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

4 張新勝;辛酸抑制炎癥反應(yīng)改善動(dòng)脈粥樣硬化及其機(jī)制研究[D];軍事科學(xué)院;2019年

5 吳華;不同膜平衡超濾影響體外循環(huán)炎癥反應(yīng)的臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 倪志宇;CCK-8對(duì)炎癥反應(yīng)中促炎及抗炎性細(xì)胞因子表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

7 林淑們;調(diào)控凝血活性對(duì)老年大鼠炎癥反應(yīng)影響的機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

8 宋爽;PRRSV誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)及其調(diào)控機(jī)制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 柳楠;腸道病毒分子流行病學(xué)及腸道病毒71型感染致炎癥反應(yīng)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

10 李鵬飛;β-arrestins對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中炎癥反應(yīng)的調(diào)控機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 易珊;硫酸鈹致16HBE細(xì)胞炎癥反應(yīng)及其對(duì)microRNA表達(dá)譜的影響[D];南華大學(xué);2019年

2 張顯凱;朊蛋白對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及炎癥反應(yīng)的影響[D];華東師范大學(xué);2019年

3 劉愛敏;多巴胺經(jīng)NLRP3炎癥小體抑制脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[D];山東大學(xué);2019年

4 吐尼克·木拉提別克;基質(zhì)金屬蛋白酶9促進(jìn)急性胰腺炎炎癥反應(yīng)和細(xì)胞壞死[D];上海交通大學(xué);2017年

5 楊靜;Cereblon通過(guò)促進(jìn)c-Jun泛素化降解抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[D];蘇州大學(xué);2018年

6 張曉峰;OPCABG術(shù)前NLR、PLR與術(shù)后新發(fā)房顫的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2018年

7 余鵬;內(nèi)外源性LXRs激動(dòng)劑和DEX在LPS誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

8 朱邦暉;可溶型CD74通過(guò)NF-κB信號(hào)通路調(diào)控肺炎癥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

9 朱紅;天然化合物TI110對(duì)LPS介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的抑制作用及其分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2016年

10 戚倩如;MiR-146a對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其在SLE患者血清中表達(dá)水平的分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2733541