【摘要】：目的:近年來,環(huán)境污染物的生育毒性和發(fā)育毒性對人體的影響正日益受到關注。多環(huán)芳烴(PAHs)是環(huán)境中廣泛存在的污染物,對胚胎發(fā)育的影響已引起各國學者的關注,有研究顯示PAHs與不良出生結局的發(fā)生有密切關系。然而,PAHs的致畸毒性相關的機制目前尚不明確�；蛴∮浭且粋�獨特的表觀遺傳學調節(jié)方式,與胚胎發(fā)育密切相關。目前大多數研究都是觀察母源性暴露對后代的影響,近年來研究顯示,PAHs暴露的雄性動物影響精子的正常結構和功能及DNA甲基化異常,而PAHs暴露對精子印記基因甲基化影響的人群研究尚無報道。因此,本次研究旨在探索男性非職業(yè)PAHs暴露與精子DNA印記基因甲基化的相關,為不良出生結局病因學和父源性多環(huán)芳烴暴露相關的發(fā)病機制的研究提供理論依據,為其防治決策和措施的制定開拓新思路。方法:本課題組于2015年開始,采取橫斷面研究、方便取樣的方法,以山西省太原市兩所醫(yī)院2015年3月至4月和2016年3月門診219名以孕前檢查為目的男性就診者作為研究對象。采用自行編寫的結構式問卷,進行面對面調查,內容主要包括:人口學特征、生活習慣、既往病史和心理健康狀況等信息。并收集研究對象的尿液和精液樣本。采用超高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測尿中多環(huán)芳烴羥基代謝產物(OH-PAHs)水平,提取精子DNA,經過亞硫酸鹽處理后應用焦磷酸測序方法對3種印記基因H19、PEG3和MEG3甲基化差異區(qū)(DMRs)進行甲基化水平測定。所測數據用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行處理,統(tǒng)計方法包括正態(tài)性檢驗,兩獨立樣本非參數檢驗,Spearman秩相關和多元線性回歸。結果:1.研究對象的人口學特征與尿中多環(huán)芳烴羥基代謝產物水平:本研究共納入219名男性,研究對象年齡在24歲至53歲之間,50%的參與者在30至35歲之間。50%的參與者(n=158人)的教育水平是高中(包括中等專業(yè)學校)或以上。有三年吸煙經歷的參與者有130人。僅有少數人(n=39)喜歡熏制食物(超過每周一次)。通過非參數檢驗分析,尿液中7種多環(huán)芳烴羥基代謝產物的含量在各人口學組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.尿OH-PAHs測定結果:應用超高效液相色譜串聯(lián)質譜測量了219個尿液樣品中7種OH-PAHs的內暴露水平,尿比重校正結果顯示,7種OH-PAHs的中位數和四分位數間距(μg/L)分別為:2-OHN(0,0-0.428)、1-OHN(0,0-0.016)、3-OHF(0.004,0-0.039)、2-OHF(0.023,0-0.069)、2-OHPH(0.129,0-0.319)、1-OHPH(0.015,0-0.052)和1-OHP(0.010,0-0.058)。3.精子DNA印記基因甲基化水平:本次研究一共檢測了174例研究對象的精液樣品,對精子DNA三種印記基因H19,PEG3和MEG3的甲基化區(qū)共7或8個CpG位點的甲基化水平分別進行了檢測。平均甲基化水平H19:86.74%(95%CI:86.05,87.42)、PEG3:0.56%(95%CI:0.29,0.83)和MEG3:2.27%(95%CI:1.69,2.85)。4.尿OH-PAHs內暴露水平與精子DNA印記基因甲基化水平的關系:采用非參數分析7種OH-PAHs與三個基因的甲基化水平的平均值的相關性。結果指出1-OHPH分別與H19和PEG3甲基化水平正相關,相關系數分別為0.189和0.909,P0.05。采用Spearman秩相關進一步對OH-PAHs與印記基因特異性CpG位點甲基化水平之間相關關系進行了分析。結果發(fā)現1-OHPH與印記基因H19的第4和第6個CpG位點呈正相關,相關系數分別為0.170和0.158,P0.05;而1-OHPH與印記基因PEG3的第1和MEG3第2個CpG位點呈正相關,相關系數分別為0.207和0.201,P0.05;1-OHP與印記基因PEG3 CpG1位點呈正相關,相關系數分別為0.156,P0.055.影響精子DNA印記基因甲基化水平的相關因素的多元線性回歸分析:我們以3個印記基因甲基化水平為因變量,選擇包括OH-PAHs以及年齡、教育程度、飲酒、吸煙、熏制食物攝入頻率等潛在混雜因素作為自變量進行多元線性回歸分析。結果顯示,影響印記基因H19的甲基化水平的因素包括尿1-OHP和1-OHPH水平,即進一步說明1-OHP和1-OHPH水平是影響印記基因H19的甲基化水平的因素,回歸系數分別為-0.252和0.196;另外,熏制食物攝入頻率是影響印記基因PEG3的甲基化水平的因素,回歸系數為0.154。結論:1.尿液中7種多環(huán)芳烴羥基代謝產物在本研究對象有一定的檢出率,未發(fā)現其含量分布在不同人口學特證組間有差異。2.尿1-OHPH分別與H19,PEG3平均甲基化水平正相關。尤其是H19(第4和第6個CpG位點)、PEG3(第1個CpG位點)和MEG3(第2個CpG位點)甲基化水平隨著尿1-OHPH的水平的增高而升高。另外,1-OHP與印記基因PEG3的第1個CpG位點呈正相關關系,即PEG3 CpG甲基化水平隨著尿中1-OHP的水平的增高而升高。3.影響印記基因H19的甲基化水平的因素包括尿1-OHP和1-OHPH水平,進一步說明1-OHP和1-OHPH水平是影響印記基因H19的甲基化水平的因素;熏制食物攝入頻率是影響印記基因PEG3的甲基化水平的因素。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R114
【圖文】：

注：1：2-羥基萘；2：1-羥基萘；3：3-羥基芴；4：2-羥基芴；5：2-羥基菲 ；6：1-羥基菲；7：1-羥基芘圖 1-1 7 種多環(huán)芳烴羥基代謝產物標準溶液色譜圖

圖 2-1 印記基因 H19、PEG3 和 MEG3 各 CpG 位點及平均甲基化水平2.4 尿 OH-PAHs 內暴露水平與精子 DNA 印記基因甲基化水平的相關分析

【參考文獻】

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本文編號：2719393