【摘要】：目的:建立鎳(Nickel,Ni)大鼠睪丸損傷模型,同時(shí)給予納米硒(Selenium Nanoparticles,Nano-Se)進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù),觀察其血清睪酮含量、睪丸組織病理改變及睪酮合成酶mRNA和蛋白表達(dá)水平的改變,探討Nano-Se可能的保護(hù)機(jī)制。方法:(1)將40只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠(220~240g)隨機(jī)分為對(duì)照組、硫酸鎳染毒組(Ni組)、Nano-Se低、中及高劑量聯(lián)合干預(yù)組(Ni+Nano-Se1/2/3組)。對(duì)照組給予雙蒸水(灌胃)和生理鹽水(腹腔注射);染毒組給予雙蒸水(灌胃)和5.0 mg/kg Ni(腹腔注射);Ni+Nano-Se1/2/3組分別給予0.5/1.0/2.0 mg/kg Nano-Se(灌胃),5.0 mg/kg Ni(腹腔注射),連續(xù)處理14天,第15天心臟采血后處死大鼠。(2)分離血清,采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測(cè)血清睪酮含量。(3)將左側(cè)睪丸組織固定于4%(w/v)多聚甲醛溶液,用于制備HE染色切片;取部分右側(cè)睪丸采用ELISA檢測(cè)組織勻漿中8-羥化脫氧鳥(niǎo)苷(8-hydroxydeoxyuridine,8-OHdG)水平;(4)采用RT-qPCR和Western blot分別檢測(cè)類固醇合成快速調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、細(xì)胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(cholesterol side chain cleavage enzyme,P450scc/CYP11A1)和17β-羥類固醇脫氫酶(17β-hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD),(5)采用Western blot檢測(cè)MAPKs信號(hào)通路中ERK1/2、MEK1/2、MKK3、p38、MKK7和JNK總蛋白表達(dá)水平及其蛋白的磷酸化水平,并計(jì)算其磷酸化比例(即磷酸化蛋白/總蛋白)。結(jié)果:(1)Ni組大鼠體重在第10天和第15天均較對(duì)照組明顯下降(P0.05),Ni+Nano-Se1/2/3組大鼠體重則無(wú)明顯改變(P0.05)。(2)與對(duì)照組比較,Ni組大鼠睪丸組織中可見(jiàn)細(xì)精小管上皮細(xì)胞脫落,各階段精細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列紊亂以及細(xì)胞數(shù)目明顯下降。與Ni組比較,Ni+Nano-Se1/2/3組大鼠睪丸輸精管上皮細(xì)胞及各階段精細(xì)胞的結(jié)構(gòu)逐漸改善和數(shù)量上升。(3)與對(duì)照組比較,Ni組大鼠睪丸中8-OHdG水平明顯升高(P0.05)。與Ni組比較,Ni+Nano-Se2和N+Nano-Se3組睪丸中8-OHdG水平明顯下降(P0.05)。(4)與對(duì)照組比較,Ni組大鼠血清睪酮含量明顯下降(P0.05),與Ni組比較,Ni+Nano-Se2和Ni+Nano-Se3組血清睪酮含量明顯下降(P0.05)。與對(duì)照組比較,Ni組大鼠睪丸中StAR、CYP11A1和17β-HSD mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào);與Ni組比較,Ni+Nano-Se2和Ni+Nano-Se3組睪丸中StAR、CYP11A1和17β-HSD mRNA和蛋白表達(dá)水平上調(diào)。(5)與對(duì)照組比較,Ni組大鼠睪丸中ERK1/2、MEK1/2、MKK3、p38、MKK7和JNK總蛋白表達(dá)水平均無(wú)明顯改變(P0.05),磷酸化蛋白p-ERK1/2、p-MEK1/2、p-MKK3、p-p38、p-MKK7和p-JNK水平明顯上調(diào)(P0.05)以及ERK1/2、MEK1/2、MKK3、p38、MKK7和JNK磷酸化蛋白比率明顯升高(P0.05);與Ni組比較,Ni+Nano-Se2和Ni+Nano-Se3組睪丸中p-ERK1/2、p-MEK1/2、p-MKK3、p-p38、p-MKK7磷酸化蛋白水平和ERK1/2、MEK1/2、MKK3、p38、MKK7和JNK磷酸化蛋白比率顯著下降(P0.05)。結(jié)論:Nano-Se可改善Ni誘導(dǎo)的睪丸損傷并促進(jìn)睪酮合成增加,其機(jī)制可能與抑制ERK1/2、P38和JNK MAPKs信號(hào)通路,進(jìn)而上調(diào)睪酮合成酶mRNA和蛋白表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114
【圖文】：

圖2-1 Nano-Se的制備過(guò)程（3）材料表征：圖2-2是本研究所制備Nano-Se樣品的掃描電鏡圖和激光拉曼光譜圖，從圖2-2a中可以看到，樣品呈現(xiàn)為規(guī)則的球形形貌，分散均勻，且樣品尺寸大小為52±12 nm（圖2-2b）。圖2-2 本研究所制備的Nano-Se樣品的掃描電鏡圖和激光拉曼光譜圖2.2.2 動(dòng)物分組（1）分組：40只健康成年的Sprague-Dawley雄性大鼠，在動(dòng)物房飼養(yǎng)適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為5組，即對(duì)照組、Ni組和聯(lián)合（Ni+Nano-Se1/2/3）組。每組動(dòng)物8只，每籠4只大鼠，大鼠體重每?jī)商鞙y(cè)量一次，所有動(dòng)物在室溫22～24°C

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 納米硒對(duì)鎳致雄性大鼠睪酮合成紊亂的保護(hù)作用及其機(jī)制研究材放入聚四氟乙烯反應(yīng)槽中后清洗10 min。然后，向其反應(yīng)槽中放入去離子水溶液18 mL，最后，將反應(yīng)槽固定在旋轉(zhuǎn)臺(tái)上的凹槽中。設(shè)置相關(guān)參數(shù)：波長(zhǎng)1064nm，工作頻率10 Hz，激光脈寬10 ns，單個(gè)脈沖能量50 mJ。隨后，將聚焦激光得到的溶液轉(zhuǎn)移至20 mL透明玻璃瓶中，用頻率為20 Hz、單脈沖能量為40 mJ、波長(zhǎng)為355 nm的未聚焦激光進(jìn)行輻照，并最終獲得均勻分散的紅色Nano-Se顆粒膠體溶液（圖2-1）。

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本文編號(hào)：2717172