【摘要】：目的 本課題通過對(duì)成年雌性小鼠進(jìn)行壬基酚溶液灌胃染毒,探討壬基酚對(duì)小鼠卵巢卵泡形態(tài)以及雌激素和孕激素水平的影響,研究壬基酚的生殖毒性。方法 將30只雌性昆明種(KM)小鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組(玉米油)和低劑量組(25mg/kg)、高劑量組(100mg/kg),每組10只。采用壬基酚溶液灌胃方式染毒,染毒容量為0.1ml/10g,每天1次,每周染毒5天,連續(xù)染毒12周。1一般狀況及體重:觀察動(dòng)物的一般日�；顒�(dòng)、飲水飲食、大便性狀等情況,皮膚顏色、皮毛光滑度等變化;2于末次染毒24小時(shí)后,摘眼球取血處死小鼠,迅速分離雙側(cè)卵巢,稱重,計(jì)算其卵巢系數(shù);3摘眼球取血后,分離血清,采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)及促卵泡生成素(FSH)激素水平;4取卵巢組織,觀察小鼠卵巢組織病理學(xué)及各級(jí)卵泡數(shù)目的改變;5制備卵巢單細(xì)胞懸液,使用熒光染料(H_2DCFDA)和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)卵巢細(xì)胞活性氧(ROS)水平;6制備卵巢組織勻漿,測(cè)定小鼠卵巢一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)活性;7取卵巢組織,采用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定卵巢組織8-OHdG蛋白表達(dá)水平;8取卵巢組織,通過TUNEL法測(cè)定卵巢細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 1染毒組與對(duì)照組小鼠比較,精神狀態(tài)萎靡,皮毛光澤度下降,活動(dòng)減少,偶有稀便,進(jìn)食、飲水量減少。2對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠的6周及12周體重分別為(36.56±0.23)g、(33.67±2.76)g、(38.61±2.20)g,(38.54±2.52)g、(38.67±2.76)g、(40.61±2.20)g,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.602,P0.05;F=11.963,P0.05),高劑量組小鼠體重增加。3對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠的卵巢濕重和卵巢系數(shù)分別為(0.29±0.13)g、(0.28±0.09)g、(0.17±0.01)g,(0.84±0.46)%、(0.80±0.36)%、(0.43±0.54)%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=369.586,P0.05;F=244.713,P0.05),高劑量組小鼠卵巢濕重和卵巢系數(shù)明顯下降。4對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠血清E_2、P及FSH激素水平分別為(17.27±1.89)pg/ml、(15.32±2.27)pg/ml、(13.46±2.54)pg/ml,(2.46±0.39)ng/ml、(2.23±0.25)ng/ml、(1.99±0.23)ng/ml,(4.76±1.62)ng/ml、(3.80±0.68)ng/ml、(2.84±0.87)ng/ml,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.188,P0.05;F=6.334,P0.05;F=7.164,P0.05),高劑量組小鼠血清E_2、P及FSH激素水平明顯下降。5對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠的總卵泡數(shù)目分別為(29.17±1.47)個(gè)、(25.17±1.17)個(gè)、(18.17±0.75)個(gè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=136.098,P0.05),高劑量組小鼠總卵泡數(shù)目明顯降低。6對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠卵巢細(xì)胞ROS水平分別為70.37±9.85、106.18±18.72、209.28±44.41,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=19.037,P0.05),高劑量組小鼠卵巢細(xì)胞ROS水平顯著增高;7對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠卵巢組織NO活性分別為(23.63±0.69)μmol/gpro、(23.04±1.14)μmol/gpro、(12.04±0.65)μmol/gpro,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=348.731,P0.05),高劑量組小鼠卵巢組織NO活性明顯降低。8對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠卵巢組織NOS活性分別為(0.0050±0.0003)U/mgpro、(0.0039±0.0004)U/mgpro、(0.0014±0.0014)U/mgpro,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=22.739,P0.05),高劑量組小鼠卵巢組織NOS活性明顯降低。9對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠卵巢組織8-OHdG蛋白表達(dá)的平均光密度值分別為0.0099±0.0004、0.0389±0.0016、0.0763±0.0131,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=76.214,P0.05),高劑量組8-OHdG蛋白表達(dá)水平增高。10對(duì)照組、低劑量組及高劑量組小鼠卵巢細(xì)胞凋亡率分別為5.6%、22.00%、44.00%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c~2=817.267,P0.05),高劑量組小鼠卵巢細(xì)胞凋亡率明顯增加。結(jié)論 1壬基酚染毒導(dǎo)致小鼠的體重增加、卵巢濕重及卵巢系數(shù)下降。2壬基酚染毒導(dǎo)致小鼠血清E_2、P及FSH水平下降。3壬基酚染毒導(dǎo)致小鼠的總卵泡、初級(jí)卵泡、成熟卵泡數(shù)目減少,閉鎖卵泡數(shù)目增多,高劑量的壬基酚作用更明顯。4壬基酚染毒導(dǎo)致小鼠卵巢組織NO、NOS活性均下降,ROS水平、8-OHdG蛋白表達(dá)水平均增高,引起卵巢細(xì)胞凋亡,高劑量的壬基酚作用更明顯。圖5幅;表8個(gè);參135篇。
【圖文】：

(a)：對(duì)照組 (b)：低劑量組 (c)：高劑量組圖 1 三組卵巢組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果（HE×40）Fig.1 Pathological morphological results of three groups of ovarian tissue（HE×40）

(a)：對(duì)照組 (b)：低劑量組 (c)：高劑量組圖 2 三組卵巢組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果（HE×200）Fig.2 Pathological morphological results of three groups of ovarian tissue（HE×200）高劑量組小鼠卵巢 HE 染色，初級(jí)卵泡及成熟卵泡的數(shù)目明顯減少，閉鎖卵泡數(shù)目增多，可見初級(jí)卵母細(xì)胞明顯萎縮，卵巢顆粒細(xì)胞松散，卵母細(xì)胞核固縮，卵
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2697339