【摘要】：[目的]反式脂肪酸(Trans fatty acids,TFA)是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有反式構(gòu)型非共軛雙鍵的不飽和脂肪酸的總稱。食物油脂的氫化加工是TFA的主要來源。TFA具有增加食品松脆口感、易于長期保存的特點,被廣泛應(yīng)用于包裝和煎炸食品中。研究證實,長期食用含有TFA的食物會造成多種疾病的發(fā)生與發(fā)展。隨著對TFA研究的深入,流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),長期攝入TFA可造成學(xué)習(xí)記憶功能減退,但其相應(yīng)的損傷機制尚不清楚。本實驗以Wistar大鼠作為研究對象,經(jīng)口給予TFA,通過檢測大鼠腦組織中抗氧化酶、ATP酶、乙酰膽堿酯酶、一氧化氮合酶的活性以及腦組織中必需元素含量,觀察海馬形態(tài)學(xué)改變,檢測海馬細(xì)胞凋亡情況,研究和探討TFA對大鼠神經(jīng)系統(tǒng)損傷以及作用機制。[方法]1.動物分組與灌胃選擇SPF級雄性Wistar大鼠(200±20g)48只,于籠中分開飼養(yǎng),自由飲水和進(jìn)食。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按體重隨機分為4組,即對照組(玉米油組)和TFA低、中、高劑量組,各組分別按照0 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg的劑量經(jīng)口給予TFA-玉米油溶液,每天1次,連續(xù)12周。2.動物處理灌胃階段結(jié)束后,每組2只大鼠,4%多聚甲醛心臟灌注,取出腦組織固定于4%多聚甲醛,制作石蠟切片。其余大鼠禁食24 h,稱重,斷頭處死并收集血液,分離血清。立即于冰袋上取出腦組織稱重,分離海馬和皮層。血清、海馬和大腦皮層均存于-80℃,用于后續(xù)檢測。3.大鼠一般生長發(fā)育狀況的觀察每日觀察并記錄大鼠活動和精神狀況,記錄飲水和進(jìn)食情況。每周稱量一次體重,記錄數(shù)值。腦組織稱重,計算腦系數(shù)。4.大鼠大腦皮層和血清中抗氧化系統(tǒng)指標(biāo)的檢測取出大腦皮層稱重,按質(zhì)量:體積=1:9加入生理鹽水,制備10%勻漿液;血清用生理鹽水稀釋到合適濃度。按試劑盒步驟測定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力,以及丙二醛(MDA)含量。5.大鼠大腦皮層ATPase活力的檢測取出大腦皮層稱重,按質(zhì)量:體積=1:9加入生理鹽水,制備10%勻漿液。按照試劑盒步驟測定大腦皮層中Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力。6.大鼠大腦皮層乙酰膽堿酯酶(AChE)和一氧化氮合酶(NOS)活性的檢測取出大腦皮層稱重,按質(zhì)量:體積=1:9加入生理鹽水,制備10%勻漿液。按照試劑盒步驟測定AChE和NOS活性。7.大鼠腦組織中必需元素的測定取0.2 g腦組織,微波消解,火焰原子吸收光譜法測吸光度,計算各元素含量。8.大鼠海馬形態(tài)學(xué)觀察取出固定的腦組織,脫蠟水合,制成石蠟切片,進(jìn)行HE染色,切片置于鏡下觀察。9.大鼠海馬細(xì)胞凋亡情況的檢測將制作的石蠟切片,脫蠟后,按照TUNEL試劑盒說明進(jìn)行染色,觀察細(xì)胞凋亡情況。應(yīng)用RT-PCR法檢測Bcl-2和Bax的mRNA表達(dá)水平。[結(jié)果]1.大鼠一般生長發(fā)育狀況實驗期間,對照組大鼠精神和活動狀態(tài)良好,飲食和飲水狀況正常,大鼠皮毛順滑有光澤;而TFA組大鼠隨著灌胃時間增長,出現(xiàn)飲食不良、精神不佳,皮毛蓬松、暗淡無光澤。隨著染毒時間延長,TFA組特別是高劑量組大鼠體重增長明顯變緩,終體重也明顯低于對照組(P0.05)。比較各組大鼠腦系數(shù)發(fā)現(xiàn),TFA高劑量組大鼠腦系數(shù)顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.TFA對大鼠大腦皮層抗氧化系統(tǒng)的影響結(jié)果顯示,TFA低、中、高劑量組SOD的活性明顯低于對照組,而MDA的含量明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TFA中、高劑量組GSH-Px的活性明顯低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.TFA對大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響結(jié)果顯示,TFA中、高劑量組血清中SOD和GSH-Px的活性均明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TFA低、中、高劑量組血清中MDA的含量明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.TFA對大鼠大腦皮層中ATPase活力的影響結(jié)果顯示,TFA低、中、高劑量組Na+K+-ATPase、Ca2+-ATPase的活力均明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TFA中、高劑量組Mg2+-ATPase活性明顯低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.TFA對大鼠大腦皮層中AChE和NOS活性的影響結(jié)果顯示,TFA低、中、高劑量組AChE的活性均明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TFA中、高劑量組NOS的活性明顯高于對照組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6.TFA對大鼠腦組織中必需元素水平的影響結(jié)果顯示,TFA低、中、高劑量組Mg和Fe元素含量均顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TFA中、高劑量組Zn元素含量明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而Ca、Cu元素的含量在各組之間比較無明顯差異(P0.05)。7.海馬結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)觀察切片鏡下觀察發(fā)現(xiàn),對照組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目較多、排列緊密。TFA組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量和層數(shù)均有不同程度的減少,神經(jīng)細(xì)胞排列疏松、紊亂,部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、胞漿深染。8.TFA對大鼠海馬細(xì)胞凋亡情況的影響對照組和TFA攝入組大鼠海馬中均未見到明顯的凋亡細(xì)胞;此外,與對照組相比,TFA組大鼠海馬組織中凋亡相關(guān)因子Bcl-2,BaxmRNA表達(dá)也未見顯著改變(P0.05)。[結(jié)論]TFA攝入引起腦組織中抗氧化系統(tǒng)損傷、降低ATP酶活性、影響AChE和NOS活性、引起機體必需元素水平失衡,并且可引起大鼠海馬形態(tài)學(xué)改變,從而導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷。然而,在本實驗條件下,未觀察到TFA對大鼠海馬組織細(xì)胞凋亡的影響。
【圖文】：

觀察發(fā)現(xiàn)ＴＦＡ組大鼠隨著灌胃時間增長，出現(xiàn)飲食不良、精神不逡逑佳、活動減少，皮毛蓬松雜亂無光澤。逡逑表１９和圖２顯示，各組大鼠體重隨著染毒時間延長均呈現(xiàn)持續(xù)性增長。約逡逑從第３周開始，ＴＦＡ組大鼠的體重增長速度明顯變慢，尤其是ＴＦＡ高劑量組的逡逑體重明顯低于同期對照組大鼠體重，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（尸＜0．0５）。逡逑表１９實驗各階段大鼠平均體重（ｉｔｓ，邋ｇ）逡逑組別邐第０周邐第３周邐第６周邐第９周邐第１２周逡逑對照組邐２３４．５０土１９．５９邐３６５．２２±３８．６３邐４１３．６１±３４．３９邐４４８．１７±３２．５６邐４６８．４２±３１．９３逡逑Ｌ－ＴＦＡ邋組邋２２４．５５±１５．５７邐３５０．５８＋４２．２０邐３９９．４５±５５．０３邐４４３．４４１６３．５５邐４４８．１１邋±９６．９３逡逑Ｍ－ＴＦＡ邋組邐２２２．５５１２０．６３邐３３４．６５１４７．６３邐３７８．９２±５２．８７邐４０４．８６土６０．７９＊邐４４２．７５±５５．４９＊逡逑Ｈ－ＴＦＡ邋組邐２２２．０３±１５．１３邐３２１，６５±３７．８４＊邐３６１．７０＋４０．９８＊邐３８９．１０±６７．２３＊邐４０５．４４±６７．４０＊逡逑注：＊與對照組比較，戶：０．０５？逡逑６００邋ｒ逡逑５００邋－邐Ｔ邐｜逡逑Ｉ邋４0０邋＇邐＾邋＇邋＼逡逑＾邋３００邋＂邐Ｌ＾ｉ；邋ｉ邐５邐■邋Ｌ＇ＴＦＡ逡逑２００邋－邋Ｔ邐１邐＋邋Ｍ－ＴＦＡ逡逑１００邋－邐－并？邋Ｈ－ＴＦＡ逡逑0邋邐１邐１邐１

逑１．２腦重及腦系數(shù)的差異逡逑由表２０和圖３可知，Ｈ－ＴＦＡ組大鼠腦系數(shù)（０．３８±０．０８）邋％明顯高于對照組逡逑（０．３１±０．０２）邋％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。ＴＦＡ各劑量組之間比較無明逡逑顯差異（Ｐ＞0．0５）。逡逑表２０腦組織重量及其腦系數(shù)（［土ｓ）逡逑組別邐重量（ｇ）邐腦系數(shù)（％）逡逑對照組邐１．４０±０．０５邐０．３１邋±０．０２逡逑Ｌ－ＴＦＡ邋組邐１．４２±０．０９邐０．３５１０．０８逡逑Ｍ－ＴＦＡ邋組邐１．４邋丨邋±０．丨丨邐０．３５１０．０７逡逑Ｈ－ＴＦＡ邋組邐１．３７±０．０７邐０．３８＋０．０８＊逡逑注：＊與對照組比較，，Ｐ＜０．０５。逡逑０．５邋ｒ逡逑l:逡逑０．４邋－逡逑３邋ｉ邋＾邋■邋［Ｉ逡逑Ｉ．３－邋＿邋｜邋｜邋媝逡逑！：邋Ｌｉｘｉ逡逑對照組邋Ｌ－ＴＦＡ邋Ｍ－ＴＦＡ邋Ｈ－ＴＦＡ逡逑圖３各組大鼠腦系數(shù)的比較逡逑２邋ＴＦＡ對大鼠大腦皮層抗氧化系統(tǒng)的影響逡逑如表２１和圖４邋（Ａ）結(jié)果顯示，大鼠大腦皮層中ＳＯＤ活性明顯降低，與對逡逑照組相比，Ｌ－ＴＦＡ、Ｍ－ＴＦＡ和Ｈ－ＴＦＡ組ＳＯＤ活性分別降低了邋１４．４７％、１１．４８％逡逑和１２．８９％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（戶＜０．０５）。逡逑如表２１和圖４邋（Ｂ）結(jié)果顯示，大鼠大腦皮層中ＧＳＨ－Ｐｘ活性明顯降低，與逡逑３２逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R151

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2657848