【摘要】：乳糜瀉在工業(yè)化國家和白種人中的發(fā)病率已上升至1%-8%。在我國,乳糜瀉的冰山也正在浮起。在以小麥為主食的山東人群中,乳糜瀉的發(fā)病率達(dá)到了0.76%。目前,終生嚴(yán)格堅(jiān)持無麩質(zhì)飲食是治療乳糜瀉的最佳方法。然而,因我國無麩質(zhì)食品生產(chǎn)鏈缺失,人們對(duì)無麩質(zhì)飲食意識(shí)度不高而且小麥粉和麩質(zhì)蛋白作為配料已廣泛用于加工食品中,導(dǎo)致乳糜瀉患者在日常生活中難以完全避免攝入麩質(zhì)。另外,長期無麩質(zhì)飲食將會(huì)影響患者的社會(huì)交往活動(dòng),對(duì)其心理與經(jīng)濟(jì)造成負(fù)擔(dān)。由此可見,探尋新的冶療方法用于輔助或替代無麩質(zhì)飲食療法具有重要意義。抗氧化物具有清除活性自由基,緩解氧化應(yīng)激以及抑制某些促炎因子表達(dá)的作用,那么抗氧化物是否可以在一定程度上緩解乳糜瀉的氧化應(yīng)激及某些病癥,成為治療乳糜瀉的輔助手段,這值得進(jìn)一步研究。本研究通過采用Caco-2細(xì)胞構(gòu)建乳糜瀉氧化應(yīng)激模型,應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)篩選可以消減麩質(zhì)蛋白毒性作用的天然抗氧化物并對(duì)其分子作用機(jī)制進(jìn)行了研究。主要方法、結(jié)果和結(jié)論如下:(1)乳糜瀉氧化應(yīng)激模型的構(gòu)建Caco-2細(xì)胞經(jīng)過不同濃度,不同作用時(shí)間的麩質(zhì)蛋白衍生肽段p31-43處理,以細(xì)胞內(nèi)ROS水平、SOD酶活性、MDA和GSH含量為檢測(cè)指標(biāo),成功構(gòu)建了基于Caco-2細(xì)胞的乳糜瀉氧化應(yīng)激模型。(2)消減麩質(zhì)蛋白毒性作用的天然抗氧化物篩選選取不同作用時(shí)間,不同濃度以及不同種類的天然抗氧化物預(yù)處理已成功建立的細(xì)胞模型,從麩質(zhì)蛋白衍生肽段p31-43所誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷、乳糜瀉標(biāo)志物及炎癥因子表達(dá)、小腸上皮屏障功能紊亂三方面篩選可以消減麩質(zhì)蛋白毒性作用的天然抗氧化物。結(jié)果從槲皮素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、染料木素、β-胡蘿卜素、楊梅酮、山柰酚、白藜蘆醇7種天然抗氧化物中成功篩選到了槲皮素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯和白藜蘆醇3種。(3)抗氧化物消減麩質(zhì)蛋白毒性作用分子機(jī)制的研究通過Q-PCR技術(shù)研究抗氧化物對(duì)Nrf2、mTOR、SIRT三條信號(hào)通路中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響,以此對(duì)其分子作用機(jī)制進(jìn)行初步研究。結(jié)果顯示篩選所得到的3種天然抗氧化物分子作用機(jī)制各不相同,其中白藜蘆醇的處理可以促進(jìn)sirt1和sirt3基因的表達(dá),說明白藜蘆醇消減麩質(zhì)蛋白毒性作用的機(jī)制與SIRT信號(hào)通路的激活相關(guān)。
【圖文】：

2圖 1.1 麩質(zhì)蛋白對(duì)氧化應(yīng)激和基因表達(dá)的影響自于 Celiac Disease, Inflammation and Oxidative Damage‖

和還原劑等[39]。下文主要對(duì)涉及到的是一類主要存在于植物體內(nèi)的天然抗氧要分為聚合體和非聚合體兩大類。非聚合物。如表沒食子兒茶素沒食子酸酯，槲蘆醇等。大豆，洋蔥，綠茶，藍(lán)莓提取合而成，且統(tǒng)稱為單寧類物質(zhì)。原花青葡萄籽，，蘋果提取物均屬于此類[40]。氧化物都具有圖 1.2 所示的 2-苯基氧雜據(jù)母核結(jié)構(gòu)上取代基團(tuán)的差異又分成黃黃烷酮醇類、花青素類等。由于氫質(zhì)子能力的大小與分子中質(zhì)子氫的提供能力-OH‖基團(tuán)數(shù)越多，則清除自由基的能力
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R151

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本文編號(hào)：2644242