【摘要】：沙門氏菌是一種普遍存在于自然界中的食源性致病菌,在世界各地的食物中毒中,因沙門氏菌引起的中毒事件占第一位。主要原因是沙門氏菌會產(chǎn)生內(nèi)毒素而引起中毒,這些毒素可引起發(fā)熱、腹瀉、嘔吐、凝血及休克等多種毒性癥狀。鑒于沙門氏菌對人體健康和公共衛(wèi)生的巨大危害,對沙門氏菌的檢測極其重要,而傳統(tǒng)的檢測方法存在耗時長、操作繁瑣、成本高昂、選擇性差等多種局限性,限制了其實際應(yīng)用,尤其是現(xiàn)場的實際應(yīng)用。所以,開發(fā)快速、簡便和高靈敏度的沙門氏菌測定新方法,有助于預(yù)防和控制因它導(dǎo)致的的中毒事件。近年來,隨著微流控芯片技術(shù)的快速發(fā)展,以多孔濾紙材料為基底的紙基微流控芯片由于其便攜、無污染等獨特優(yōu)勢,而被越來越多地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷,藥物研發(fā),水質(zhì)監(jiān)測等領(lǐng)域。雖然具有現(xiàn)場快速分析應(yīng)用的巨大潛力,但是,目前由于大部分紙基微流控芯片通路的制備都需要昂貴的儀器或?qū)I(yè)人員操作,普通的實驗室無法進(jìn)行,而限制了它們的實際應(yīng)用�；谝陨蠁栴},本研究將開發(fā)一種快速、簡便、低成本、不依賴儀器設(shè)備的紙基微流控芯片的制備新方法,并將其應(yīng)用于沙門氏菌的快速檢測,為沙門氏菌的食品安全監(jiān)控提供一種新的技術(shù)手段。本研究中,首先制備了抗腸炎沙門氏菌的多克隆抗體,并對其進(jìn)行了純化和鑒定。然后,探索性的發(fā)明了一種紙基微流控芯片的制備新方法,并對其制備工藝、參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,對其機(jī)理進(jìn)行了探究。最后,在紙基微流控芯片上建立了一種快速檢測腸炎沙門氏菌的方法,并評價了該方法的特異性和靈敏度。主要研究結(jié)果如下:1.以超聲破碎、甲醛滅活的全菌沙門氏菌免疫雌性日本大耳兔,收集血清,所制備兔抗腸炎沙門氏菌抗血清的效價可達(dá)到4.8×10~5,而且純化后效價大于純化前,可達(dá)到6.4×10~5。通過二喹啉甲酸法(BCA)法測定多克隆抗體的濃度為7.03mg/mL。2.本研究開發(fā)的紙基微流控芯片制備方法與傳統(tǒng)方法相比,具有簡單、安全、低成本的特點,而且制備周期短,僅需7min就能完成。優(yōu)化后最佳的工藝參數(shù)為:三甲氧基硅烷(TOS)的浸泡濃度為4%(v/v);Tween-20的腐蝕時間和腐蝕濃度分別為3.5min和1%(m/m);十二烷基硫酸鈉(SDS)的腐蝕時間和腐蝕濃度分別為4.5min和1%(m/m);十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)的腐蝕時間和腐蝕濃度分別為5min和1%(m/m)。由于在制備紙基微流控芯片時三種表面活性的效果相當(dāng),而Tween-20用時最短。因此,后續(xù)研究中選擇Tween-20用以制備紙基芯片的親水通路。另外,用掃描電鏡(SEM)和X射線光電能譜(XPS)探究性研究了紙基微流控芯片的制備機(jī)理,結(jié)果表明芯片親疏水通路的形成是基于三甲氧基硅烷作為硅烷耦合分子和濾紙纖維上的羥基之間反應(yīng),覆蓋在紙的表面,使紙由親水變成疏水。另外,由于經(jīng)表面活性劑浸泡后的親水基底模型可以選擇性地腐蝕疏水濾紙,因此,在疏水紙表面就會形成親水通路。3.用商品化單克隆抗體作為捕獲抗體,本研究中自制的多克隆抗體作為檢測抗體,在紙基微流控芯片上建立雙抗夾心免疫分析方法。經(jīng)優(yōu)化最佳工作濃度單抗為1:8000,多抗1:4000。并且得出該方法對沙門氏菌純培養(yǎng)液的最低檢測限為106 cfu/mL,對于同種菌屬間其他菌的反應(yīng)很弱、對異種菌屬的菌具有很好的特異性。綜上,本文通過一種新型的加工工藝,克服了目前微流控芯片通路制備時需要昂貴的儀器、專業(yè)人員操作、無法普及等局限性;并運用所制備芯片建立了一種腸炎沙門氏菌快速檢測的新方法。研究結(jié)果為進(jìn)一步研制其他簡易微流控芯片提供了可供參考的資料、拓寬了微流控芯片在食品安全監(jiān)測領(lǐng)域的應(yīng)用。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：TN492;R155.5

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李美芬;李麗蓉;劉入源;;紙基微流控芯片技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用[J];食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報;2018年10期

2 閆宇;許長華;谷東陳;;紙基微流控芯片的加工及其應(yīng)用[J];食品與機(jī)械;2017年08期

，

本文編號：2639122