【摘要】：背景蟲媒病毒(Arbovirus)是指通過吸血節(jié)肢動物叮咬敏感的脊椎動物,使脊椎動物發(fā)病從而傳播疾病的一類病毒。山東省位于中國東部沿海,三面環(huán)海,地處黃河下游。省內(nèi)水系較為發(fā)達(dá),湖泊集中分布在魯中南山丘區(qū)與魯西南平原之間,山東省屬于暖溫帶季風(fēng)性氣候,降水集中,雨熱同期。復(fù)雜的地質(zhì)地理條件,為媒介昆蟲的滋生繁殖提供了有利條件。山東省在歷史上是乙腦高發(fā)區(qū),近年來成人乙腦病例出現(xiàn)不斷增加的趨勢,對于大年齡組人群中乙腦的防控工作應(yīng)引起重視。山東省關(guān)于蟲媒病毒的研究較少,對于全省開展的蟲媒背景信息的調(diào)查也有待完善,而山東省部分地區(qū)夏秋季節(jié)存在不明原因發(fā)熱和腦炎病例,因此本研究在2016年和2017年夏季,在山東省的濟(jì)寧市、臨沂市、東營市、濟(jì)南市、淄博市和煙臺市進(jìn)行了蚊蟲標(biāo)本的采集,并進(jìn)行了病毒的分離及鑒定。目的開展山東省蚊蟲及蚊傳蟲媒病毒的基線調(diào)查,為當(dāng)?shù)叵x媒病毒疾病的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù)及數(shù)據(jù)支持。方法在2016年和2017年在山東省采集蚊蟲標(biāo)本,并使用細(xì)胞培養(yǎng)法分離病毒,陽性分離物使用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行病毒鑒定,使用二代測序獲得病毒基因組,新分離病毒用ClustalX2.0、MegAlign、Mega5.2和BioEdit等生物學(xué)軟件進(jìn)行核苷酸和氨基酸序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化分析,使用電鏡等方法對病毒進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究。結(jié)果1、2016-2017年在山東省濟(jì)南市、煙臺市、東營市、淄博市、臨沂市、濟(jì)寧市共采集蚊蟲標(biāo)本4屬5種,共48139只,三帶喙庫蚊為優(yōu)勢蚊種,占89.77%。濟(jì)寧市采集的蚊蟲數(shù)量最多,占總數(shù)的25.77%;東營市占總數(shù)的24.49%;臨沂市占總數(shù)的17.05%;濟(jì)南市、煙臺市、淄博市分別占總數(shù)的5.77%、3.58%和0.49%。采集生境集中在豬圈,且多為吸飽血的蚊蟲。2、對山東省2016-2017年采集的蚊蟲標(biāo)本中的274批進(jìn)行研磨,利用細(xì)胞培養(yǎng)法共分離得到23株病毒,經(jīng)鑒定,包括21株JEV,1株CppDNV,1株KDV。21株新分離JEV均為基因Ⅰ型。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示,與山東2013年分離的兩株JEV親緣關(guān)系最近。使用實時熒光RT-PCR方法對274批蚊蟲標(biāo)本檢測JEV核酸,結(jié)果共有53批陽性,陽性率為19.34%(53/274),所有陽性結(jié)果均從三帶喙庫蚊中檢出。對新分離CppDNV非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2部分核苷酸序列分析顯示,該株與我國其他省市分離株的核苷酸同源性在98.9%-99%,系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示所有中國分離株均位于同一進(jìn)化分支中。新分離KDV為分節(jié)段病毒,共分為12個節(jié)段,利用Illumina測序方法對其全序進(jìn)行測定,和NCBI上兩株KDV(JKT-7075株與QTM27331株)的同源性比較:與我國蜻蜓目分離株QTM27331核苷酸和氨基酸同源性較高,分別為86%-99%和88%-99%。結(jié)論本研究在山東省采集到了4屬5種蚊蟲標(biāo)本。蚊種構(gòu)成說明三帶喙庫蚊為優(yōu)勢蚊種。從2種蚊蟲標(biāo)本中分離到了 JEV、KDV和CppDNV。在山東省多個地區(qū)、多個蚊種中都分離到JEV并檢測到其核酸,提示山東省自然界蚊蟲中存在著較高的JEV感染率。首次在山東省分離到KDV,二代測序技術(shù)在少見病毒的分析與鑒定中發(fā)揮了重要作用,提高了分子生物學(xué)分析的效率與準(zhǔn)確度。
【圖文】：

邐山東大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑２．３山東省各采集點(diǎn)蚊蟲標(biāo)本采集數(shù)量及蚊種構(gòu)成逡逑從山東省各地采集到的蚊蟲標(biāo)本數(shù)量來看，濟(jì)寧市所采集到的蚊蟲標(biāo)本數(shù)量逡逑最多，共２３，４０７只，占總數(shù)（４８，１３９）的２５．７７％，且三帶喙庫蚊的數(shù)量占絕對逡逑優(yōu)勢；其次為東營市，共采集１丨，７９８只，占總數(shù)的２４．４９％，三帶喙庫蚊的數(shù)量逡逑仍占多數(shù)；再次為臨沂市，共采集８２０９只，占總數(shù)的１７．０５％，三帶喙庫蚊的數(shù)逡逑量占絕大多數(shù)；濟(jì)南市、煙臺市、淄博市采集蚊蟲標(biāo)本的數(shù)量為２７８０只、１７１３逡逑只和２３２只，分別占總數(shù)的５．７７％、３．５８％和０．４９％。與其他地市的優(yōu)勢蚊種均逡逑為三帶喙庫蚊所不同的是，濟(jì)南市和淄博市都是以騷擾阿蚊、三帶喙庫蚊為主（圖逡逑１．２）。逡逑

逡逑可達(dá)＋＋＋－＋＋＋＋（圖２．１－（ｃ））；接種Ｃ６／３６細(xì)胞７２ｈ后，細(xì)胞開始出現(xiàn)脫落、聚逡逑集、破碎，１２０ｈ后病變程度達(dá)到＋＋＋－＋＋＋＋（圖２．１－⑷）。具體出現(xiàn)細(xì)胞病變的逡逑時間和特點(diǎn)見表２．３。逡逑表２．２山東省蚊蟲研磨上清陽性分離物詳細(xì)背景信息逡逑Ｔａｂｌｅ邋２．２邋Ｔｈｅ邋ｂａｃｋｇｒｏｉｍｄ邋ｏｆ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ邋ｆｒｏｍ邋Ｓｈａｎｄｏｎｇ邋ｐｒｏｖｉｎｃｅ逡逑分離物名稱邐采集時間邐采集地點(diǎn)邐采集環(huán)境邐單管只數(shù)逡逑Ｎｕｍｂｅｒ邐Ｉｓｏｌａｔｅ邐Ｔｉｍｅ邐Ｓｉｔｅ邐Ｈａｂｉｔａｔ
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R184.31

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊培培;程鵬;田華;郭秀霞;王海防;王懷位;張崇星;寇景軒;劉麗娟;公茂慶;;濟(jì)寧太白湖濕地蚊蟲種類、生態(tài)調(diào)查及控制策略[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2015年05期

2 鄭雅勻;曹玉璽;付士紅;程t熛，

本文編號：2634823