【摘要】：目的探討哺乳期染毒雙酚A對子代雄鼠成年后睪丸結(jié)構(gòu)及雄激素受體(AR)表達(dá)影響。方法 20只妊娠母鼠,待分娩后隨機(jī)分為雙酚A高、中、低劑量組(5、0.1、0.01 mg/kg)和對照組。母鼠分娩后第3 d開始每天給小鼠頸部皮下注射相應(yīng)劑量的雙酚A和玉米油,持續(xù)到第21 d斷奶,在第70 d處死并取材,記錄體重及睪丸重量,制作精子涂片,計算精子畸形率,觀察小鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)變化,采用免疫組織化學(xué)和Western blot法檢測睪丸內(nèi)AR表達(dá)。結(jié)果雙酚A高劑量組成年雄鼠睪丸指數(shù)(0.44±0.018)明顯低于對照組(0.64±0.039)(P0.05);雙酚A低、中、高劑量組成年雄鼠精子畸形率分別為(13.34±0.72)%、(16.41±0.67)%、(17.55±0.61)%,高于對照組的(2.07±0.24)%(P0.05),呈劑量效應(yīng)關(guān)系;雙酚A組雄鼠睪丸曲細(xì)精管直徑與生精上皮厚度均明顯減小(P0.05),各級生精細(xì)胞形態(tài)無明顯改變;雙酚A低、中、高劑量組雄鼠AR表達(dá)分別為(0.6642±0.0141)、(0.6363±0.0062)、(0.2938±0.2522),高于對照組(0.2123±0.2793)(P0.05)。結(jié)論哺乳期接觸一定劑量雙酚A對雄鼠睪丸發(fā)育具有明顯影響,精子畸形率增加,曲細(xì)精管直徑減小,生精上皮變薄,睪丸內(nèi)AR表達(dá)增加。
【圖文】：

睪丸AＲ表達(dá)量明顯高于中、高劑量雙酚A組(P＜0.05)。注:A:對照組;B、C、D:雙酚A0.01、0.10、5.00mg/kg組。圖1雙酚A對子代成年雄鼠睪丸組織AＲ表達(dá)影響(免疫組化，×200)2.3.2Westernblot法(圖2)結(jié)果顯示，，低、中、高劑量雙酚A組子代成年雄鼠AＲ表達(dá)量［分別為(0.6642±0.0141)、(0.6363±0.0062)、(0.2938±0.2522)］明顯高于對照組(0.2123±0.2793)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);雙酚A各劑量組之間雄鼠睪丸AＲ表達(dá)量也具有明顯差異(P＜0.05)，隨著雙酚A劑量增加，睪丸組織中AＲ表達(dá)量呈下降趨勢。注:A:對照組;B、C、D:雙酚A0.01、0.10、5.00mg/kg組。圖2雙酚A對子代成年雄鼠睪丸內(nèi)AＲ表達(dá)影響3討論研究表明孕期、哺乳期接觸雙酚A對子代小鼠成年后體重具有影響，可造成體重增加［6－7］。本研究結(jié)果表明，中、高劑量雙酚A組子代成年雄鼠體重明顯增加，提示雙酚A對肥胖現(xiàn)象有一定促進(jìn)作用，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果還表明，哺乳期雙酚A暴露可造成子代成年雄鼠睪丸系數(shù)減小，曲細(xì)精管直徑、生精上皮厚度不同程度降低及精子畸形率升高，提示雙酚A對睪丸的結(jié)構(gòu)以及生精系統(tǒng)功能完整性產(chǎn)生了一定影響。與張玉敏等［8］研究結(jié)果相同。本研究結(jié)果顯示，70日齡雄鼠睪丸細(xì)胞內(nèi)AＲ受體主要表達(dá)于胞漿和胞核內(nèi)，且雙酚A染毒組雄鼠AＲ表達(dá)呈不同程度增加。這可能與激素的劑量效應(yīng)呈U型曲線有關(guān)。研究表明，AＲ基因敲除后，小鼠前列腺、精囊、附睪及球海綿體肌缺如，睪丸縮小，雄激素水平降低［9］。正常水平的雄激素作用需要一定數(shù)量的AＲ來維持，雄激素要與AＲ結(jié)合才能發(fā)揮作用，而AＲ表達(dá)的增多將會在一定程度上加強(qiáng)雄激素的作用，會促進(jìn)各種性征的提前發(fā)生。提示雙酚A可能通過影響AＲ的表達(dá)，進(jìn)一步

睪丸AＲ表達(dá)量明顯高于中、高劑量雙酚A組(P＜0.05)。注:A:對照組;B、C、D:雙酚A0.01、0.10、5.00mg/kg組。圖1雙酚A對子代成年雄鼠睪丸組織AＲ表達(dá)影響(免疫組化，×200)2.3.2Westernblot法(圖2)結(jié)果顯示，低、中、高劑量雙酚A組子代成年雄鼠AＲ表達(dá)量［分別為(0.6642±0.0141)、(0.6363±0.0062)、(0.2938±0.2522)］明顯高于對照組(0.2123±0.2793)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);雙酚A各劑量組之間雄鼠睪丸AＲ表達(dá)量也具有明顯差異(P＜0.05)，隨著雙酚A劑量增加，睪丸組織中AＲ表達(dá)量呈下降趨勢。注:A:對照組;B、C、D:雙酚A0.01、0.10、5.00mg/kg組。圖2雙酚A對子代成年雄鼠睪丸內(nèi)AＲ表達(dá)影響3討論研究表明孕期、哺乳期接觸雙酚A對子代小鼠成年后體重具有影響，可造成體重增加［6－7］。本研究結(jié)果表明，中、高劑量雙酚A組子代成年雄鼠體重明顯增加，提示雙酚A對肥胖現(xiàn)象有一定促進(jìn)作用，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果還表明，哺乳期雙酚A暴露可造成子代成年雄鼠睪丸系數(shù)減小，曲細(xì)精管直徑、生精上皮厚度不同程度降低及精子畸形率升高，提示雙酚A對睪丸的結(jié)構(gòu)以及生精系統(tǒng)功能完整性產(chǎn)生了一定影響。與張玉敏等［8］研究結(jié)果相同。本研究結(jié)果顯示，70日齡雄鼠睪丸細(xì)胞內(nèi)AＲ受體主要表達(dá)于胞漿和胞核內(nèi)，且雙酚A染毒組雄鼠AＲ表達(dá)呈不同程度增加。這可能與激素的劑量效應(yīng)呈U型曲線有關(guān)。研究表明，AＲ基因敲除后，小鼠前列腺、精囊、附睪及球海綿體肌缺如，睪丸縮小，雄激素水平降低［9］。正常水平的雄激素作用需要一定數(shù)量的AＲ來維持，雄激素要與AＲ結(jié)合才能發(fā)揮作用，而AＲ表達(dá)的增多將會在一定程度上加強(qiáng)雄激素的作用，會促進(jìn)各種性征的提前發(fā)生。提示雙酚A可能通過影響AＲ的表達(dá)，進(jìn)一步

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3 吳晟e

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