發(fā)布時(shí)間：2020-03-02 16:48

【摘要】：食品重金屬污染是世界范圍內(nèi)的安全問(wèn)題,鉛對(duì)兒童健康的影響是毒理學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。食品源性鉛是人體鉛中毒的一個(gè)重要來(lái)源。鉛暴露嚴(yán)重危害中樞神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、生長(zhǎng)發(fā)育等。低劑量鉛暴露對(duì)發(fā)育期神經(jīng)元樹突棘損傷的分子機(jī)制已有較多研究,但是目前鉛暴露對(duì)大腦海馬區(qū)樹突棘損傷的表觀遺傳學(xué)機(jī)制方面的研究尚不清楚。因此本課題旨在研究食源性鉛暴露對(duì)大腦海馬區(qū)神經(jīng)元樹突棘損傷的組蛋白的影響及其分子機(jī)制,并以此為鉛損傷的治療提供可靠的依據(jù)。目的探究鉛暴露對(duì)大腦海馬神經(jīng)元組蛋白H3K27me3的影響及其對(duì)樹突棘相關(guān)基因的調(diào)控是否發(fā)生改變;探究組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶EZH2在神經(jīng)元樹突棘發(fā)育過(guò)程中的作用;探究鉛暴露對(duì)組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶EZH2的影響;探究鉛暴露后miR-137對(duì)EZH2調(diào)控關(guān)系是否發(fā)生改變。方法1.從細(xì)胞水平研究食源性鉛暴露對(duì)組蛋白H3K27me3的影響。離體原代海馬神經(jīng)元鉛暴露的劑量為5μM,暴露時(shí)間為DIV3-DIV14。Western Blot檢測(cè)組蛋白H3K27me3的表達(dá)水平,免疫共沉淀技術(shù)(CHIP)檢測(cè)組蛋白對(duì)目標(biāo)基因的修飾、PCR檢測(cè)相關(guān)蛋白基因的表達(dá)。2.從細(xì)胞水平研究發(fā)育過(guò)程中EZH2的表達(dá)含量的變化。3.從整體動(dòng)物及離體培養(yǎng)的原代海馬神經(jīng)元兩個(gè)方面研究鉛暴露對(duì)EZH2表達(dá)的影響。SD鼠孕鼠期開始鉛暴露,鉛暴露的劑量為250ppm,暴露方式為自由飲水。4.從細(xì)胞水平研究鉛暴露后mi R-137對(duì)EZH2的調(diào)控作用。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-137對(duì)EZH2的調(diào)控,PCR檢測(cè)相關(guān)microRNA基因的表達(dá)。結(jié)果1.海馬神經(jīng)元發(fā)育過(guò)程中,EZH2的表達(dá)逐漸下降,其中第七天后表達(dá)量顯著下降(P0.001)。2.鉛暴露后顯著降低新生鼠海馬區(qū)EZH2的表達(dá),但是對(duì)皮層區(qū)沒有顯著影響。3.熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)表明miR-137與EZH2之間存在相互調(diào)控作用,且鉛暴露顯著上調(diào)miR-137的表達(dá)(P0.05)。4鉛暴露后組蛋白H3K27me3表達(dá)水平顯著下降(P0.001),其變化不受臨近位點(diǎn)H3K27me3S28P的影響;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)鉛通過(guò)下調(diào)EZH2的表達(dá)進(jìn)而抑制H3K27me3的表達(dá)。5.鉛暴露后,H3K27me3對(duì)參與樹突棘形成相關(guān)基因修飾水平發(fā)生改變。結(jié)論1.EZH2在神神經(jīng)元發(fā)育過(guò)程中表達(dá)量隨著發(fā)育成熟逐漸降低,鉛暴露抑制EZH2的表達(dá)進(jìn)而損傷神經(jīng)元樹突棘的形成。2.鉛暴露通過(guò)EZH2和miR-137的負(fù)向反饋放大效應(yīng)導(dǎo)致組蛋白H3K27me3甲基化穩(wěn)定下調(diào)。
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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