【摘要】：目的:通過檢測出生前DEHP暴露對成年后大鼠下丘腦前腹側室旁核(anteroventral periventricular nucleus,AVPV)和視前內(nèi)側核(medial preoptic nucleus,MPN)與生殖內(nèi)分泌調(diào)控相關的雌激素受體α(estrogen receptor alpha,ERα)、Kisspeptin和芳香化酶(aromatase,CYP19)蛋白表達的影響,探討出生前DEHP暴露對大鼠生殖神經(jīng)中樞的潛在干擾作用。方法:本研究將32只孕鼠按體重隨機分為4個劑量組:玉米油溶劑對照組、2 mg/kg、10 mg/kg和50 mg/kg DEHP劑量組,每組8只孕鼠。按1m L/100g體重的灌胃體積,自大鼠孕14天至孕19天(G14至G19)期間對孕鼠進行灌胃染毒。子代大鼠出生后第一天記為PND0,在PND21斷乳時雌、雄大鼠分籠飼養(yǎng)。飼養(yǎng)至成年時(PND70),每窩隨機選取1只子代大鼠(每組雌、雄各8只),4%多聚甲醛心臟灌流固定,取包含有下丘腦的腦組織用振動切片機切為40μm厚的腦切片。根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜,確定下丘腦AVPV核區(qū)和MPN核區(qū)的位置,每只大鼠挑選相同層面的一張腦切片用于檢測。腦切片采用免疫熒光組織化學法檢測下丘腦AVPV核區(qū)和MPN核區(qū)ERα、Kisspeptin和CYP19的蛋白表達水平。采用激光共聚焦顯微鏡對腦切片進行分層掃描,每張腦切片以1μm為間隔掃描10張圖像進行分析。采用Image J 1.46r軟件對圖像進行處理,計算每張圖像的光密度值后,用SPSS統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析和LSD檢驗,比較各處理組間三種蛋白表達水平的差異。結果:(1)雄性大鼠各DEHP處理組間AVPV核區(qū)ERα蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義。雌性大鼠各DEHP處理組間AVPV核區(qū)ERα蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學意義,與對照組相比,2 mg/kg DEHP處理組ERα蛋白表達水平降低(P=0.023),10 mg/kg DEHP處理組ERα蛋白表達水平有降低的趨勢(P=0.052)。(2)雄性大鼠各DEHP處理組間AVPV核區(qū)Kisspeptin蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義。雌性大鼠各DEHP處理組間AVPV核區(qū)Kisspeptin蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學意義,與對照組相比,2mg/kg DEHP處理組Kisspeptin蛋白表達水平有降低的趨勢(P=0.060),10 mg/kg和50 mg/kg DEHP處理組Kisspeptin蛋白表達水平降低(P=0.012和P=0.040)。(3)雄性和雌性大鼠各DEHP處理組間AVPV核區(qū)CYP19蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義。(4)雄性和雌性大鼠各DEHP處理組間MPN核區(qū)ERα蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義。(5)雄性和雌性大鼠各DEHP處理組間MPN核區(qū)CYP19蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義。結論:(1)出生前DEHP暴露可降低成年后雌性大鼠AVPV核區(qū)ERα及Kisspeptin的表達,未發(fā)現(xiàn)對成年后雄性大鼠AVPV核區(qū)ERα及Kisspeptin表達水平的影響;(2)本研究條件下,未發(fā)現(xiàn)出生前DEHP暴露對成年后大鼠AVPV核區(qū)CYP19表達的影響;(3)本研究條件下,未發(fā)現(xiàn)出生前DEHP暴露對成年后大鼠MPN核區(qū)ERα和CYP19表達的影響;(4)出生前DEHP暴露對成年后大鼠AVPV核區(qū)ERα及Kisspeptin表達的影響表現(xiàn)為性別差異性,并且對ERα的影響呈現(xiàn)低劑量效應。
【圖文】：

采用 Olympus FV1000 型激光掃描共聚焦顯微鏡在 488 nm 激發(fā)光波長下觀察免疫熒光組織化學腦片，所有大鼠腦片在鏡下掃描參數(shù)保持一致。首先在 10倍鏡下找到AVPV核區(qū)及MPN核區(qū)位置后在40倍鏡下進行斷層掃描（見圖1.1）。每張腦片掃描 10 個層面，，每層間隔 1μm，總厚度為 9 μm。圖 1.1 免疫熒光切片核區(qū)位置（10×）（黃色標記區(qū)域為 AVPV 核區(qū)及 MPN 核區(qū)，紅色標記區(qū)域為斷層掃描區(qū)域，3V 為第三腦室）每張腦片 10 個層面的圖像采用 Image J 1.46r 軟件進行處理并分析，分析過程如下：（1）將圖片轉化為 8 bit 格式圖片后翻轉（Invert）；（2）打開分析菜單中的校準選項，選擇未校準的 OD 值（Analyze > Calibrate > Uncalibrated OD）；（3）打開分析菜單中的選擇測量參數(shù)對話框，選擇面積、平均灰度值、積分光密度值等選項。（4）打開選區(qū)編輯器設置選區(qū)（Region of Interest Manager

2.1 出生前 DEHP 暴露對大鼠下丘腦 AVPV 核區(qū) ERα、Kisspeptin 和CYP19 表達的影響.1.1 出生前 DEHP 暴露對大鼠下丘腦 AVPV 核區(qū) ERα蛋白表達的影響各 DEHP 處理組雄性和雌性大鼠下丘腦 AVPV 核區(qū) ERα熒光強度見圖 210×）和圖 2.2（40×）。由圖 2.3 可見，各 DEHP 處理組雄性大鼠下丘腦 AVP區(qū) ERα蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義（F = 0.226，P = 0.878）。各 DEHP 處組雌性大鼠下丘腦 AVPV 核區(qū) ERα蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學意義（F = 3.62 = 0.031），與對照組相比，2 mg/kg DEHP 處理組 ERα蛋白表達水平約降低 44%P = 0.023），10 mg/kg DEHP 處理組 ERα蛋白表達水平有降低的趨勢（P .052）。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 劉曉霞;翟曜耀;趙越;;雌激素受體ERα的功能調(diào)控及相關疾病的研究進展[J];中國細胞生物學學報;2011年01期

2 董朝軒;關云謙;張愚;;雌激素與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[J];生理科學進展;2006年02期

相關碩士學位論文 前4條

1 黃玉敬;出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關基因表達的影響[D];天津醫(yī)科大學;2016年

2 張鈺;出生前DEHP暴露對子代雄性大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能的影響[D];天津醫(yī)科大學;2015年

3 羅清清;雌激素和雙酚A快速影響發(fā)育中大鼠海馬NMDA受體活性及其機制[D];浙江師范大學;2010年

4 葉銀萍;雙酚A對大鼠海馬神經(jīng)元樹突發(fā)育的影響及其分子機制[D];浙江師范大學;2010年

本文編號：2557894