發(fā)布時間：2019-10-24 19:47

【摘要】：釀膿鏈球菌是一種常見的食源性致病菌,它能夠引起猩紅熱、膿皰瘡、兒童急性咽炎等一系列感染,而且可以通過食物、水源和空氣等途徑傳播,快速準(zhǔn)確的鑒定是控制這些感染的關(guān)鍵。常用的釀膿鏈球菌檢測方法有培養(yǎng)分離法、免疫學(xué)方法和PCR等,這些方法有一定的限制,很難應(yīng)對突發(fā)緊急衛(wèi)生事件,因此,需要一種更加快速、靈敏、便捷的新方法。本研究以釀膿鏈球菌特異轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因Spy1258為靶基因進(jìn)行引物設(shè)計,對釀膿鏈球菌環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)檢測的最佳引物、反應(yīng)最佳溫度進(jìn)行分析篩選,對其特異性和敏感性進(jìn)行測定,建立一套完整的釀膿鏈球菌LAMP檢測體系,并用LMAP法對收集于北京市的30株菌株進(jìn)行檢測,并對陽性菌株進(jìn)行emm基因分型。主要結(jié)論如下:選擇Primer Explorer V4軟件設(shè)計了三套引物SP-36、SP-84和SP-106,以釀膿鏈球菌DNA為模板,進(jìn)行LAMP反應(yīng),試驗結(jié)果表明,引物SP-106為最佳引物,64℃為最佳反應(yīng)溫度,引物SP-106對Spy1258基因具有良好的特異性,釀膿鏈球菌LAMP檢測方法敏感性是PCR法的10倍,對釀膿鏈球菌DNA最低檢測濃度達(dá)到1.486 pg/μl。用建立的LAMP方法對30株樣本進(jìn)行檢測,30株樣本均為釀膿鏈球菌,emm基因分型結(jié)果表明,30株釀膿鏈球菌被分成emm1、emm4、emm12和emm58四種emm型,其中emm12和emm1所占比例最大,達(dá)到83.3%。LAMP技術(shù)能夠檢測釀膿鏈球菌,而且更加靈敏和便捷,節(jié)省時間和成本,可成為一種有效的釀膿鏈球菌檢測方法。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5;Q93

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 蘇健,龔守芳;A族乙型溶血性鏈球菌em m基因測序分型的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2003年01期

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本文編號：2552682