發(fā)布時間：2019-09-13 05:34

【摘要】：研究背景： 雙酚A(BPA)是眾所周知的環(huán)境內(nèi)分泌干擾化合物，由于它在人群中的廣泛暴露和分布，近年來，它的健康危害引起了公眾的廣泛關(guān)注。因為它的化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌二醇很相似，所以BPA潛在的生殖毒性被廣泛研究。研究表明BPA能引起線蟲和雌鼠的減數(shù)分裂異常。然而，是否環(huán)境暴露于BPA能引起生殖障礙仍有爭議，BPA對成年雄性動物減數(shù)分裂的影響知之甚少，而且相關(guān)機(jī)制不清楚。 研究內(nèi)容： ①我們將9周齡的雄性Wistar大鼠經(jīng)口暴露于20μg/kg bw/day的BPA.連續(xù)暴露60天后，我們采用HE染色檢測組織學(xué)變化，采用PAS-H染色檢測生精上皮周期的變化，采用減數(shù)分裂染色質(zhì)擴(kuò)散技術(shù)來顯示減數(shù)分裂過程，采用免疫熒光技術(shù)檢測核內(nèi)SCP3，γH2AX，ATM和CHK1的表達(dá)。 ②我們用灌胃法將9周齡的雄性Wistar大鼠暴露于0、2、20、200μg/kg bw/day的BPA，持續(xù)60天。10μg/kg bw/day的E2用來建立雌激素陽性效應(yīng)。ICI182780用來拮抗雌激素信號。處理完成后，我們分析了精子參數(shù)，精子凋亡率和性激素水平，我們采用PAS-H染色檢測生精上皮周期的變化，，采用流式細(xì)胞技術(shù)分析減數(shù)分裂進(jìn)程，采用免疫熒光技術(shù)檢測核內(nèi)SCP3, γH2AX，ATM的表達(dá)，采用彗星實驗檢測額外的DNA鏈斷裂，采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶脫氧尿苷三磷酸切口末端標(biāo)記(TUNEL)和免疫印跡技術(shù)檢測半胱天冬酶3表達(dá)來評價精細(xì)胞凋亡情況。 ③我們將成年雄性SD大鼠經(jīng)口暴露于200mg/kg bw/day的BPA.連續(xù)暴露10天，采用褪黑素預(yù)處理來評價褪黑素可能的保護(hù)作用。我們檢測了睪丸組織中硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量，分離獲得精母細(xì)胞，采用彗星實驗和減數(shù)分裂染色質(zhì)擴(kuò)散技術(shù)評價DNA損傷效應(yīng)。 研究結(jié)果： ①我們發(fā)現(xiàn)環(huán)境相關(guān)劑量的BPA暴露顯著增加了生精上皮周期第7期的比例，減少了第8期的比例，結(jié)果導(dǎo)致了精子釋放受到抑制，精子發(fā)生過程受到干擾。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，BPA暴露在減數(shù)分裂早期阻礙了減數(shù)分裂啟動，并且在減數(shù)分裂晚期引起了染色質(zhì)異常和減數(shù)分裂DNA鏈的持續(xù)斷裂。后一事件激活了下游的ATM信號分子。 ②200μg/kg bw/day的BPA和E2處理顯著降低精子數(shù)目，抑制以第7期增多、第8期減少為特征的精子釋放。并且伴隨著第一次減數(shù)分裂進(jìn)程的擾亂和粗線期精母細(xì)胞減數(shù)分裂DNA鏈的持續(xù)斷裂，下游ATM和CHK2信號分子活化；這最終導(dǎo)致了精細(xì)胞的凋亡。采用雌激素受體拮抗劑ICI182780，我們發(fā)現(xiàn)雌激素受體信號通路介導(dǎo)了BPA引起的減數(shù)分裂擾亂和生殖功能損害。 ③10天的高劑量BPA暴露不能影響大鼠體重，生殖器官重量和精子計數(shù)。然而，我們發(fā)現(xiàn)BPA暴露顯著增多TBARS含量，降低SOD含量，并且伴隨著精細(xì)胞DNA拖尾率增加和粗線期精母細(xì)胞常染色質(zhì)上γH2AX焦點增多。還引起了4倍體細(xì)胞比例的下降。這些效應(yīng)被褪黑素預(yù)處理顯著減輕。然而BPA的基因毒性并不伴隨著精細(xì)胞凋亡和睪丸組織結(jié)構(gòu)的改變。 研究結(jié)論： 總之，我們的結(jié)果表明長期暴露于環(huán)境相關(guān)劑量的BPA能導(dǎo)致持續(xù)的減數(shù)分裂異常，并最終威脅男性生殖健康。后續(xù)研究提示，雌激素受體介導(dǎo)的減數(shù)分裂擾亂可能是BPA引起減數(shù)分裂異常的主要原因。這些動物實驗數(shù)據(jù)支持了當(dāng)前男性生殖功能異常與BPA的環(huán)境暴露相關(guān)的論點。褪黑素預(yù)處理對BPA引起的精細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用提示褪黑素可能作為預(yù)防職業(yè)或者環(huán)境BPA暴露引起的基因毒性和生殖毒性的備選藥物。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114

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本文編號：2535609