【摘要】：研究背景： 雙酚A(BPA)是眾所周知的環(huán)境內(nèi)分泌干擾化合物，由于它在人群中的廣泛暴露和分布，近年來，它的健康危害引起了公眾的廣泛關(guān)注。因為它的化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌二醇很相似，所以BPA潛在的生殖毒性被廣泛研究。研究表明BPA能引起線蟲和雌鼠的減數(shù)分裂異常。然而，是否環(huán)境暴露于BPA能引起生殖障礙仍有爭議，BPA對成年雄性動物減數(shù)分裂的影響知之甚少，而且相關(guān)機制不清楚。 研究內(nèi)容： ①我們將9周齡的雄性Wistar大鼠經(jīng)口暴露于20μg/kg bw/day的BPA.連續(xù)暴露60天后，我們采用HE染色檢測組織學(xué)變化，采用PAS-H染色檢測生精上皮周期的變化，采用減數(shù)分裂染色質(zhì)擴散技術(shù)來顯示減數(shù)分裂過程，采用免疫熒光技術(shù)檢測核內(nèi)SCP3，γH2AX，ATM和CHK1的表達。 ②我們用灌胃法將9周齡的雄性Wistar大鼠暴露于0、2、20、200μg/kg bw/day的BPA，持續(xù)60天。10μg/kg bw/day的E2用來建立雌激素陽性效應(yīng)。ICI182780用來拮抗雌激素信號。處理完成后，我們分析了精子參數(shù)，精子凋亡率和性激素水平，我們采用PAS-H染色檢測生精上皮周期的變化，，采用流式細胞技術(shù)分析減數(shù)分裂進程，采用免疫熒光技術(shù)檢測核內(nèi)SCP3, γH2AX，ATM的表達，采用彗星實驗檢測額外的DNA鏈斷裂，采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶脫氧尿苷三磷酸切口末端標記(TUNEL)和免疫印跡技術(shù)檢測半胱天冬酶3表達來評價精細胞凋亡情況。 ③我們將成年雄性SD大鼠經(jīng)口暴露于200mg/kg bw/day的BPA.連續(xù)暴露10天，采用褪黑素預(yù)處理來評價褪黑素可能的保護作用。我們檢測了睪丸組織中硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量，分離獲得精母細胞，采用彗星實驗和減數(shù)分裂染色質(zhì)擴散技術(shù)評價DNA損傷效應(yīng)。 研究結(jié)果： ①我們發(fā)現(xiàn)環(huán)境相關(guān)劑量的BPA暴露顯著增加了生精上皮周期第7期的比例，減少了第8期的比例，結(jié)果導(dǎo)致了精子釋放受到抑制，精子發(fā)生過程受到干擾。進一步研究發(fā)現(xiàn)，BPA暴露在減數(shù)分裂早期阻礙了減數(shù)分裂啟動，并且在減數(shù)分裂晚期引起了染色質(zhì)異常和減數(shù)分裂DNA鏈的持續(xù)斷裂。后一事件激活了下游的ATM信號分子。 ②200μg/kg bw/day的BPA和E2處理顯著降低精子數(shù)目，抑制以第7期增多、第8期減少為特征的精子釋放。并且伴隨著第一次減數(shù)分裂進程的擾亂和粗線期精母細胞減數(shù)分裂DNA鏈的持續(xù)斷裂，下游ATM和CHK2信號分子活化；這最終導(dǎo)致了精細胞的凋亡。采用雌激素受體拮抗劑ICI182780，我們發(fā)現(xiàn)雌激素受體信號通路介導(dǎo)了BPA引起的減數(shù)分裂擾亂和生殖功能損害。 ③10天的高劑量BPA暴露不能影響大鼠體重，生殖器官重量和精子計數(shù)。然而，我們發(fā)現(xiàn)BPA暴露顯著增多TBARS含量，降低SOD含量，并且伴隨著精細胞DNA拖尾率增加和粗線期精母細胞常染色質(zhì)上γH2AX焦點增多。還引起了4倍體細胞比例的下降。這些效應(yīng)被褪黑素預(yù)處理顯著減輕。然而BPA的基因毒性并不伴隨著精細胞凋亡和睪丸組織結(jié)構(gòu)的改變。 研究結(jié)論： 總之，我們的結(jié)果表明長期暴露于環(huán)境相關(guān)劑量的BPA能導(dǎo)致持續(xù)的減數(shù)分裂異常，并最終威脅男性生殖健康。后續(xù)研究提示，雌激素受體介導(dǎo)的減數(shù)分裂擾亂可能是BPA引起減數(shù)分裂異常的主要原因。這些動物實驗數(shù)據(jù)支持了當前男性生殖功能異常與BPA的環(huán)境暴露相關(guān)的論點。褪黑素預(yù)處理對BPA引起的精細胞DNA損傷的保護作用提示褪黑素可能作為預(yù)防職業(yè)或者環(huán)境BPA暴露引起的基因毒性和生殖毒性的備選藥物。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王堅毅;蔣明;;減數(shù)分裂教學(xué)中要注意的問題[J];衛(wèi)生職業(yè)教育;2005年23期

2 胡明;對減數(shù)分裂的新理解[J];生物學(xué)通報;2000年01期

3 郭向東;核型與減數(shù)分裂的課程設(shè)計[J];衛(wèi)生職業(yè)教育;2005年05期

4 盧寶榮;披堿草X球莖大麥屬間雜種的減數(shù)分裂研究[J];遺傳學(xué)報;1997年03期

5 關(guān)澤紅;旭日干;;CDK2在精母細胞和卵母細胞減數(shù)分裂中的作用[J];生理科學(xué)進展;2008年02期

6 李義文,李洪杰,梁輝,唐順學(xué),賈雙娥,沈天民,李振聲,賈旭;熒光原位雜交分析小麥-簇毛麥雜種減數(shù)分裂與染色體易位[J];遺傳學(xué)報;2000年04期

7 王珂;吳應(yīng)積;;視黃酸在精子發(fā)生過程中引發(fā)減數(shù)分裂的信號通路[J];中華男科學(xué)雜志;2013年02期

8 王正詢，林兆平，潘坤清;蕉類的細胞遺傳學(xué)研究[J];遺傳學(xué)報;1994年06期

9 白云,韓秀玲,王明艷;減數(shù)分裂材料的選擇與壓片技術(shù)的改進[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年04期

10 史慶華,張堅宣,潘淑娟,張錫然,陳宜峰,單祥年,黃浩杰,余龍,趙壽元,鄭其平,AdlerI．－D．;用GT重復(fù)多態(tài)性診斷21三體患者中超數(shù)21號染色體減數(shù)分裂起源的研究[J];遺傳學(xué)報;1998年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 彭永康;霍昕;于玲;;百合減數(shù)分裂不同時期細胞的顯微分離與蛋白質(zhì)電泳[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

2 李浩;孟凡銳;國春策;山紅艷;孔宏智;;MeiosisDB:一個綜合的減數(shù)分裂數(shù)據(jù)庫[A];生態(tài)文明建設(shè)中的植物學(xué)：現(xiàn)在與未來——中國植物學(xué)會第十五屆會員代表大會暨八十周年學(xué)術(shù)年會論文集——第1分會場：系統(tǒng)與進化植物學(xué)[C];2013年

3 陸立立;程祝寬;高勇;張娟;張媛;陳建民;;OsREC8蛋白在水稻減數(shù)分裂中的作用[A];現(xiàn)代分子植物育種與糧食安全研討會論文集[C];2011年

4 張亞楠;田惠橋;;白菜減數(shù)分裂中微管骨架異常與花粉雄性不育[A];中國植物學(xué)會植物細胞生物學(xué)2010年學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2010年

5 張道生;陳建國;蔡得田;;水稻多倍體雜種減數(shù)分裂行為的細胞學(xué)和分子標記分析[A];湖北省植物生理學(xué)會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

6 張美佳;夏國良;;顆粒細胞上的配體NPPC及其受體NPR2維持小鼠卵母細胞減數(shù)分裂的阻滯[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學(xué)學(xué)會全體會員代表大會暨第十二次學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

7 穆欣藝;溫婧;郭萌;王建為;李舸;張華;邊鳳花;夏國良;;視黃酸與中腎對小鼠卵巢生殖細胞啟動減數(shù)分裂的作用[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

8 范衡宇;佟超;騰春波;楊增明;陳大元;孫青原;;Polo-like激酶在大鼠卵母細胞減數(shù)分裂成熟、受精和胚胎卵裂中的作用[A];第九次全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2003年

9 范衡宇;佟超;陳大元;孫青原;;核糖體S6蛋白激酶p90rsk在豬卵母細胞減數(shù)分裂成熟和受精中的作用[A];第九次全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2003年

10 崔映宇;;學(xué)生批判性思維能力在細胞生物學(xué)教學(xué)過程中的培養(yǎng)(Ⅰ)—求“同”與求“異”:以“有絲分裂”與“減數(shù)分裂”的比較為例[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 寶坻一中 李金秋;如何設(shè)計“開場白”[N];天津教育報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 謝輝蓉;促減數(shù)分裂甾醇對小鼠卵母細胞減數(shù)分裂的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

2 劉文靜;CDK2及其磷酸化調(diào)控小鼠減數(shù)分裂進程的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

3 王f ;EVL-14/PDS-5和SCC-3是線蟲有絲分裂和減數(shù)分裂必需的姐妹染色單體粘連蛋白[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

4 王士泉;芍藥屬兩物種染色體結(jié)構(gòu)變異雜合性研究[D];中國科學(xué)院研究生院（植物研究所）;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王少博;百合減數(shù)分裂在晚偶線期到粗線期特異表達基因的克隆和功能分析[D];蘭州大學(xué);2009年

2 白汝嵐;MPF對精母細胞減數(shù)分裂調(diào)控作用的研究[D];西南大學(xué);2008年

3 陸立立;OsREC8蛋白在水稻減數(shù)分裂中的作用[D];揚州大學(xué);2011年

4 蔣汶洮;RA在硬骨魚類減數(shù)分裂起始中作用的初步研究[D];西南大學(xué);2012年

5 劉利杰;山羊卵母細胞減數(shù)分裂機制的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

6 池正昌;水稻減數(shù)分裂基因OsSGO1功能研究與分析[D];揚州大學(xué);2010年

7 孟小倩;豬或小鼠卵母細胞減數(shù)分裂成熟過程中PKC和MAPK信號通路的對話及γ-微管蛋白定位研究[D];山東師范大學(xué);2004年

8 王冬雪;蚤蠅染色體核型及減數(shù)分裂染色體行為研究[D];沈陽大學(xué);2011年

9 孫巖;TBP在減數(shù)分裂和胚胎早期發(fā)育過程中的動力學(xué)變化[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

10 劉剛;孕激素（DHP）在硬骨魚類減數(shù)分裂啟動過程中的作用機制研究[D];西南大學(xué);2014年

本文編號：2535609