【摘要】：[研究目的] 本文將非洲爪蟾染毒不同濃度的阿特拉津,在2個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣,分析和探討阿特拉津?qū)ξ鳁惿婧桶l(fā)育的毒性。運(yùn)用全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選性腺組織的敏感基因和對(duì)性腺產(chǎn)生發(fā)育毒性可能存在的細(xì)胞信號(hào)通路；運(yùn)用Real time RT-PCR技術(shù)分析阿特拉津?qū)Ω闻K相關(guān)基因表達(dá)的影響,研究阿特拉津?qū)Ψ侵拮Χ旮闻K的毒性作用。運(yùn)用以上兩種方法初步探索阿特拉津?qū)Ψ侵拮赴l(fā)育毒性作用的機(jī)制。 [研究方法] 本次實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組和4個(gè)阿拉津染毒組,分別是0.1、1、10和100μg/I.組,每組隨機(jī)挑選30只非洲爪蟾蝌蚪。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),取非洲爪蟾的性腺和肝臟組織,進(jìn)行稱重和基本形態(tài)觀察,并迅速置于液氮中保存。運(yùn)用非洲爪蟾全基因組表達(dá)譜芯片和Real time RT-PCR技術(shù),對(duì)性腺組織進(jìn)行敏感基因和細(xì)胞信號(hào)通路的篩選,對(duì)肝臟組織進(jìn)行相關(guān)基因表達(dá)的研究。 [研究結(jié)果] 1阿特拉津?qū)Ψ侵拮敢话闵L(zhǎng)發(fā)育情況的影響 阿特拉津?qū)Ψ侵拮傅捏w長(zhǎng)、體重、性腺重沒(méi)有顯著影響(p0.05),0.1、1、10μg/L組的肝臟重量顯著降低(p0.05)；10、100μg/L染毒組肝臟系數(shù)有所升高(p0.05)：0.1和100μ/L阿特拉津組的蝌蚪完成變態(tài)的時(shí)間較長(zhǎng)于其他組,但差異無(wú)顯著性(p0.05)；變態(tài)完成后,性別比沒(méi)有發(fā)生顯著變化(p0.05)；0.1、1、10和100μg/L劑量組均有雄性性腺出現(xiàn)不連續(xù)發(fā)育,存在不同程度的斷裂。 2阿特拉津?qū)π坌苑侵拮感韵倜舾谢蚝图?xì)胞信號(hào)通路的篩選 通過(guò)GO分析,在分子功能、生物過(guò)程和細(xì)胞組成三個(gè)部分獲得了差異基因聚集的多條功能條目。通過(guò)Pathway分析,我們得到了6條差異顯著的細(xì)胞信號(hào)通路,分別是精氨酸和脯氨酸能量代謝通路、細(xì)胞周期通路、剪接體通路、堿基切除修復(fù)通路、核黃素代謝通路和孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟通路。 3阿特拉津?qū)Ψ侵拮父闻K相關(guān)基因表達(dá)的影響 阿特拉津使100μg/L組雄性非洲爪蟾的AR水平顯著增高(p0.05),使100μg/L組非洲爪蟾HSP90表達(dá)水平顯著升高(p0.05)，而對(duì)VTG、ER、HSP70和GR的表達(dá)水平無(wú)顯著性影響(p0.05)。 [研究結(jié)論] 1阿特拉津使0.1、1、10μg/L組非洲爪蟾的肝臟重量顯著降低,10、100μg/L染毒組肝臟系數(shù)有所升高,對(duì)其他一般生長(zhǎng)情況無(wú)顯著影響；阿特拉津在一定程度上抑制了非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)；性別比沒(méi)有明顯變化；各組均有發(fā)育不連續(xù)的雄性性腺,出現(xiàn)異常節(jié)段。 2阿特拉津?qū)π坌苑侵拮感韵佼a(chǎn)生發(fā)育毒性可能與6條細(xì)胞信號(hào)通路相關(guān),分別是精氨酸和脯氨酸能量代謝通路、細(xì)胞周期通路、剪接體通路、堿基切除修復(fù)通路、核黃素代謝通路和孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟通路。G0分析后獲得差異功能聚集的多條功能條目。 3阿特拉津使100μg/L組雄性非洲爪蟾肝臟內(nèi)AR水平顯著增高,使100μg/L組非洲爪蟾HSP90表達(dá)水平顯著升高,而對(duì)VTG、ER、HSP70和GR的表達(dá)水平無(wú)顯著性影響。
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R114

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