【摘要】：目的建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)測定野生毒菌中的毒蠅堿和毒蠅母的方法。方法野生毒菌中的毒蠅堿和毒蠅母用甲醇提取,經(jīng)SPE-C18固相萃取小柱凈化和Waters BEH Amide柱(2.1 mm×100mm,1.7μm)分離,在ESI源正離子模式下檢測。結(jié)果該方法毒蠅堿和毒蠅母的檢出限分別為0.5μg/kg和2.0μg/kg,線性范圍分別為1~50μg/kg和10~500μg/kg,2個濃度加標回收率分別為90.3%~108.6%和87.8%~107.9%,相對標準偏差為3.2%~5.1%(n=6)。結(jié)論該方法準確,快速、靈敏,適合野生毒菌子實體中的毒蠅堿和毒蠅母的測定。
【圖文】：

與多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)方式優(yōu)化霧化氣(GS1)輔助氣(GS2)氣簾氣(CUR)碰撞氣(CAD)離子源電壓(IS)離子化溫度(TEM)等質(zhì)譜參數(shù)，使毒蠅堿、毒蠅母的離子化效率達到最佳，質(zhì)譜參數(shù)見表1。2.3色譜條件的優(yōu)化毒蠅堿、毒蠅母在C18[7]或C8液相色譜柱上不能很好吸附，出峰太快，且不能充分分離，以至于在UPLC-MS/MSTIC圖不能分離。經(jīng)過摸索本文用WatersBEHAmide2.1mm×100mm,1.7μm色譜柱，能夠在UPLC-MS/MSTIC圖上很好的分離毒蠅堿、毒蠅母，且出峰穩(wěn)定、快速。毒蠅堿、毒蠅母標準及毒菌樣品中的提取離子（XIC）圖，分別見圖1、圖2。表1梯度洗脫程序時間(min)A%(5mmol/L和0.1%甲酸)水B%乙腈0.130701.090101.590102.030705.03070分析物保留時間（min）離子對(m/z)碰撞氣能量CE(eV)去簇電壓DP(eV)毒蠅堿1.24174.0/57.1/97.230.8/25.437.89毒蠅母1.46115.3/68.1/98.124.1/15.227.70表2毒蠅堿、毒蠅母MRM監(jiān)測參數(shù)圖1毒蠅堿（Muscarine）、毒蠅母（Muscimol）標準提取離子（XIC）圖·4067·

?動相，對毒蠅堿、毒蠅母進行洗脫分離效果評價，結(jié)果表明使用乙腈/5mmol/L和0.1%甲酸水進行梯度度洗脫，能較為理想。2.5線性范圍與檢出限毒蠅堿、毒蠅母的線性方程線性范圍和線性相關(guān)系數(shù)見表3。以信噪比為5倍噪聲估算檢出限(LOD)，樣品中毒蠅堿、毒蠅母的檢出限分別為0.5μg/kg，2μg/kg。2.6方法的回收率與精密度取1份樣品，分別進行低、高濃度2種不同濃度加標試驗，毒蠅堿在90.3%～108.6%，毒蠅母在87.8%～107.9%，6次平行測定相對標準差平均值（RSD）毒蠅堿在3.2%～5.1%,毒蠅母3.6%～4.5%，結(jié)果見表4。圖2小豹斑鵝膏菌中毒蠅堿（Muscarine，1.23）、毒蠅母（Muscimol，1.44）提取離子（XIC）圖分析物線性方程線性范圍（μg/kg）相關(guān)系數(shù)（r值）檢出限（μg/kg）毒蠅堿y=795x-1831～500.99910.5毒蠅母y=47.2x-34010～5000.99942.0表3毒蠅堿、毒蠅母的線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限分析物加標量（μg/kg）平均回收率（%）CV（%）加標量（μg/kg）平均回收率（%）CV（%）樣品+毒蠅堿490.35.120108.63.2樣品+毒蠅母4087.84.5200107.93.62.7定性測定樣品溶液按照液相色譜/質(zhì)譜測定條件分別進行測定，進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致，，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的2個二級特征離子均出現(xiàn)，且與標準樣品的2個特征離子相一致，則可判斷樣品中存在毒蠅堿、毒蠅母。2.8定量測定本方法采用外標校準曲線法進行定量測定，為減少流動相對定量測定的影響，采用初始流動相來配制標準系列溶液，繪制標準曲線，并且保證所測樣品中毒蠅堿、毒蠅母的響應(yīng)值均在儀器的線性范圍內(nèi)。檢測云南野生小豹斑鵝膏菌中的毒蠅堿和毒蠅母，含量分別為毒蠅堿116.7mg/kg，毒蠅母586.8mg/k
【作者單位】： 云南省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：云南省衛(wèi)生科技項目(編號:2014NS352)
【分類號】：R155.5


本文編號：2529400