【摘要】：研究背景 目前,心血管疾病已經(jīng)成為導(dǎo)致世界人口死亡的主要原因,動脈粥樣硬化(AS)是其主要的病理基礎(chǔ)。在AS復(fù)雜的形成機(jī)制中,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷是最為重要的起始環(huán)節(jié)。大量實(shí)驗(yàn)研究顯示,大蒜和硒均具有抗氧化、抗凝血、降血脂等作用,能夠抑制多種AS形成的危險因素,從而降低心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險。 上世紀(jì)90年代開始,人們就考慮將大蒜與硒結(jié)合使用,以增強(qiáng)其抗AS的作用。本課題組早在1996年就已發(fā)現(xiàn)大蒜制品與無機(jī)硒聯(lián)合使用能夠降低高脂飲食造成的家兔血脂水平,并能降低人類的胃癌死亡率。但研究中也發(fā)現(xiàn),簡單地將大蒜制品與無機(jī)硒混合使用,會因其pH值不同而彼此間發(fā)生中和反應(yīng),降低各自的生物活性。另外,無機(jī)硒具有蓄積毒性因而不宜長期使用,而有機(jī)硒雖然毒性低但制備困難且價格昂貴,也難以長期使用。這些問題都使得如何能將硒與大蒜有效地結(jié)合,且既能避免硒的毒性作用,又簡便、經(jīng)濟(jì)成為了一大難題。此時,富硒大蒜的培育成功為解決這一問題提供了新的思路。 大蒜本身具有硒富集作用,若在種植時施加高濃度的硒肥,就可以從外界吸收無機(jī)硒,并通過天然的生物轉(zhuǎn)化作用將其轉(zhuǎn)化為有機(jī)形式。富硒大蒜不僅兼具硒和大蒜二者的生物活性成分,而且它所含有的硒成分毒性和蓄積性也大大降低。因此,若能證實(shí)富硒大蒜具有抗AS作用,則既能為防治心血管疾病提供新的方法,同時也能為富硒大蒜種植打開更為廣闊的市場。 目前,有關(guān)富硒大蒜抗AS作用的研究尚不多見。故此,本研究首先將對富硒大蒜的主要組成部分——大蒜和硒的抗AS作用進(jìn)行探討。由于AS是一種病理改變過程,臨床上不易檢出和確定。而冠心病作為AS最常導(dǎo)致的心血管疾病之一,在習(xí)慣上常被等同于冠狀動脈粥樣硬化性心臟病。故此,本研究采用冠心病代替AS作為研究對象,利用Meta分析方法對硒和大蒜防治冠心病的作用進(jìn)行定量綜合,以期評價二者對AS形成與發(fā)展的作用,進(jìn)而從一定程度上為探討富硒大蒜抗AS的作用提供理論基礎(chǔ)。 現(xiàn)有的針對富硒大蒜的實(shí)驗(yàn)室研究主要集中于其抗癌和抗氧化作用方面,有關(guān)其對內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究較少。而ox-LDL造成的內(nèi)皮細(xì)胞損傷正是AS的重要起始環(huán)節(jié)。若能證實(shí)富硒大蒜具有抑制ox-LDL造成的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用,或許就可以從形成機(jī)制的角度提示其具有抗AS的作用。因此,本研究也將采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的方法,探討富硒大蒜對ox-LDL造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的兩個主要特征——細(xì)胞活性下降和細(xì)胞凋亡的影響 研究目的 1.收集有關(guān)含硒或大蒜制品防治冠心病的隨機(jī)對照試驗(yàn)文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析,探討使用含硒或大蒜制品能否有效防治冠心病,以期評價二者抑制AS形成與發(fā)展的作用,進(jìn)而從一定程度上為富硒大蒜抗AS作用提供理論基礎(chǔ)。 2.采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的方法,探討富硒大蒜對ox-LDL的抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性和促細(xì)胞凋亡作用的影響,同時比較富硒大蒜、普通大蒜與有機(jī)硒的單獨(dú)或聯(lián)合使用等四種處理措施在相同條件下的作用,為今后防治AS的研究提供依據(jù)。 研究內(nèi)容和方法 一、含硒或大蒜制品治療冠心病效果的Meta分析 從相關(guān)期刊論文(CNKI)、PubMed等七種中英文數(shù)據(jù)庫中,檢索出2012年1月1日前公開發(fā)表的,以使用含硒或大蒜制品防治冠心病為研究內(nèi)容的中英文隨機(jī)對照試驗(yàn)文獻(xiàn)。對檢索到的文獻(xiàn)進(jìn)行納入、排除和質(zhì)量評價,從符合入選標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)中提取相關(guān)數(shù)據(jù)資料,經(jīng)異質(zhì)性檢驗(yàn)后進(jìn)行定量合并,必要時進(jìn)行亞組分析和敏感性分析,以Egger's檢驗(yàn)評價發(fā)表偏倚。全部統(tǒng)計(jì)分析采用STATA11.2軟件進(jìn)行。 二、富硒大蒜抗ox-LDL對內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究 采用有機(jī)溶劑萃取法提取富硒大蒜油和普通大蒜油。氫化物發(fā)生原子熒光法測定富硒大蒜油中的硒含量。甲基四唑鹽(MTT)比色法檢測富硒大蒜油在不同濃度、不同作用時間下對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304細(xì)胞活性率的影響。采用4×3×3析因設(shè)計(jì),檢測富硒大蒜油、普通大蒜油、有機(jī)硒、普通大蒜油和有機(jī)硒聯(lián)用四種處理措施在24、48、72小時三種作用時間,低、中、高三種濃度下對ox-LDL造成的ECV-304細(xì)胞活性下降的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測富硒大蒜油、普通大蒜油、有機(jī)硒單獨(dú)或聯(lián)合使用等四種處理措施對ox-LDL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響。 研究結(jié)果 一、含硒或大蒜制品防治冠心病效果的Meta分析 1.含硒制品防治冠心病效果的Meta分析 1.1異質(zhì)性檢驗(yàn)及定量合并結(jié)果：共8篇文獻(xiàn)納入研究,異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=40.9%,合并RR=0.87(0.74,1.02)。 1.2亞組分析結(jié)果：按研究設(shè)計(jì)類型為臨床試驗(yàn)或現(xiàn)場試驗(yàn)進(jìn)行亞組分析,合并RR值及其95%可信區(qū)間分別為0.61(0.45,0.83)和0.99(0.82,1.20)。 1.3敏感性分析結(jié)果：剔除4篇質(zhì)量較低的文獻(xiàn)后,異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0.0%,RR--0.97(0.81,1.16),與剔除前的結(jié)果相比較變化不大。 1.4發(fā)表偏倚檢測：漏斗圖上可見各研究分布不對稱,Egger's檢驗(yàn)的P值為0.004,提示存在發(fā)表偏倚。 2.大蒜制品防治冠心病效果的Meta分析 2.1異質(zhì)性檢驗(yàn)及定量合并結(jié)果：共7篇文獻(xiàn)納入研究,異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=13.9%,合并RR=0.75(0.51,1.10)。 2.2敏感性分析：剔除1篇現(xiàn)場試驗(yàn)文獻(xiàn)后,異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0.0%, RR=0.64(0.42,0.99),與剔除前的結(jié)果相比較,變化較大。 2.3發(fā)表偏倚檢測：從繪制的漏斗圖上可見各研究分布對稱,Egger's檢驗(yàn)的P值為0.936,提示不存在發(fā)表偏倚。 二、富硒大蒜抗ox-LDL對內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究 1.大蒜油中硒含量的檢測：富硒大蒜油中硒含量為198mg/kg。 2.富硒大蒜油對ECV-304細(xì)胞活性率的影響：作用24和48小時、濃度低于160μl/L時,內(nèi)皮細(xì)胞活性率均高于100%；在濃度達(dá)到320μl/L或作用時間為72小時時,細(xì)胞活性率均低于100%。 3.富硒大蒜油抗ox-LDL的造成細(xì)胞活性率下降的影響：富硒大蒜油各濃度組在各種作用時間條件下的細(xì)胞活性率均高于ox-LDL組(P0.05)。盡管差異未必均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但富硒大蒜油組在各種條件下的細(xì)胞活性率均呈現(xiàn)出高于普通大蒜、普通大蒜和有機(jī)硒聯(lián)用的趨勢。在15μl/L、作用時間為24小時時,有機(jī)硒組的細(xì)胞活性率低于富硒大蒜油(P=0.003),而在濃度為60μl/L時,富硒大蒜油的細(xì)胞活性率低于有機(jī)硒(P0.05)。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率結(jié)果：富硒大蒜油單獨(dú)作用下的細(xì)胞凋亡率與空白對照組相比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但明顯低于ox-LDL組(P0.05)。富硒大蒜油與ox-LDL共同作用下的細(xì)胞凋亡率明顯低于ox-LDL組(P0.01),但與空白對照組和其他處理組間均無差異(P0.05)。 結(jié)論 1.含硒制品和大蒜制品均具有緩解冠心病患者臨床癥狀的作用。 2.富硒大蒜在作用時間短、濃度低時,能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞活性增加。當(dāng)作用時間長或濃度高時,則會抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性。 3.富硒大蒜能夠?qū)筼x-LDL的抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性作用和促細(xì)胞凋亡作用。富硒大蒜或許可以通過這一機(jī)制,起到抗AS的作用。 4.在短時間、低濃度的作用條件下,富硒大蒜對抗ox-LDL的抑制細(xì)胞活性作用的效果具有優(yōu)于普通大蒜、普通大蒜和有機(jī)硒聯(lián)合使用的趨勢,僅在濃度較高時較有機(jī)硒差。富硒大蒜對抗ox-LDL的促細(xì)胞凋亡作用的效果與普通大蒜、有機(jī)硒的單獨(dú)或聯(lián)合使用相似。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R151

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2472770