【摘要】：納米技術(shù)和納米材料有非常廣闊的應(yīng)用前景,在為人類生產(chǎn)和生活帶來巨大利益的同時,生產(chǎn)和生活環(huán)境中的納米物質(zhì)將劇增,人和其它生物將不可避免地暴露于各種納米物質(zhì)。這些納米物質(zhì)是否會產(chǎn)生與常規(guī)尺度物質(zhì)不同的有害效應(yīng),對環(huán)境生態(tài)和人群健康構(gòu)成新的威脅,成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)問題。因而,現(xiàn)行的常規(guī)尺度物質(zhì)毒理學(xué)安全性評價模式和方法是否適合用于納米材料,成為當(dāng)前迫切需要回答的重大問題之一。生殖毒性是毒理學(xué)安全性評價的重要內(nèi)容,現(xiàn)行生殖毒性安全性評價模式和方法是否適合用于納米材料,也是亟待回答的問題。 本文采用大鼠腔前卵泡和顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,通過研究三種納米顆粒對雌性卵泡生長、卵子發(fā)育、排卵等生殖功能的影響,探究納米物質(zhì)雌性生殖毒作用特點(diǎn),從而為納米物質(zhì)雌性生殖毒性安全性評價提供依據(jù)、積累資料。 一、納米二氧化硅顆粒(SiO2-NPs) 目的：研究30nm SiO2-NPs對大鼠卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟以及顆粒細(xì)胞增殖的影響。方法：從12-14日齡的雌性SD大鼠卵巢中機(jī)械性分離腔前卵泡(140-170μm),采用海藻酸鈉凝膠包埋,單個接種于96孔板中進(jìn)行三維培養(yǎng),隔日換液。將卵泡隨機(jī)分成4個處理組(1.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL和100.0μg/mL)和1個陰性對照組。培養(yǎng)D10天誘導(dǎo)排卵,觀察卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟情況。采用CCK-8法進(jìn)行顆粒細(xì)胞增殖毒性檢測。結(jié)果：陰性對照組中卵泡在連續(xù)10天的培養(yǎng)過程中,絕大多數(shù)都經(jīng)歷了腔前卵泡、有腔卵泡及成熟卵泡階段。SiO2-NPs在1.0μg/mL劑量就對D6和D10卵泡直徑產(chǎn)生影響并影響卵泡存活率(p0.05),在10.0μg/mL影響有腔形成率和COCs排出率(p0.01),這些毒作用均有明顯的劑量反應(yīng)趨勢。在1.0μg/mL劑量時就可影響顆粒細(xì)胞的增殖(p0.01),而且同樣劑量下其抑制作用較對卵泡的毒作用更明顯。結(jié)論：30nm SiO2-NPs可以抑制體外大鼠卵泡的存活和生長,并影響卵泡的分化。 二、納米氧化鋅顆粒(ZnO-NPs) 目的：研究30nm ZnO-NPs對大鼠卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟以及顆粒細(xì)胞增殖的影響。方法：卵泡體外培養(yǎng)方法同上。將卵泡隨機(jī)分為4個處理組(1.0μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL和50.0μg/mL)和1個陰性對照組。結(jié)果：ZnO-NPs在5.0μg/mL劑量對D10卵泡直徑有影響(p0.05),而在25.0μg/mL劑量時對D6的卵泡直徑就有影響；在5.0μg/mL可影響卵泡存活(p0.05)；在1.0μg/mL可影響有腔形成率和COCs排出率(p0.01)；而在25.0μg/mL劑量時才對顆粒細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響(p0.01)。這些毒作用均有明顯的劑量反應(yīng)趨勢。卵母細(xì)胞的成熟未受影響(p0.05)。結(jié)論：30nm ZnO-NPs可以抑制體外大鼠卵泡的存活和生長,并影響卵泡的分化。 三、納米銀顆粒(Ag-NPs) 目的：研究Ag-NPs對大鼠卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟以及顆粒細(xì)胞增殖的影響。方法：卵泡體外培養(yǎng)方法同上。設(shè)4個處理組(1.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL和100.0μg/mL)和1個陰性對照組。結(jié)果：Ag-NPs在1.0μg/mL劑量對D10卵泡直徑有影響(p0.05),而在10.0μg/mL劑量時對D6的卵泡直徑就有影響；在50.0μg/mL可影響卵泡存活率,在1.0μg/mL影響有腔形成率和COCs排出率(p0.01);1.0μg/mL劑量時對顆粒細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響(p0.01)。這些毒作用均有明顯的劑量反應(yīng)趨勢。卵母細(xì)胞的成熟未受影響(p0.05)。結(jié)論：Ag-NPs可以抑制體外大鼠卵泡的存活和生長,并影響卵泡的分化。 四、小結(jié) 總結(jié)上述結(jié)果,三種納米顆粒均有明顯的體外卵泡毒性,其毒作用及其特點(diǎn)是,三種納米顆粒在1.0μg/mL以上劑量均可影響卵泡的生長和發(fā)育,主要影響階段均是在卵泡竇腔形成階段及以后階段；較高劑量時在D6而較低劑量時在D10才顯示出對卵泡生長的影響；顆粒細(xì)胞可能是SiO2-NPs和Ag-NPs的靶細(xì)胞,它們可能通過影響顆粒細(xì)胞進(jìn)而影響卵泡,至于影響顆粒細(xì)胞的機(jī)制有待進(jìn)一步研究；而顆粒細(xì)胞不是ZnO-NPs的靶細(xì)胞,ZnO-NPs可能是直接對卵泡的作用；Ag-NPs可在未出現(xiàn)卵泡毒性的情況下影響卵泡的分化和發(fā)育,而SiO2-NPs和ZnO-NPs均是在出現(xiàn)卵泡毒性的情況下才影響卵泡的分化和發(fā)育。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2470028