【摘要】：為建立一株可用于研究長期環(huán)境因素暴露的永生化神經(jīng)樣細(xì)胞,使用b FGF作為預(yù)誘導(dǎo)劑,BHA、DMSO和β-巰基乙醇作為誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化,觀察細(xì)胞形態(tài)變化,并通過細(xì)胞免疫熒光和RTPCR檢測Nestin、NSE、GFAP和MAP2的表達(dá),判斷是否具有神經(jīng)樣細(xì)胞特異性.將誘導(dǎo)成功的細(xì)胞連續(xù)傳代,利用稀釋法分離出單細(xì)胞克隆.篩選出可以連續(xù)傳代50次以上的細(xì)胞,RT-PCR檢測Nestin和MAP2基因表達(dá)差異,判斷所獲得的單克隆細(xì)胞的神經(jīng)樣特性是否能夠維持.結(jié)果顯示,誘導(dǎo)后的細(xì)胞胞體凸起,免疫熒光檢測Nestin、NSE、GFAP蛋白表達(dá)均陽性,說明成功將MSCs誘導(dǎo)為神經(jīng)樣細(xì)胞,Nestin基因表達(dá)在傳代11次時升高1.32倍,在50次時降低8.85倍,而MAP2基因表達(dá)在傳代11次時升高2.12倍,在50次時升高7.29倍,說明其已經(jīng)由神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)樣細(xì)胞.本研究得到的神經(jīng)樣細(xì)胞單克隆可以連續(xù)傳代,并且保持神經(jīng)樣細(xì)胞特性,可以作為檢測環(huán)境因素對神經(jīng)系統(tǒng)慢性損傷作用研究的細(xì)胞模型.
[Abstract]:In order to establish an immortalized neuron-like cell strain which can be used to study long-term environmental exposure, b FGF was used as preinducer and BHA,DMSO and 尾 -mercaptoethanol were used as inducers to induce human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into neural like cells. The changes of cell morphology were observed and the expression of Nestin,NSE,GFAP and MAP2 were detected by immunofluorescence and RTPCR. Single cell clones were isolated by dilution method. RT-PCR was used to detect the difference between Nestin and MAP2 gene expression and to determine whether the neuron-like characteristics of the obtained monoclonal cells could be maintained. The results showed that the cells were protruded, and the expression of Nestin,NSE,GFAP protein was positive by immunofluorescence, which indicated that MSCs was successfully induced into neuronal like cells, and the expression of Nestin gene increased 1.32 times after 11 passages. At 50 times, the expression of MAP2 gene decreased by 8.85 fold, while the expression of MAP2 gene increased 2.12 times at 11 times and 7.29 times at 50 times, which indicated that the expression of MAP2 gene had been differentiated from neural stem cells to neural like cells. The neuron-like cells obtained in this study can be subcultured continuously and maintain the characteristics of neuron-like cells. It can be used as a cell model for the study of the effects of environmental factors on the chronic injury of the nervous system.
【作者單位】： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院;北京工業(yè)大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;
【基金】：北京市教委科技計(jì)劃課題(KM201310005029) 973課題(2011-CB503705)資助~~
【分類號】：R114

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本文編號：2423786