【摘要】：目的：研究鎘與汞單獨(dú)及聯(lián)合染毒對人胚肝細(xì)胞（L02細(xì)胞）DNA損傷及凋亡的作用。在此基礎(chǔ)上探討了氯化鎘（CdCl_2）與牛血清白蛋白（BSA）相互作用機(jī)制，以了解CdCl_2對蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響。 方法：以不同濃度（0.01～100μmol/L）氯化鎘（CdCl_2）、氯化汞（HgCl_2）及其混合液對L02細(xì)胞染毒24h，采用MTT法測定L02細(xì)胞的存活率，根據(jù)Finney法判斷鎘與汞對L02細(xì)胞的聯(lián)合作用類型；用單細(xì)胞凝膠電泳術(shù)（SCGE）和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測不同濃度鎘與汞單獨(dú)及聯(lián)合染毒對L02細(xì)胞DNA損傷和細(xì)胞凋亡的影響。測定CdCl_2-BSA體系在四個(gè)不同溫度（298，302，306，310K）下的熒光光譜；用Stern-Volmer、Arrhenius、Van’t Hoff和小分子與大分子配位方程分別處理熒光光譜實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)算出猝滅常數(shù)、活化能、熱力學(xué)參數(shù)及結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)；根據(jù)F rster熒光共振能量轉(zhuǎn)移理論計(jì)算CdCl_2與BSA之間的距離。同時(shí)，室溫下測定研究體系的紫外吸收光譜、同步熒光光譜、三維熒光光譜和圓二色譜，以探討CdCl_2對BSA結(jié)構(gòu)的影響。 結(jié)果：0.01μmol/L的鎘與汞單獨(dú)及聯(lián)合染毒可以刺激細(xì)胞的生長，但1μmol/L的鎘汞單獨(dú)及聯(lián)合染毒可顯著抑制細(xì)胞的生長；鎘與汞等濃度作用于L02細(xì)胞后，根據(jù)Finney法計(jì)算Q=1.4，聯(lián)合作用表現(xiàn)為相加作用；一定劑量的鎘汞單獨(dú)及聯(lián)合作用于L02細(xì)胞24h后，L02細(xì)胞的DNA損傷率和細(xì)胞凋亡率均顯著高于對照組，且隨著染毒劑量的增加，L02細(xì)胞的DNA損傷率和細(xì)胞凋亡率也呈上升趨勢。在四個(gè)不同溫度（298，302，306，310K）下測得CdCl_2與BSA相互作用的猝滅常數(shù)分別為27.854、28.527、32.223、33.664L mol~(-1)，結(jié)合常數(shù)分別為125.340，58.491，47.808，34.626M-1，活化能為13.24，相應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)ΔS、ΔH和ΔG分別為-223.364Jmol~(-1)K~(-1)，-78.192KJmol~(-1)，（-11.969，-10.216，-9.838，-9.136KJmol~(-1)）。由F rster理論計(jì)算出CdCl_2與BSA之間的距離為2.24nm。紫外吸收光譜顯示CdCl_2加入后，BSA的紫外吸收光譜強(qiáng)度沒有發(fā)生明顯變化；同步熒光光譜結(jié)果顯示，CdCl_2加入后，在△λ=15nm和△λ=60nm時(shí)BSA的同步熒光光譜熒光強(qiáng)度均下降，在△λ=60nm時(shí)，BSA的同步熒光光譜的熒光強(qiáng)度下降更明顯，且最大發(fā)射波長有輕微紅移；三維熒光光譜顯示，加入CdCl_2后，BSA峰b的熒光強(qiáng)度有所升高（273.3~282.5），峰1熒光強(qiáng)度略有下降(370.7~368.8)，峰2強(qiáng)度顯著降低(563.4~540.5)；BSA的峰1熒光發(fā)射波長有輕微紅移，峰2熒光發(fā)射波長有輕微藍(lán)移；圓二色譜結(jié)果顯示隨著CdCl_2濃度增加，BSA的α螺旋含量先有所增加（從51.93到52.31），后逐漸降低（從52.31到21.39）。 結(jié)論：鎘與汞的聯(lián)合作用為相加作用，鎘與汞單獨(dú)及聯(lián)合染毒可引起L02細(xì)胞的DNA損傷和細(xì)胞凋亡，，且存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。CdCl_2對BSA的猝滅過程主要是動(dòng)態(tài)猝滅，CdCl_2與BSA之間有較強(qiáng)的結(jié)合力。CdCl_2與BSA間的作用是一個(gè)由焓驅(qū)動(dòng)的自發(fā)過程，其相互作用的主要作用力是氫鍵和范德華力，CdCl_2與BSA之間可能通過有效的能量轉(zhuǎn)移而使BSA發(fā)生熒光猝滅。同時(shí)，CdCl_2可影響B(tài)SA的微環(huán)境和構(gòu)象。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2375033