【摘要】：長期以來,塵肺病是中國職業(yè)病中發(fā)病率最高、對勞動者危害最為嚴重的一類職業(yè)病。最新統(tǒng)計報告顯示,2010年塵肺病發(fā)病例數(shù)占職業(yè)病報告總例數(shù)的87.42%,而且其發(fā)病工齡有明顯縮短的趨勢,塵肺病的發(fā)生嚴重危害著職業(yè)人群的健康狀況及生活質量。多年來研究者一直致力于其發(fā)病機制的研究。 生產(chǎn)性粉塵進入肺部后,肺泡巨噬細胞作為參與機體防御的首類效應細胞,在塵肺的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著至關重要的作用。一直以來大多數(shù)的研究均致力于粉塵作用于巨噬細胞后引起的一系列變化,然而有關巨噬細胞如何識別并吞噬粉塵顆粒的過程尚不清楚,近年來國外有研究結果顯示巨噬細胞對矽塵的吞噬并非是簡單的異物吞噬反應,而是通過巨噬細胞表面表達的模式識別受體MARCO來介導的,這一發(fā)現(xiàn)為塵肺病的研究提供了新的線索。膠原樣結構巨噬細胞受體(Macrophage receptor with collagenous structure, MARCO)是巨噬細胞表面A類清道夫受體的一種。國外研究發(fā)現(xiàn)MARCO參與肺泡巨噬細胞對矽塵的吞噬,而且矽塵作用于肺泡巨噬細胞后可以導致該受體表達的增加。 除了矽塵,其它很多粉塵也能引起塵肺病,在中國,煤塵所致的塵肺病要高于矽塵,占據(jù)相當大的比例。而氧化鋅粉塵則是一種重要的金屬粉塵,也可對肺部造成嚴重損傷。因此,基于國外的研究,煤塵和氧化鋅粉塵與肺泡巨噬細胞的作用方式是否也經(jīng)MARCO受體而被肺泡巨噬細胞所吞噬引起了我們的興趣。因此,該研究擬通過體外實驗,原代培養(yǎng)SD大鼠肺泡巨噬細胞,使用游離Si02粉塵、煤塵以及氧化鋅粉塵作用肺泡巨噬細胞,檢測不同粉塵刺激對肺泡巨噬細胞表面受體MARCO表達的影響,探討肺泡巨噬細胞吞噬二氧化硅粉塵、煤塵和氧化鋅粉塵的方式。 目的： 檢測游離Si02、煤塵以及氧化鋅3種粉塵對肺泡巨噬細胞表面MARCO受體表達的影響,探討巨噬細胞對煤塵和氧化鋅粉塵的吞噬作用方式。 方法： 1.對SD大鼠的肺泡巨噬細胞進行分離純化和原代培養(yǎng)。 2.采用MTT比色法測定各粉塵對原代培養(yǎng)的巨噬細胞活性的影響,并確定染毒巨噬細胞的粉塵濃度。 3.使用Real-time PCR檢測不同濃度粉塵刺激后肺泡巨噬細胞表面清道夫受體MARCO的mRNA相對表達水平。 4.采用Western blot技術檢測不同濃度粉塵刺激后肺泡巨噬細胞表面清道夫受體MARCO的蛋白表達水平。 5.統(tǒng)計學分析：使用SPSS12.0統(tǒng)計軟件,采用Levene方法進行方差齊性檢驗,各組之間采用單因素方差分析,兩兩比較用q檢驗,統(tǒng)計學上的顯著性檢驗以a=0.05為檢驗水準。 結果： 1.分離得到的SD大鼠肺泡巨噬細胞的成活率在95%以上,培養(yǎng)2h后巨噬細胞貼壁狀態(tài)良好,純化后巨噬細胞純度達95%以上。 2.各粉塵對原代培養(yǎng)的巨噬細胞活性的影響： (1)游離Si02粉塵濃度為25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml時,巨噬細胞活性與對照組0μg/ml進行比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),當大于100μg/ml濃度時,細胞活性明顯受到影響,因此,游離Si02粉塵對細胞的染毒濃度設定在100μg/ml以內(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml); (2)煤塵濃度為50μg/ml、10μg/ml、200μg/ml、400μg/ml時,細胞活性與對照組0μg/ml比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),當大于400μg/ml濃度時,細胞活性較對照組明顯降低。因此,煤塵對細胞的染毒濃度設定在400μg/ml以內(0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml); (3)氧化鋅粉塵濃度為25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml時,巨噬細胞活性與對照組0μg/ml比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),當大于200μg/ml濃度時,細胞活性明顯受到影響。因此,金屬氧化鋅粉塵對細胞的染毒濃度設定在200μg/ml以內(0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml)。 3. Real-time PCR檢測各組細胞MARCO的mRNA表達結果： (1)游離SiO2粉塵各濃度組與對照組相比,染毒濃度在50μg/ml、75μg/ml和100μg/ml時,MARCO的mRNA表達量高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)； (2)煤塵各濃度組與對照組相比,染毒濃度在200μg/ml和400μg/ml時,MARCO的：mRNA表達量高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)； (3)氧化鋅粉塵各濃度組與對照組相比,染毒濃度在100μg/ml、150μg/ml和200μg/ml時,MARCO的mRNA表達量高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4. Western blot檢測各組細胞MARCO的蛋白表達結果： (1)游離SiO2粉塵各濃度組與對照組相比,作用濃度在75μg/ml和100μg/ml時,MARCO的蛋白表達量明顯高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)； (2)煤塵各濃度組與對照組相比,作用濃度在100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml時,MARCO的蛋白表達量明顯高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)； (3)氧化鋅粉塵各濃度組與對照組相比,作用濃度在150μg/ml和200μg/ml時,MARCO的蛋白表達量明顯高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論： 游離SiO2、煤塵以及氧化鋅3種粉塵作用于肺泡巨噬細胞后,均能使其表面MARCO的表達水平增加。肺泡巨噬細胞對煤塵和氧化鋅粉塵的吞噬方式很有可能與游離SiO2一致,即通過MARCO介導肺泡巨噬細胞吞噬。
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【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R135.2

【參考文獻】

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本文編號：2372137