【摘要】：空腸彎曲桿菌(Campylobacter ieiuni, C.jejuni)是一種重要的食源性病原菌,食用受到污染的食品可引起腹瀉或食物中毒,嚴(yán)重的可導(dǎo)致敗血癥、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、格林巴利綜合癥等,這些疾病都離不開抗生素的治療,然而隨著各種抗生素的廣泛使用,空腸彎曲桿菌對抗生素的耐藥性已引起世界的廣泛關(guān)注。因此,本文從雅安養(yǎng)雞場、屠宰場和市場中分離收集空腸彎曲桿菌,對雞肉生產(chǎn)鏈(養(yǎng)殖場-屠宰場-市場)中空腸彎曲桿菌的污染及耐藥情況、脈沖場凝膠電泳(PFGE)分型和耐喹諾酮類藥物gyrA基因突變檢測進(jìn)行了分析。 參考GB/T4789.9-2008、SN0175-2010、ISO10272-1:2006、FDA/BAM:2001、 USDA/FSIS:1998等方法,從雞肉生產(chǎn)鏈中采集樣品519份,分離鑒定出空腸彎曲桿菌180株,分離率為34.87%。其中,養(yǎng)雞場和屠宰場雞糞樣空腸彎曲桿菌分離率分別為74.29%和66.38%,屠宰場和市場的雞肉樣中空腸彎曲桿菌的分離率分別為17.33%和13.66%。采用肉湯微量稀釋法,空腸彎曲桿菌對8種抗生素(組合)的藥敏實驗結(jié)果表明,180株空腸彎曲桿菌對環(huán)丙沙星、左氟沙星、四環(huán)素和克林霉素的耐藥率較高,分別為94.44%、93.89%、91.67%和78.33%；對紅霉素(20.00%)、鏈霉素(20.56%)、慶大霉素(17.78%)、氟苯尼考(12.22%)呈現(xiàn)出不同的耐藥率；多重耐藥率為100%。從養(yǎng)殖場到市場,雞肉生產(chǎn)鏈中空腸彎曲桿菌對上述8種抗生素的耐藥率呈持平或上升趨勢。雞肉生產(chǎn)鏈中空腸彎曲桿菌的污染嚴(yán)重,對喹諾酮類藥物、四環(huán)素和克林霉素的耐藥率較高。 采用Sma I對83株空腸彎曲桿菌進(jìn)行PFGE分型,通過Info Quest(?) FP (version5.0)指紋圖譜分析軟件的聚類分析,結(jié)果產(chǎn)生了45種不同的譜型�；蚍中徒Y(jié)果表明空腸彎曲桿菌在雞肉生產(chǎn)鏈中存在水平傳播現(xiàn)象,部分耐藥表型相同的菌株其基因型相似度較高,說明空腸彎曲桿菌的耐藥表型與基因型之間有一定的相關(guān)性。 采用錯配擴(kuò)增突變分析PCR (MAMA PCR)技術(shù),檢測137株耐環(huán)丙沙星的空腸彎曲桿菌的gyrA基因257位突變情況,結(jié)果有131株空腸彎曲桿菌在gyrA基因257位發(fā)生點突變,檢測突變率為95.62%。10株對環(huán)丙沙星敏感的菌株均沒有檢測出gyrA基因的突變。gyrA基因耐藥決定區(qū)的測序結(jié)果表明對環(huán)丙沙星耐藥的菌株MJF31和MJF53都在第257位堿基發(fā)生了C→T(蘇氨酸到異亮氨酸)的突變,而對環(huán)丙沙星敏感的菌株JF9和JF136均未發(fā)生C→T(蘇氨酸到異亮氨酸)突變。 本研究分析了雞肉生產(chǎn)鏈中空腸彎曲桿菌的污染和耐藥情況,為監(jiān)測空腸彎曲桿菌的污染情況和耐藥性提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；對雞肉生產(chǎn)鏈中的空腸彎曲桿菌進(jìn)行PFGE分型,為研究空腸彎曲桿菌在食品鏈中的傳播機(jī)制奠定了基礎(chǔ),同時采用MAMAPCR技術(shù)對耐喹諾酮類藥物的空腸彎曲桿菌的gyrA基因進(jìn)行了檢測,為研究細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生機(jī)制提供了參考。論文研究結(jié)果具有一定的理論意義和實際應(yīng)用價值。
[Abstract]:Campylobacter jejuni (Campylobacter ieiuni, C.jejuni) is an important foodborne pathogen. Eating contaminated food can lead to diarrhea or food poisoning, severe sepsis, reactive arthritis, Guillain-Barre syndrome, etc. These diseases can not be separated from the treatment of antibiotics. However, with the wide use of various antibiotics, the antibiotic resistance of Campylobacter jejuni has attracted worldwide attention. Therefore, campylobacter jejuni was isolated and collected from Ya'an chicken farm, slaughterhouse and market, and the contamination and drug resistance of Campylobacter jejuni in chicken production chain (farm slaughterhouse market) were studied. Pulsed field gel electrophoresis (PGE) (PFGE) typing and quinolone-resistant gyrA gene mutation were analyzed. Referring to GB/T4789.9-2008,SN0175-2010,ISO10272-1:2006,FDA/BAM:2001, USDA/FSIS:1998 and other methods, 519 samples were collected from chicken production chain, 180 strains of Campylobacter jejuni were isolated and identified, the isolation rate was 34.87%. The isolation rates of Campylobacter jejuni were 74.29% and 66.38% in chicken manure, and 17.33% and 13.66% in chicken samples from abattoir and market, respectively. The susceptibility of Campylobacter jejuni to 8 kinds of antibiotics (combinations) was studied by broth microdilution method. The results showed that 180 strains of Campylobacter jejuni were resistant to ciprofloxacin, levofloxacin, tetracycline and clindamycin, which were 94.4449.8991.67% and 78.33%, respectively. The resistance rates of erythromycin (20.00%), streptomycin (20.56%), gentamicin (17.78%) and florfenicol (12.22%) were different, and the multidrug resistance rate was 100% for erythromycin, streptomycin (20.56%), gentamicin (17.78%) and florfenicol (12.22%). From farm to market, the resistance rate of Campylobacter jejuni to the above eight antibiotics in chicken production chain was flat or rising. The contamination of Campylobacter jejuni in chicken production chain was serious and the resistance rate of tetracycline and clindamycin to quinolones was higher. 83 strains of Campylobacter jejuni were genotyped by PFGE with Sma I. Info Quest (? The clustering analysis of FP (version5.0) fingerprint analysis software resulted in 45 different spectral types. The genotyping results showed that Campylobacter jejuni spread horizontally in the chicken production chain, and the genotypic similarity of some strains with the same drug resistance phenotype was higher. The results showed that there was a certain correlation between drug resistance phenotype and genotype of Campylobacter jejuni. A mismatch amplified mutation analysis (PCR (MAMA PCR) technique was used to detect the gyrA gene 257 mutation in 137 ciprofloxacin resistant Campylobacter jejuni strains. The results showed that 131 Campylobacter jejuni strains had a point mutation in gyrA gene 257 position. The mutation rate was 95.62.10 strains sensitive to ciprofloxacin did not detect the mutation of gyrA gene. The results of sequencing of the determining region of gyrA gene showed that both MJF31 and MJF53 of ciprofloxacin resistant strains had C + at the 257th base of ciprofloxacin. T (threonine to isoleucine) mutation, The C T (threonine to isoleucine) mutation was not found in the ciprofloxacin sensitive strains JF9 and JF136. In this study, the contamination and drug resistance of Campylobacter jejuni in chicken production chain were analyzed, which provided basic data for monitoring the contamination and drug resistance of Campylobacter jejuni, and the PFGE typing of Campylobacter jejuni in chicken production chain was carried out. In order to study the transmission mechanism of Campylobacter jejuni in food chain, MAMAPCR technique was used to detect the gyrA gene of Campylobacter jejuni resistant to quinolones. The results of this paper have certain theoretical significance and practical application value.
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R155.31

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本文編號：2269568