【摘要】：[研究背景與目的]最近研究發(fā)現(xiàn)檳榔中的主要生物堿檳榔堿(Arecoline)具有神經(jīng)毒性作用,其神經(jīng)毒性與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激有關(guān)。硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S)不僅僅是一種新型的中樞系統(tǒng)神經(jīng)調(diào)質(zhì),而且是一種具有抗凋亡和抗氧化應(yīng)激作用的神經(jīng)保護(hù)劑。瘦素(leptin)是由脂肪細(xì)胞分泌的一種激素,通過作用于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system,CNS)廣泛分布的長型瘦素受體(leptin receptor,lep Rb)發(fā)揮多種生物學(xué)功能。越來越多的研究證實leptin信號通路具有神經(jīng)保護(hù)作用。因此,在本研究中,我們擬探討H2S是否可拮抗Arecoline誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性以及l(fā)eptin信號通路是否介導(dǎo)H2S拮抗Arecoline誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性。[方法]Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測PC12細(xì)胞活力;Hoechst 33258染色檢測凋亡細(xì)胞形態(tài);Annexin V/PI(propidium iodide)染色流式細(xì)胞術(shù)檢測PC12細(xì)胞凋亡率;Elisa法檢測PC12細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活力和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin水平;Unisensn H2S微電極檢測PC12細(xì)胞培養(yǎng)上清液中H2S水平;Western Blot檢測PC12細(xì)胞內(nèi)H2S生成酶:胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-bata-synthase,CBS)和3-巰基丙酮酸鹽硫(3-mercaptopyruvate sulphurtransferase,3-MST)蛋白的表達(dá)、leptin和Lep Rb蛋白的表達(dá)、凋亡相關(guān)蛋白(Bax和Bcl-2)、以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Glucose-regulated protein 78(GRP78)、CCAAT/enhancer binding protein(C/EBP)homologous protein(CHOP)和Cleaved caspase-12 proteins的表達(dá)。[結(jié)果]Arecoline(0.5、1和2m M)處理PC12細(xì)胞24 h能明顯降低PC12細(xì)胞活力、誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生凋亡形態(tài)改變以及增加細(xì)胞凋亡率、上調(diào)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的活性以及促凋亡蛋白Bax的表達(dá)、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),增加PC12細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白(GRP78、CHOP和Cleaved caspase-12)的表達(dá),降低細(xì)胞內(nèi)H2S合酶(CBS和3-MST)蛋白表達(dá)以及培養(yǎng)上清液中H2S水平。而預(yù)處理Na HS(H2S供體,400和800μM)能明顯逆轉(zhuǎn)Arecoline誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷、凋亡以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,并可抑制Arecoline誘導(dǎo)的leptin和lep Rb蛋白表達(dá)的降低以及培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin水平的下降,而預(yù)處理leptin t A(leptin信號通路抑制劑,50 n M)能取消Na HS對Arecoline誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性的保護(hù)作用。[結(jié)論]H2S通過上調(diào)leptin信號通路實現(xiàn)其抗Arecoline神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。
[Abstract]:[background and objective] recent studies have found that arecoline (Arecoline), the main alkaloid in areca nut, has neurotoxic effects, and its neurotoxicity is related to its induction of apoptosis and oxidative stress. Hydrogen sulfide (Hydrogen sulfide,H2S) is not only a new neuromodulator of central nervous system, but also a neuroprotective agent with anti-apoptosis and anti-oxidative stress. Leptin (leptin), a hormone secreted by adipocytes, plays a variety of biological functions by acting on the long leptin receptor (leptin receptor,lep Rb) widely distributed in the central nervous system (Central nervous system,CNS). More and more studies have confirmed the neuroprotective effect of leptin signaling pathway. Therefore, in this study, we intend to investigate whether H2S can antagonize the neuronal toxicity induced by Arecoline and whether the leptin signaling pathway mediates H2S to antagonize the neuronal toxicity induced by Arecoline. [methods] Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay was used to detect the viability of PC12 cells by Hoechst 33258 staining. Apoptosis rate of PC12 cells was detected by flow cytometry with Annexin V/PI (propidium iodide) staining. Caspase-3 activity in PC12 cells and leptin level in supernatant of cell culture were detected by Elisa. The level of H2S in the supernatant of PC12 cells was detected by electrode and the expression of H2S producing enzymes: cystathithione- 尾 -synthase (Cystathionine-bata-synthase,CBS) and 3-mercaptopyruvate sulfur (3-mercaptopyruvate sulphurtransferase,3-MST) protein in PC12 cells were detected by Western Blot. Apoptosis-related proteins (Bax and Bcl-2) and endoplasmic reticulum stress-related protein Glucose-regulated protein 78 (GRP78) expressed CCAATP enhancer binding protein (C/EBP) homologous protein (CHOP) and Cleaved caspase-12 proteins. [results] after treated with Arecoline (0.5 and 2m M) for 24 h, PC12 cells significantly decreased the viability of PC12 cells, induced apoptosis morphologic changes in PC12 cells, increased the rate of apoptosis, up-regulated the activity of Caspase-3 and the expression of pro-apoptotic protein Bax. The expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 increased the expression of endoplasmic reticulum stress-related proteins (GRP78,CHOP and Cleaved caspase-12) in PC12 cells decreased the expression of H2S synthase (CBS and 3-MST) and the level of H2S in culture supernatant. Pretreatment with Na HS (H2S donor 400 and 800 渭 M could significantly reverse the PC12 cell damage, apoptosis and endoplasmic reticulum stress induced by Arecoline, and inhibit the decrease of leptin and lep Rb protein expression induced by Arecoline and the decrease of leptin level in culture supernatant. Pretreatment of leptin t A (leptin signaling pathway inhibitor of 50 n M) could cancel the protective effect of Na HS on the neuronal toxicity induced by Arecoline. [conclusion] H _ 2S can inhibit the toxicity of Arecoline neurons by upregulating leptin signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王春梅,姜濤,周春燕;誘導(dǎo)心臟發(fā)生的早期信號通路[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2004年05期

2 解文博;葉玲;;p38絲裂原活化蛋白激酶信號通路的部分研究方法[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2009年10期

3 黎增輝;廖愛軍;;JNK信號通路[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2010年03期

4 李林;;Wnt信號通路及其與骨形成的關(guān)系[J];臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志;2010年20期

5 李鳳賀;辛世杰;楊棟;惠林萍;楊昱;張健;段志泉;;SHH信號通路在血小板源性生長因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用研究[J];中國血管外科雜志(電子版);2010年04期

6 陳建勇;王聰;王娟;曹禮榮;;MAPK信號通路研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2011年08期

7 李寶新;李玉坤;;Wnt信號通路對骨調(diào)節(jié)研究新進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2008年03期

8 李佳殷;林麗珠;;JNK信號通路在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2012年18期

9 張玉婷;劉立新;;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白在相關(guān)信號通路中的作用研究進(jìn)展[J];中華消化病與影像雜志(電子版);2012年05期

10 席曉慧;王福文;牟艷玲;;Wnt信號通路與心血管疾病的研究進(jìn)展[J];食品與藥品;2014年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 程華;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];2011全國老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

2 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];第一屆全國麻醉藥理專業(yè)委員會第二次學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

3 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];中國成人醫(yī)藥教育論壇（4）[C];2011年

4 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會成立大會暨人參及補益藥學(xué)術(shù)研討會會議論文集[C];2011年

5 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路研究新進(jìn)展[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

6 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路研究新進(jìn)展[A];2013年全國老年性癡呆與相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

7 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路研究新進(jìn)展[A];第三屆中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

8 季宇彬;胡哲清;鄒翔;;MAPK信號通路及其研究進(jìn)展[A];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研討會論文集[C];2010年

9 程華;孫芳玲;艾厚喜;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路與血管發(fā)生[A];全國第三次麻醉藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

10 李林;;利用小分子探針研究經(jīng)典Wnt信號通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報告七[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前6條

1 劉海英;美發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞信號通路互動機制[N];科技日報;2009年

2 記者 劉海英;英發(fā)現(xiàn)細(xì)胞信號通路新“剎車”蛋白[N];科技日報;2012年

3 衣曉峰　陳英云 記者 李麗云;結(jié)腸癌發(fā)生中新的信號通路找到[N];科技日報;2009年

4 記者 許琦敏;減肥信號受控于腦中“通訊員”[N];文匯報;2008年

5 記者 劉海英;一種蛋白決定人的抗壓能力[N];科技日報;2011年

6 通訊員 喬蕤琳 記者 衣曉峰 聶松義;癌癥中小分子和微小核苷酸有關(guān)聯(lián)[N];健康報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王森;乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2和TLR4信號通路的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 尚果果;NRF2抗氧化應(yīng)激信號通路的活化在糖尿病腎病中的保護(hù)作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 孫鼎琪;Akt信號通路在膀胱腫瘤的進(jìn)展及化療敏感性的實驗研究[D];山東大學(xué);2015年

4 白秀峰;新基因Gsdma3對小鼠毛囊周期及Wnt/β-catenin信號通路作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 張俊波;PI3K/Akt信號通路調(diào)控胞內(nèi)布魯氏菌16M存活的分子機制研究[D];石河子大學(xué);2014年

6 成旭東;黃芪活性物質(zhì)篩選及基于PKC-ERK信號通路抑制肺癌的作用機理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 路康;STAT3信號通路介導(dǎo)CLL和MCL發(fā)生組蛋白去乙�；敢种苿┠退幍臋C制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 趙睿;Wnt信號通路在臂叢神經(jīng)根性撕脫傷誘發(fā)的神經(jīng)病理性痛中的作用機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 劉海燕;Sonic hedgehog信號通路對正常角質(zhì)形成細(xì)胞增殖及凋亡的影響及其分子機制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 祁義軍;胃腸道間質(zhì)瘤中Shh信號通路作用的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 韓紹芳;小鼠主要嗅覺表皮組織內(nèi)AC3缺失對相關(guān)因子及信號通路的影響[D];河北大學(xué);2015年

2 李玉娟;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其對TNF-α、IL-10的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 趙玲玲;FLCN與PAT1相互作用調(diào)控mTORC1信號通路的機理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 努爾古麗·蘇里坦;mir-260和mir-240調(diào)控錢蟲壽命的研究[D];華中師范大學(xué);2015年

5 王瑜;晚期糖基化終末產(chǎn)物和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF信號通路的影響及其機制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊瑩瑩;microRNA-203通過APC介導(dǎo)活化Wnt/β-catenin信號通路在佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞中的調(diào)控作用及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

7 徐貞貞;PM2.5對人支氣管上皮細(xì)胞JAK/STAT信號通路的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 徐國棟;芪蛭皺肺顆粒調(diào)控肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞NF-κB信號通路的研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué)(原名：甘肅中醫(yī)學(xué)院);2015年

9 陸兆雙;多聚左旋精氨酸促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細(xì)胞釋放炎癥因子IL-6、IL-8的信號通路研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 修麗梅;P38MAPK信號通路在肢體缺血預(yù)處理腦保護(hù)中的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：2261395