發(fā)布時(shí)間：2018-09-19 06:32

【摘要】：食品的安全性，不僅是民生大計(jì)，更是國(guó)家文明程度的重要象征。而食源性致病菌，作為食品安全最重要的風(fēng)險(xiǎn)因素之一已成為了全球性公共安全問(wèn)題。而耐藥基因在食物鏈中的傳遞在食品安全的研究中往往被忽略。由于抗生素在醫(yī)療領(lǐng)域和畜牧業(yè)中的大量使用，使一些殘留抗生素隨醫(yī)療垃圾和動(dòng)物糞便流入到了環(huán)境當(dāng)中并發(fā)生擴(kuò)散，形成亞抑菌濃度的抗生素。然而，目前對(duì)于人們對(duì)于低劑量抗生素刺激下耐藥基因水平傳播的影響機(jī)制了解的尚不透徹，，這限制了人們對(duì)于食源微生物中的耐藥基因向人體傳遞這一潛在風(fēng)險(xiǎn)的認(rèn)知。本研究從食品安全角度出發(fā)，以食源性致病菌作為研究對(duì)象，圍繞耐藥基因水平傳播的機(jī)理及抑制方法進(jìn)行了系統(tǒng)和深入的研究，首先在四種不同抑菌機(jī)制的抗生素的分別刺激條件下，研究了對(duì)大腸桿菌耐藥基因水平傳播效率的影響，發(fā)現(xiàn)在低于50%MIC（最小抑菌濃度）的環(huán)丙沙星、鏈霉素、氨芐西林的刺激條件對(duì)于耐藥基因水平傳播具有促進(jìn)作用。隨后利用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)，研究了亞抑菌濃度抗生素刺激條件下發(fā)生表達(dá)差異的蛋白，在所有差異蛋白中有7種與細(xì)菌耐藥基因水平傳播相關(guān)，分別是gspE、tesB、lexA、ftsZ、ftsY、kdsD、sul1。經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)編碼上述7種蛋白的基因在RNA轉(zhuǎn)錄水平驗(yàn)證，證實(shí)了其中2個(gè)基因gspE、tesB在四種不同抑菌機(jī)制抗生素的分別刺激下均發(fā)生了差異表達(dá)，且變化趨勢(shì)一致。然后通過(guò)構(gòu)建gspE和tesB基因表達(dá)載體，并在大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)tesB基因高效表達(dá)時(shí)能夠有效抑制耐藥基因的水平傳播（p0.01）；而gspE基因的高效表達(dá)具有促進(jìn)耐藥基因水平傳播的作用（p0.01）。研究結(jié)果說(shuō)明，tesB基因和gspE基因是大腸桿菌耐藥基因水平傳播的過(guò)程的關(guān)鍵基因。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)于科學(xué)地緩解耐藥基因水平傳播、抑制耐藥基因在食物鏈中的傳遞提供可行的研究方向。
[Abstract]:Food safety is not only a livelihood plan, but also an important symbol of national civilization. Food-borne pathogens, as one of the most important risk factors for food safety, have become a global public safety problem. The transmission of drug-resistant genes in the food chain is often ignored in food safety studies. Because of the extensive use of antibiotics in the medical field and animal husbandry, some residual antibiotics flow into the environment with medical waste and animal feces and spread, forming antibiotics with sub-inhibitory concentration. However, the mechanism of drug resistance gene transmission induced by low dose antibiotics has not been fully understood, which limits the understanding of the potential risk of drug resistance gene transmission in food source microorganisms. In this study, from the point of view of food safety, the mechanism of drug resistance gene transmission and inhibition methods were studied systematically and deeply. In this paper, we first studied the effect of four different antibiotic stimuli on the transmission efficiency of Escherichia coli resistance gene. We found that ciprofloxacin and streptomycin were lower than 50%MIC (minimum inhibitory concentration). The stimulation conditions of ampicillin can promote the level transmission of drug resistance gene. Then protein two-dimensional electrophoresis technique was used to study the expression of differentially expressed proteins under the stimulation of antibiotic subinhibitory concentration. Seven of the differential proteins were related to the horizontal transmission of bacterial drug resistance genes (gspE,tesB,lexA,ftsZ,ftsY,kdsD,sul1.). By real-time fluorescence quantitative PCR, the genes encoding the seven proteins were verified at the RNA transcription level. It was confirmed that two of the genes were differentially expressed under the stimulation of four antimicrobial mechanisms, and the change trend was the same. Then the expression vector of gspE and tesB gene was constructed and induced in E. coli. It was found that the high expression of tesB gene could effectively inhibit the horizontal transmission of drug resistance gene (p0.01). The high expression of gspE gene can promote the level transmission of drug resistance gene (p0.01). The results showed that the genes of TSE B and gspE were the key genes in the horizontal transmission of drug resistance genes of Escherichia coli. This finding provides a feasible research direction for scientific mitigation of drug resistance gene transmission and inhibition of drug resistance gene transmission in the food chain.
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：TS201.6;R155.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 本刊編輯部;;產(chǎn)業(yè)驅(qū)動(dòng)與制度之惡[J];中國(guó)醫(yī)院院長(zhǎng);2008年16期

2 曾慶平;;突破抗生素濫用的誤區(qū)[J];生命與災(zāi)害;2011年02期

3 虞立琪;;抗生素限售 局部改革遭遇死結(jié)[J];醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)決策參考;2004年19期

4 何娟;何彩東;穆燕魁;;微生態(tài)制劑發(fā)酵工藝[J];河北化工;2010年02期

5 董偉;;濫用抗生素:威脅人類安全[J];中國(guó)減災(zāi);2009年02期

6 張麗芳;;細(xì)菌的耐藥性[J];河北化工;2011年08期

7 常曉松;舒為群;趙清;陳濟(jì)安;陳浩;邱志群;;醫(yī)院污水污染水環(huán)境中耐熱性大腸菌群耐藥規(guī)律研究[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2007年01期

8 王琛琛;;流光溢彩15年——中國(guó)首個(gè)抗生素緩釋制劑申嘉的輝煌之路[J];上海醫(yī)藥;2010年03期

9 劉佳;隋銘?zhàn)?朱春艷;;水環(huán)境中抗生素的污染現(xiàn)狀及其去除方法研究進(jìn)展[J];四川環(huán)境;2011年02期

10 王瑞旋;馮娟;耿玉靜;徐力文;王江勇;;水產(chǎn)細(xì)菌耐藥性的最新研究概況[J];海洋環(huán)境科學(xué);2010年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李國(guó)明;陳群;陳軍劍;樊翌明;;淋病奈瑟菌耐藥基因型與多重耐藥關(guān)系的研究[A];第6次全國(guó)微生物學(xué)與免疫學(xué)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

2 莫非;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥基因及消毒劑耐藥相關(guān)基因的檢測(cè)[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 陳建國(guó);蘇兆亮;許化溪;王勝軍;夏秋風(fēng);趙鴻;;dfrA17和aadA5基因盒——一株銅綠假單胞菌中新發(fā)現(xiàn)的整合子耐藥基因攜帶形式[A];2006中國(guó)微生物學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

4 金玉蓮;王慶;張小剛;王仲元;;中國(guó)部分地區(qū)耐利福平和異煙肼耐藥基因的檢測(cè)[A];2004年中國(guó)防癆協(xié)會(huì)臨床基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

5 蔣燕群;韓立中;奚偉;湯瑾;王堅(jiān)強(qiáng);倪語(yǔ)星;;兩株陰溝腸桿菌的DHA-1型耐藥基因的轉(zhuǎn)移方式探討[A];第6次全國(guó)微生物學(xué)與免疫學(xué)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

6 陳建國(guó);蘇兆亮;許化溪;王勝軍;聞平;虞健人;;dfrA17和aadA5基因盒—一株銅綠假單胞菌中新發(fā)現(xiàn)的整合子耐藥基因攜帶形式[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

7 許景峰;徐琳;;產(chǎn)ESBLs菌株Ⅰ類整合子分布與耐藥基因的研究[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

8 李智山;趙建忠;周樂(lè)翔;楊燕;鄧三季;鄒玖明;;國(guó)內(nèi)首次從大腸埃希菌發(fā)現(xiàn)blaCTX-M-55型超廣譜β內(nèi)酰胺酶基因[A];湖北省暨武漢市微生物學(xué)會(huì)分析微生物專業(yè)委員會(huì)第十屆第五次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 羊云飛;王紅寧;馬孟根;李成忠;;三重PCR檢測(cè)致病性大腸桿菌、沙門氏菌對(duì)氯霉素類抗生素耐藥基因(Cat1、CmlA、Flor)的研究[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

10 鄧麗華;許美榮;胡麗萍;;銅綠假單胞菌的耐藥性及β-內(nèi)酰胺酶基因的研究[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 特約記者 魏東海;抗生素濫用小病也能致命[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

2 本報(bào)記者 白毅;抗生素濫用仍是“頑癥”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

3 本報(bào)記者 陳飛;立法阻斷抗生素濫用[N];健康報(bào);2009年

4 健康時(shí)報(bào)記者 余易安;別向醫(yī)生索要抗生素[N];健康時(shí)報(bào);2010年

5 常怡勇;呼吁為抗生素的應(yīng)用立法[N];21世紀(jì)藥店;2010年

6 記者 崔芳;中西醫(yī)結(jié)合或可助遏制抗生素濫用[N];健康報(bào);2010年

7 鐘西;“何謂抗生素濫用”應(yīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

8 杜永章　李雄庚 張順;用好抗生素這把“雙刃劍”[N];解放軍報(bào);2010年

9 本報(bào)記者 李文雯;抗生素濫用誰(shuí)之過(guò)？[N];玉溪日?qǐng)?bào);2010年

10 首席記者 楊帆　記者 李珩;警惕 抗生素入侵食品[N];重慶日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 魯曦;低劑量抗生素刺激條件下耐藥基因水平傳播的機(jī)制研究[D];華南理工大學(xué);2012年

2 金鑫;亞治療劑量四環(huán)素飼喂對(duì)牛源微生物耐藥基因的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 魯玉俠;食源微生物耐藥基因水平傳播抑制研究[D];華南理工大學(xué);2010年

4 李楠;養(yǎng)殖場(chǎng)空氣中細(xì)菌分布及耐藥性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

5 賀德春;獸用四環(huán)素類抗生素在循環(huán)農(nóng)業(yè)中的遷移累積及阻斷技術(shù)研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 胡立芬;安徽省臨床分離的嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥性變遷及相關(guān)耐藥機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

7 畢水蓮;奇異變形桿菌可移動(dòng)耐藥基因島研究[D];華南理工大學(xué);2011年

8 馬孟根;豬源致病性沙門氏菌耐藥基因PCR和基因芯片檢測(cè)技術(shù)研究[D];四川大學(xué);2005年

9 許尚臣;顳葉內(nèi)側(cè)癲癇/海馬硬化外科治療及神經(jīng)細(xì)胞凋亡、耐藥基因表達(dá)研究[D];山東大學(xué);2007年

10 金文杰;禽致病性大腸桿菌耐藥基因和毒力因子的分子流行病學(xué)及HPI Irp1細(xì)胞表位作用的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 傅雅麗;耐藥基因及病原體高通量檢測(cè)芯片的研制及初步應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

2 包艷萍;珠三角蔬菜中磺胺類抗生素污染特征研究[D];暨南大學(xué);2010年

3 叢莉;魚塘生態(tài)體系沙門氏菌的耐藥性及耐藥基因分析[D];暨南大學(xué);2011年

4 段夏珍;惠州市蔬菜基地抗生素污染特征的初步研究[D];暨南大學(xué);2011年

5 曹冬梅;幾種典型抗生素的協(xié)同γ輻照降解效應(yīng)的研究[D];南京航空航天大學(xué);2011年

6 張旭;典型抗生素在土壤中的淋濾行為研究[D];暨南大學(xué);2012年

7 樊亭亭;我國(guó)抗生素濫用規(guī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

8 楊曉蕾;土壤中典型抗生素的同時(shí)測(cè)定及其方法優(yōu)化[D];山東大學(xué);2012年

9 邰義萍;珠三角地區(qū)蔬菜基地土壤中典型抗生素的污染特征研究[D];暨南大學(xué);2010年

10 劉慶;牛奶中抗生素的降解研究[D];西華大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2249324