【摘要】：飼料、食品由于其加工工藝、獨特風(fēng)味、防腐保鮮等方面的要求，必須使用相應(yīng)的添加劑，各種添加劑由于其操作簡單、效果顯著且成本低廉，已經(jīng)得到廣泛運用，但隨著相關(guān)研究的深入，傳統(tǒng)添加劑可能對人體造成的潛在危害逐漸受到重視，尋找一種穩(wěn)定、高效、安全性良好的新型添加劑顯得十分重要。人源溶菌酶是溶菌酶類物質(zhì)的一種，廣泛存在于人體體液和組織中。通過基因工程技術(shù)將編碼人源溶菌酶相關(guān)基因?qū)牍こ碳毦ㄟ^微生物發(fā)酵法得到的溶菌酶稱為重組溶菌酶。重組溶菌酶具有廣譜抗菌、保鮮防腐、消炎抗病毒等溶菌酶共有特點，整體效果優(yōu)于蛋清溶菌酶，可替代傳統(tǒng)防腐劑，也可作為功能因子添加于飼料、食品中，應(yīng)用潛質(zhì)廣闊；此外，重組溶菌酶是人體非特異性免疫因子，具有巨大科研價值是研究分子進化、分子免疫關(guān)系的良好模型。本課題旨在通過對重組溶菌酶酶學(xué)性質(zhì)，實際防腐保鮮效果及小鼠腸道菌群及血清生化指標(biāo)調(diào)節(jié)作用的研究，探尋其作為飼料、食品添加劑使用的實際效果及對機體產(chǎn)生的影響。 首先，本文以經(jīng)典比濁法為基礎(chǔ)，，在不同溫度、pH、人工胃腸液及金屬離子條件下，以微球菌為底物，測定蛋清、重組溶菌酶酶活變化狀況；然后，用不同濃度的重組溶菌酶溶液浸泡斑點叉尾洶魚肉，分別測定不同時期魚肉感官指標(biāo)、菌落總數(shù)、pH值、TVB-n值、TBA值、酸度；最后，通過小鼠飲水口服溶菌酶(蛋清溶菌酶和重組溶菌酶酶活分別為2500、5000U/ml)后無菌取腸道內(nèi)容物，通過微生物培養(yǎng)測定腸道菌群的變化；并測定不同試驗時間的血清總蛋白、尿素氮、甘油三酯、膽固醇的含量。 酶學(xué)性質(zhì)試驗結(jié)果表明，蛋清溶菌酶最適溫度為40℃，最適pH6.0；重組溶菌酶最適溫度45℃，最適pH6.0；兩種溶菌酶在溫度超過50℃后活性迅速下降，但重組溶菌酶酶活下降較快；室溫條件下在pH值6.0-9.0溶液中預(yù)處理60min，兩種溶菌酶活力均保持80%以上；在人工胃液中，兩種溶菌酶活性迅速下降；在人工腸液中，重組溶菌酶酶活下降明顯較慢；Fe~(3+)、Ca~(2+)、K~+、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)、Al~(3+)、Cu~(2+)均會不同程度的抑制兩種溶菌酶活性。保鮮試驗結(jié)構(gòu)表明，不同濃度重組溶菌酶溶液浸泡后魚肉感官指標(biāo)下降速度，揮發(fā)性鹽基氮、TBA值上升速度，菌落總數(shù)和酸度不同程度降低，表明重組溶菌酶能夠減緩魚肉腐敗進程，達到延長保藏期、最大限度發(fā)揮魚肉食用價值和商品價值的作用。實際應(yīng)用中，0.25%重組溶菌酶即可得到較好保鮮效果，將斑點叉尾洶保藏期由4天延長至12天。動物試驗結(jié)果表明，兩種溶菌酶均能不同程度降低小鼠腸道金黃色葡萄球菌、糞腸球菌數(shù)量，促進雙歧桿菌、乳酸桿菌生長，但重組溶菌酶對大腸埃希菌群抑制作用明顯(P0.05)，蛋清溶菌酶不明顯(P0.05)；不同濃度兩種溶菌酶均能一定程度提高血清總蛋白含量，降低尿素氮、膽固醇含量，其中重組溶菌酶(5000U/ml)飼喂21天后血清總蛋白、尿素氮、膽固醇同對照組差異顯著(P0.05)。本課題顯示，蛋清、重組溶菌酶均具有調(diào)節(jié)機體腸道菌群平衡，血清指標(biāo)的作用，重組溶菌酶的效果更為明顯，在實際應(yīng)用中需要注意溫度、pH、胃液腸液、金屬離子對酶活的影響，此外重組溶菌酶能夠顯著延長水產(chǎn)品保藏期，非常適合作為飼料、食品添加劑使用。
[Abstract]:Because of its processing technology, unique flavor, preservation and other requirements, it is necessary to use the corresponding additives. Various additives have been widely used because of their simple operation, significant effect and low cost. However, with the deepening of relevant research, the potential harm of traditional additives to human body has gradually been serious. Human lysozyme is a kind of lysozyme and widely exists in human body fluids and tissues. The lysozyme produced by microbial fermentation of engineered bacteria is called weight. Recombinant lysozyme has the common characteristics of broad-spectrum antibacterial, preservative, anti-inflammatory and anti-viral lysozyme, the overall effect is better than egg white lysozyme, can replace traditional preservatives, can also be added as functional factors in feed, food, application potential is broad; in addition, recombinant lysozyme is a human non-specific immune factor, has a huge. Scientific research value is a good model for studying molecular evolution and molecular immunity relationship.The purpose of this study is to explore the practical effect of recombinant lysozyme as feed and food additive and its influence on the organism by studying the properties of recombinant lysozyme, the effect of preservation and preservation, the regulation of intestinal flora and serum biochemical indexes in mice.
Firstly, on the basis of the classical turbidimetric method, the changes of egg white and recombinant lysozyme activity were determined with Micrococcus as substrate under different temperature, pH, artificial gastrointestinal juice and metal ions. Then, the sensory indexes and total bacterial colonies were determined with different concentrations of recombinant lysozyme solution soaked in the pork of T. maculatus. Number, pH value, TVB-n value, TBA value, acidity; finally, after oral administration of lysozyme (egg white lysozyme and recombinant lysozyme activity were 2500,5000U/ml, respectively), the intestinal contents were obtained aseptically and the changes of intestinal flora were determined by microbial culture; and serum total protein, urea nitrogen, triglyceride, cholesterol were determined at different test time. Content.
The results of enzymatic properties test showed that the optimum temperature of lysozyme was 40 C and pH 6.0; the optimum temperature of recombinant lysozyme was 45 C and pH 6.0; the activity of two lysozymes decreased rapidly after the temperature exceeded 50 C, but the activity of recombinant lysozyme decreased rapidly; the activity of two lysozymes was pretreated in pH 6.0-9.0 solution for 60 min at room temperature. In artificial gastric juice, the activity of two kinds of lysozyme decreased rapidly; in artificial intestinal juice, the activity of recombinant lysozyme decreased slowly; Fe ~ (3 +), Ca ~ (2 +), K ~ +, Mn ~ (2 +), Zn ~ (2 +), Mg ~ (2 +), Al ~ (3 +), Cu ~ (2 +) inhibited the activity of two kinds of lysozyme in different degrees. The results showed that recombinant lysozyme could slow down the decay process of fish meat, prolong the shelf life and maximize the edible and commercial value of fish meat. The results of animal experiment showed that the two lysozymes could reduce the number of Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis, promote the growth of bifidobacteria and lactobacillus, but the recombinant lysozyme had obvious inhibition on E. coli (P 0.05). Lysozyme in egg white was not significant (P The effect of recombinant lysozyme on intestinal flora balance, serum index and temperature, pH, gastric juice, intestinal juice and metal ions should be paid attention to. In addition, recombinant lysozyme can significantly prolong the shelf life of aquatic products, which is very suitable for feed and food additives.
【學(xué)位授予單位】：中國計量學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R151

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本文編號：2247141