本文選題：視黃醇 + 維生素A缺乏(VAD)��； 參考：《華中科技大學》2012年博士論文

【摘要】：維生素A(Vitamin A, VA)乙名視黃醇(Retinol),是指具有視黃醇結(jié)構(gòu),并具有其生物學活性的一大類物質(zhì),包括已形成的維生素A(Preformed vitamin A)和維生素A原(Provitamin A)。它是維持人體生命過程所必須的一種微量營養(yǎng)素,對機體的生長發(fā)育、組織細胞增殖與分化具有廣泛的調(diào)控作用。它不僅對視覺非常重要,在維持人體組織和器官的正常功能、提高免疫機能、抗氧化等方面也發(fā)揮著重要作用。 維生素A缺乏(Vitamin A Deficiency, VAD)分為臨床缺乏、亞臨床缺乏(Subclinical Vitamin A Deficiency, SVAD)和可疑亞臨床缺乏。其中SVAD和可疑SVAD是指因維生素A攝入不足而導致的維生素A輕微缺乏,特點為無明顯的臨床癥狀和體征,但是,有研究表明,即使未出現(xiàn)典型的維生素A缺乏臨床表現(xiàn),SVAD和可疑SVAD可以影響兒童的鐵代謝和免疫功能等,使兒童出現(xiàn)缺鐵性貧血或降低其抗感染能力,極大的增加患病和死亡的危險。 維生素A缺乏是世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)認定的世界四大營養(yǎng)素缺乏病之一,主要見于發(fā)展中國家的兒童。我國通過近幾年對維生素A缺乏狀況的流行病學調(diào)查,發(fā)現(xiàn)我國屬于中度SVAD國家,且維生素A缺乏地區(qū)分布不平衡。目前我國嚴重的維生素A缺乏已很少見,但是維生素A的亞臨床缺乏率仍然很高,VAD仍然是我國兒童面臨的一個主要的公共衛(wèi)生問題。 然而,我國針對兒童的維生素A相關(guān)基礎(chǔ)研究極其缺乏,具體表現(xiàn)在兩個方面：其一是我國目前關(guān)于兒童維生素A的推薦攝入量(Recommended nutrient intakes, RNI)標準是《中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量(Chinese DRIs)》所制定的標準(4-6歲兒童推薦攝入量為600μgRE,7-9歲兒童推薦攝入量為700μgRE),這個標準是參照FAO/WHO(1988年)的標準制定而成,我國沒有相應(yīng)的有關(guān)兒童的維生素A需要量的研究。由于存在種族差異和膳食結(jié)構(gòu)不同,以發(fā)達國家的結(jié)果作為我國兒童的膳食推薦攝入量標準參照可能并不適合我國兒童。從現(xiàn)有的調(diào)查結(jié)果來看,不管是城市還是農(nóng)村均顯示我國兒童的維生素A膳食攝入量嚴重不足,只占RNI的50%～60%,造成這個現(xiàn)象的原因,是我國兒童維生素A膳食攝入量確實缺乏嚴重,還是由于目前用于比較的RNI標準較高所致還未可知。 其二是維生素A營養(yǎng)狀況的評價局限于血清視黃醇水平與臨床癥狀,缺少應(yīng)用更為敏感可靠的評價方法的研究。維生素A營養(yǎng)狀況的評價方法較多,目前國際上應(yīng)用較多的方法包括：血清維生素A水平測定,相對劑量反應(yīng)(Relative dose response, RDR)試驗,改良的相對劑量反應(yīng)(Modified relative dose response, MRDR)試驗,穩(wěn)定同位素稀釋(Deuterated retinol dilution, DRD)試驗等。血清維生素A水平測定雖然是目前應(yīng)用最廣泛的評價方法,但是由于人體對血清視黃醇濃度的內(nèi)穩(wěn)態(tài)控制,血清水平難以反應(yīng)亞臨床維生素A缺乏狀態(tài),并且還易受到感染、蛋白質(zhì)狀況、其他營養(yǎng)素缺乏等因素的干擾。由于肝臟是人體儲存維生素A的主要器官,所以維生素A營養(yǎng)評價的最佳指標應(yīng)為肝臟維生素A儲存量,RDR、MRDR和DRD均是間接反映肝臟維生素A儲存狀態(tài)的方法,其中RDR和MRDR只能粗略地反應(yīng)肝臟維生素A的儲存狀態(tài),不能定量地反應(yīng)肝臟維生素A儲存的真實水平,DRD是目前可定量的估算總體維生素A水平和肝臟維生素A濃度的唯一方法。近年來,國際上已經(jīng)有相關(guān)研究應(yīng)用該方法來評估老年人和成人的維生素A膳食推薦攝入量,但是應(yīng)用于兒童的研究還未見報道,國內(nèi)在應(yīng)用穩(wěn)定同位素稀釋法進行兒童維生素A的營養(yǎng)狀況的評價方面更是空白。 上述分析表明,應(yīng)用更為科學的方法制定適合我國兒童的維生素A需要量和膳食供給量是改善兒童維生素A營養(yǎng)狀況急待解決的關(guān)鍵課題。因此,本次在國家科技支撐計劃項目資助下,選取十堰市城區(qū)4-9歲健康兒童為研究對象,首次采用國際公認的最先進、最敏感可靠的穩(wěn)定同位素稀釋試驗來評價我國4-9歲兒童的維生素A營養(yǎng)狀況,并結(jié)合膳食調(diào)查結(jié)果,提出適合我國4-9歲兒童的維生素A膳食適宜攝入量。獲得的研究結(jié)果將為制定我國兒童的維生素A膳食參考攝入量提供科學依據(jù),對改善我國乃至整個亞洲兒童維生素A營養(yǎng)狀況將具有重要的理論價值和實際意義,同時為進一步研究我國兒童維生素A生理需要量提供重要的科學依據(jù)。 本研究主要內(nèi)容包括以下三個部分： 第一部分兒童的營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查與評價 目的：全面了解本次調(diào)查的十堰市4～9歲兒童的營養(yǎng)與健康狀況,為下一步篩查維生素A營養(yǎng)狀況良好的兒童做準備。 方法：選擇十堰市城區(qū)實驗幼兒園和外國語學校作為調(diào)查學校,以幼兒園中班和大班的孩子,外國語學校二年級和三年級的學生作為調(diào)查對象。于2009年12月至2010年7月,對調(diào)查對象進行詳細的問卷調(diào)查、體格檢查、膳食調(diào)查和實驗室指標檢測。問卷調(diào)查內(nèi)容包括家庭基本情況,近期患病情況,飲食習慣情況,是否服用營養(yǎng)補充劑等；體格檢查包括身高體重測量及內(nèi)科與皮膚檢查；膳食調(diào)查方法包括連續(xù)3天稱重法和詢問法(由父母等監(jiān)護人進行膳食記錄)；實驗室檢測包括血液生化指標檢測、脂肪吸收試驗和糞便寄生蟲檢查。 結(jié)果：共有424名兒童參與調(diào)查,其中4-6歲組231人,占54.5%,7-9歲組193人,占45.5%。性別構(gòu)成,男生233人,占55.0%,女生191人,占45.0%。大部分兒童的父母受教育程度都較高,父母親超過半數(shù)均是大專及以上文化程度,職業(yè)以商業(yè)個體居多,其次是專業(yè)技術(shù)人員和職員,兒童家庭平均收入約52307元／年,用于食物的支出約17161元／年。身高均數(shù)為119.92±11.10cm,體重均數(shù)為24.16±6.09kg,生長遲緩發(fā)生率為2.66%,其中4-6歲組為4.52%,7-9歲組為0.52%,營養(yǎng)不良發(fā)生率為0.24%,超重率15.01%,肥胖率5.33%。血紅蛋白均數(shù)為119.89±8.62g/L,貧血患病率為9.2%。脂肪吸收實驗發(fā)現(xiàn)47例陽性,占12.0%,腸道寄生蟲鏡檢發(fā)現(xiàn)1例陽性,蟲卵為蛔蟲。其他體檢結(jié)果未發(fā)現(xiàn)異常。膳食調(diào)查發(fā)現(xiàn)能量和宏量營養(yǎng)素攝入充足,三大供能營養(yǎng)素產(chǎn)能比例合理,但存在營養(yǎng)素攝入不足情況,其中鈣、鋅和維生素A缺乏較為嚴重,鈣的攝入量占RNI的42.53%～71.68%,鋅的攝入量占RNI的67.73%～69.92%,維生素A攝入量占RNI的56.38%～58.59%,均屬嚴重不足。維生素A來源中β-胡蘿卜素占視黃醇當量的比例為36.44%。 結(jié)論：從體格檢查和實驗室檢測的結(jié)果來看,本次調(diào)查的十堰市4-9歲兒童的總體發(fā)育水平較好,但是超重和肥胖率較高,應(yīng)引起足夠重視。膳食調(diào)查發(fā)現(xiàn)鈣、鋅和維生素A攝入量嚴重不足,說明在調(diào)查兒童中存在營養(yǎng)過剩與微量營養(yǎng)素缺乏并存狀態(tài)。 第二部分兒童維生素A適宜攝入量的研究 第一節(jié)兒童血清維生素A營養(yǎng)狀況評價、影響因素分析及研究對象的的初篩 目的：采用血清視黃醇檢測對所有調(diào)查兒童進行維生素A營養(yǎng)狀況的初篩。并通過單因素和多因素分析,篩選血清維生素A水平的影響因素。 方法：采用反相高效液相色譜內(nèi)標法(RP-HPLC)進行檢測。血樣加入等容積乙醇進行沉淀,用正己烷進行萃取,移出己烷層氮氣吹干,殘渣用乙醇溶解,30μ1進樣。以Hypersil ODS-C18 (4.6mm×250mm,5μm)為色譜分析柱,流動相：甲醇：水(90：10v/v),柱溫：25℃,流速：1ml/min,檢測波長：325nm,整個過程注意避光。內(nèi)標法定量,取成倍比稀釋的標準系列應(yīng)用液,按照上述色譜條件做HPLC測定,結(jié)果以視黃醇與內(nèi)標的峰面積比值為橫坐標,以視黃醇的濃度為縱坐標,做出內(nèi)標法校準曲線進行定量。 結(jié)果：403例兒童血清視黃醇水平在0.39-4.66μmol/L之間,均數(shù)為1.48±0.52μmol/L。血清視黃醇0.7μmol/L(亞臨床缺乏)的兒童所占比例為3.0%,血清視黃醇1.05μmol/L(可疑亞臨床缺乏)的兒童所占比例為13.6%。以血清視黃醇值為因變量進行單因素分析發(fā)現(xiàn)性別、年齡、父親不同職業(yè)類別,家庭收入,家庭食物支出,近6個月因病請假天數(shù)、是否服用營養(yǎng)補充劑、脂肪吸收試驗、身高、體重和BMI值有統(tǒng)計學意義；將血清視黃醇按1.05μmol/L和≥1.05μmol/L分成兩類做因變量,選擇有統(tǒng)計學意義的因素為自變量,應(yīng)用兩分類Logistic回歸分析方法進行多因素分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有年齡和脂肪吸收試驗為血清視黃醇的影響因素,年齡較大組,血清視黃醇值較高,脂肪吸收實驗陰性組血清視黃醇值較高。 結(jié)論：經(jīng)過初篩,83.4%(n=336)的兒童顯示血清維生素A營養(yǎng)狀況良好,亞臨床缺乏率和可疑亞臨床缺乏率均低于2002年全國抽查的平均水平,說明調(diào)查兒童的血清維生素A的營養(yǎng)狀況總體情況良好,但仍應(yīng)注重對兒童維生素A亞臨床缺乏的預防。 第二節(jié)采用RBP-RDR試驗對初篩兒童的維生素A營養(yǎng)狀況評價和復篩 目的：采用視黃醇結(jié)合蛋白-相對劑量反應(yīng)試驗(RBP-RDR試驗)對經(jīng)過初篩的調(diào)查兒童進行第二次篩選,為后面進一步確認維生素A營養(yǎng)狀況良好的兒童提供依據(jù)。 方法：根據(jù)問卷調(diào)查、體格檢查和實驗室檢測結(jié)果,去掉患有急慢性感染性疾病者、服用維生素A補充劑者、寄生蟲陽性者,脂肪吸收實驗陽性者、CRP8mg/L者以及血清維生素A1.05μmol/L者,以血清視黃醇值從大到小挑選血清視黃醇含量1.05μmol/L的兒童,共挑選出174名兒童進行相對劑量反應(yīng)試驗。本次采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法,應(yīng)用人視黃醇結(jié)合蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測,首先用抗RBP抗體包被微孔板,制成固相抗體,加入標準品和樣品,形成RBP*Anti-RBP復合物,洗去未結(jié)合的樣品蛋白,加入HRP標記的親和素(Anti-RBP-HRP),形成Anti-RBP-HRP*RBP*Anti-RBP復合物,洗去未結(jié)合的親和素,加入顯色底物,用酶標儀檢測結(jié)合酶的活性。 結(jié)果：進行相對劑量反應(yīng)的174人中,年齡4-6歲組57人,占32.8%,7-9歲組117人,占67.2%。性別男生96人,占55.2%,女生78人,各44.8%。4-6歲組RDR均數(shù)為-33.22%±45.84%,7-9歲組RDR值均數(shù)為-30.60%±78.99%。RDR試驗檢測表明維生素A營養(yǎng)狀況良好的兒童149人,占85.6%,檢出亞臨床VA缺乏者25人,占14.4%。其中4-6歲組SVAD檢出16人,檢出率為28.1%,7-9歲組檢出9人,檢出率7.7%,年齡之間差異有統(tǒng)計學意義(x2檢驗,P0.001)。RDR20%和RDR20%兩組之間血清視黃醇值差異無統(tǒng)計學意義(t-test,P=0.711)。 結(jié)論：經(jīng)過第二次篩選,85.6%(n=149)的兒童顯示肝臟維生素A儲存良好,RBP-RDR試驗簡便、經(jīng)濟,敏感,不失為一種評價肝臟維生素A儲存狀況的較好的方法,但是需要有更多的研究進一步論證。 第三節(jié)采用DRD試驗對兒童的維生素A營養(yǎng)狀況評價及適宜攝入量研究 目的：采用穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù)來進一步確認這些已篩選出的兒童的維生素A營養(yǎng)狀況,結(jié)合膳食調(diào)查的結(jié)果,在此基礎(chǔ)上,提出4-9歲健康兒童的膳食維生素A的適宜攝入量。并且通過對3天DRD試驗和18天DRD試驗相結(jié)合的方法,以探討3天DRD試驗是否可以用來評價我國兒童的維生素A營養(yǎng)狀況。 方法：根據(jù)相對劑量反應(yīng)試驗的結(jié)果,剔除掉RDR值接近20%的兒童,一共挑選出123名兒童,分為3天組和18天組進行穩(wěn)定同位素稀釋法試驗。從這123份血樣中挑出60名兒童的血樣進行DRD測定。血樣首先用3mlCHC13/CH3OH(2:1)進行萃取,收集CHC13層,水層中加入2m1己烷重提脂溶性營養(yǎng)素,CHC13層和己烷層混合后,氮氣吹干。殘留物溶于100μ1無水乙醇,80μ1進樣HPLC系統(tǒng)。收集視黃醇HPLC洗脫液,洗脫液分別用2m1氯仿和2m1正己烷萃取,兩次萃取液合并,氮氣吹干,殘留物中加入40μl衍生化試劑,加熱70℃30分鐘,用玻璃移液器移取到進樣瓶,進行GC/MS分析。整個過程注意避光,在紅光下進行。18天組因為體內(nèi)內(nèi)源性視黃醇(不含重氫)與含重氫的視黃醇己達到平衡,因此直接用Furr等提出的改良的Bausch-Rietz DRD公式來計算體內(nèi)維生素A的總量；3天組因為體內(nèi)內(nèi)源性視黃醇(不含重氫)與含重氫的視黃醇未達到平衡,因此不能用改良的Bausch-Rietz DRD公式來計算,我們采用Tang等提出的公式,先由3天的同位素豐度比計算出相對應(yīng)的21天的同位素豐度比,再將21天的同位素豐度比帶入改良的Bausch-Rietz DRD公式計算出人體維生素A的總量進而計算出肝臟維生素A濃度。 結(jié)果：進行穩(wěn)定同位素檢測的60人中,口服標記視黃醇后3天采血的28人,18天采血的32人,各占46.6%,53.4%,男生38人,女生22人,各占63.8%,36.2%,4-6歲22人,7-9歲38人,各占36.2%,63.8%。60名兒童中去掉未檢出同位素峰的2人,剩下58人,通過公式計算得到58名兒童的維生素A儲存總量平均為0.28±0.19mmol,肝臟維生素儲存濃度為0.33±0.25umol/g liver。應(yīng)用相關(guān)分析分析維生素A膳食攝入量及其他主要營養(yǎng)素膳食攝入量與血清維生素A水平、體內(nèi)維生素A總量及肝臟維生素A濃度三者之間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)維生素A膳食攝入量與體內(nèi)維生素A總量(r=0.277,P=-0.035)和肝臟維生素A濃度(r=0.270,P=0.040)之間存在正相關(guān)關(guān)系,而與血清維生素A水平之間無相關(guān)關(guān)系(r=0.047,P=0.721)。p-胡蘿卜素攝入量的結(jié)果同VA攝入量,p-胡蘿卜素與體內(nèi)維生素A總量(r=0.288 P=0.028)和肝臟維生素A濃度(r=0.419,P=0.001)之間存在正相關(guān)關(guān)系,而與血清維生素A水平之間無相關(guān)關(guān)系(=0.170,P=0.193)。其他膳食攝入量,除了發(fā)現(xiàn)碳水化合物與肝臟維生素A濃度之間存在負相關(guān)關(guān)系(r=-0.304,P=0.020)以外,如脂肪、蛋白質(zhì)均沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的結(jié)果。按照肝臟維生素A濃度參考值范圍為0.07μmol/g～1.05μmol/g的標準,去掉肝臟維生素A濃度0.07μmol/g的2人,以及1.05μmol/g的1人,按剩下的體內(nèi)維生素A營養(yǎng)狀況良好的55人計算,4-6歲組維生素A攝入量均數(shù)為476.9±196.7μg RE/d (95%CI 384.4-568.95μg RE/d),7-9歲組維生素A攝入量均數(shù)為529.1±87.2μg RE/d(95%CI 499.58～558.62μg RE/d)。 結(jié)論：在以穩(wěn)定同位素稀釋試驗結(jié)果確定維生素A營養(yǎng)狀況良好的兒童維生素A膳食攝入量平均值基礎(chǔ)上,我們提出4～6歲組兒童維生素A的適宜攝入量為450μgRE/d(95%CI,385-570μg RE/d),7-9歲組兒童維生素A的適宜攝入量為550μg RE/d(95%CI,500～560μg RE/d)。3天DRD試驗也取得了較好的效果,3天組和18天組最后計算得到的維生素A總量和肝臟維生素A濃度沒有統(tǒng)計學差異。但是通過對幾種3天DRD公式的比較,從側(cè)面反映了要擬合出一個象Furr改良的DRD公式一樣的得到大家公認的3天DRD公式還需進一步研究。 第三部分維生素A缺乏兒童的干預及效果評價 目的：為了糾正維生素A缺乏兒童的血清視黃醇水平,對血清視黃醇檢測發(fā)現(xiàn)具有低維生素A血清的兒童發(fā)放維生素A補充劑,并對干預效果進行觀察。 方法：對血清視黃醇濃度1.05μmol/L者(小學12人,幼兒園55人)發(fā)放維生素A補充劑,干預三個月后再次采血同樣用高效液相色譜法檢測血清中視黃醇濃度(方法同第二部分第一節(jié))。除此之外,這些兒童的膳食情況保持之前的狀態(tài)。 結(jié)果：血清視黃醇濃度在1.05μmol/L以下者共67人,其中4-6歲組55人,占82.1.%,7-9歲組12人,占17.9%。性別比例為男生34人,占50.7%,女生33人,占49.3%。發(fā)放維生素A補充劑干預3個月后,發(fā)現(xiàn)除了幼兒園有1人血清視黃醇仍低于1.05μmol/L,其他均高于1.05μmol/L,恢復率約99%。干預前血清視黃醇平均濃度為0.85±0.17μmol/L,干預后血清視黃醇平均濃度為2.85±0.94μmol/L,干預后血清視黃醇濃度增加了2.00μmol/L。按照自身對照設(shè)計進行配對t檢驗,補充前后差異有統(tǒng)計學意義(t=14.86,P0.001)。 結(jié)論：從血清維生素A水平的恢復率來看,服用維生素A補充劑,低劑量多次干預是一種有效的改變維生素A營養(yǎng)狀況的干預措施。但是要注重在干預之后應(yīng)對兒童家長進行營養(yǎng)知識宣教,指導其合理營養(yǎng)和平衡膳食的方法,使其能注意改善兒童膳食結(jié)構(gòu)以鞏固療效,從膳食中補充充足的維生素A是改善VAD最安全有效的途徑,也是最經(jīng)濟簡便的途徑。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R151

【參考文獻】

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本文編號：2018325