本文選題：CHO細胞微核 + 自動化��； 參考：《昆明理工大學》2012年碩士論文

【摘要】：微核實驗是一種以觀察細胞中微核的形成來檢測遺傳毒性的毒理學分析方法,能經(jīng)濟、簡便、準確地檢測各種理化因子對細胞的遺傳損傷,在化合物遺傳毒性檢測方面發(fā)揮著重要作用。傳統(tǒng)微核實驗耗時費力、檢測結果易受主觀因素影響,很難滿足快速、大量檢測化合物的需要,而基于儀器的微核自動化檢測技術可以達到快速、高通量檢測化合物的遺傳毒性的目的。 本論文選擇了國內外毒理學檢測常用的細胞株之一中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)作為材料,利用流式細胞儀和激光掃描細胞儀來研究體外微核的全自動檢測技術,旨在建立CHO細胞體外微核的流式細胞儀自動化檢測方法和激光掃描細胞儀自動化檢測方法,以達到快速準確地進行化合物遺傳毒性檢測的目的。 流式細胞儀方法利用體外微核分析試劑盒對染色體斷裂劑環(huán)磷酰胺和非整倍體劑秋水仙堿引起的CHO細胞微核進行了分析和研究,并與傳統(tǒng)的顯微鏡檢測方法相比較,參考美國國家臨床實驗室實驗室標準化委員會EP9-A文件的方法,對兩種方法的微核檢測結果進行離群值檢驗、取值范圍判斷以及回歸分析。研究結果顯示,流式細胞儀自動化檢測方法和傳統(tǒng)的顯微鏡檢測方法具有良好相關性,由此建立了一種CHO細胞體外微核的流式細胞儀自動化檢測方法,為了考察該方法的可靠性和適用性,并將所建立的流式細胞儀方法應用于食品添加劑、化妝品(染發(fā)劑)、藥品、農藥、水體、重金屬離子、卷煙煙氣等誘發(fā)的CHO細胞微核檢測,同時與傳統(tǒng)的微核顯微鏡檢法相比較分析。結果表明,二種方法的測定值無明顯離群值,相關性良好,說明該方法可以適于食品添加劑、化妝品(染發(fā)劑)、藥品、農藥、水體、重金屬離子、卷煙樣品總粒相物誘發(fā)的體外細胞遺傳損傷的檢測,結果準確可靠。 激光細胞儀方法結合細胞胞質分裂阻斷微核技術,采用兩種熒光染料,對環(huán)磷酰胺(CP)誘導的CHO細胞微核進行了研究,并將該方法與傳統(tǒng)的微核顯微鏡檢法進行比較分析,結果顯示兩種方法的測定值無明顯離群值,二者相關性良好,由此建立了一種CHO細胞體外微核的激光掃描細胞儀自動化檢測方法,并利用該方法對13種不同類型的物質處理的CHO細胞進行微核檢測,同時與顯微鏡方法相比較,研究結果表明該方法評價結果穩(wěn)定可靠,能夠快速高通量檢測多種類型的化合物所誘導的微核。 本研究所建立的體外細胞微核流式細胞儀方法和激光掃描細胞儀方法最大的優(yōu)點是方法簡便、檢測速度快、準確性高,可適用性強,為體外細胞微核的自動化檢測方法的研究提供參考,同時也為化合物誘變性的篩選、食品毒理學檢測和環(huán)境污染檢測等提供了快速檢測方法。
[Abstract]:Micronucleus assay is a toxicological analysis method to detect genotoxicity by observing the formation of micronucleus in cells. It can be used to detect the genetic damage caused by various physical and chemical factors in an economical, simple and accurate way. It plays an important role in the detection of genetic toxicity of compounds. The traditional micronucleus experiment is time-consuming and laborious, and the test results are easily influenced by subjective factors, so it is difficult to meet the needs of rapid and mass detection of compounds. However, the instrument-based micronucleus automated detection technology can achieve rapid results. The aim of this study was to detect the genotoxicity of compounds by high throughput. In this paper, Cho cells, one of the commonly used cell lines of Chinese hamster ovary, were selected as materials. Flow cytometry (FCM) and laser scanning cell analyzer (LSCC) were used to study the automatic detection technique of micronucleus in vitro. The aim of this study was to establish an automatic detection method for in vitro micronucleus of Cho cells by flow cytometry and laser scanning cell analyzer. In order to detect the genotoxicity of compounds quickly and accurately, the micronucleus of Cho cells induced by chromosome breaking agent cyclophosphamide and aneuploidy colchicine was detected by flow cytometry with in vitro micronucleus analysis kit. Has carried on the analysis and the research, Compared with the traditional microscopical methods and referring to the EP9-A document of the National Committee of Clinical Laboratory Standardization, the outlier values, the range of values and the regression analysis of the results of the two methods were tested. The results showed that there was a good correlation between the flow cytometry automated detection method and the traditional microscope detection method, so a flow cytometry automatic detection method for Cho cell micronucleus in vitro was established. In order to investigate the reliability and applicability of the method, the flow cytometry was used to detect the micronucleus of Cho cells induced by food additives, cosmetics (hair dye, drugs, pesticides, water, heavy metal ions, cigarette smoke, etc.) At the same time, it is compared with the traditional micronucleus microscopy. The results show that there is no obvious outlier and the correlation between the two methods is good. The results show that the method is suitable for food additives, cosmetics (hair dye, medicine, pesticide, water, heavy metal ions). The detection of in vitro cell genetic damage induced by total granulocytes in cigarette samples was accurate and reliable. Two kinds of fluorescent dyes were used in combination with cytoplasmic division blocking micronuclear technique. The micronucleus of Cho cells induced by cyclophosphamide (CPN) was studied and compared with the traditional micronucleus microscopy. The results showed that there was no significant outlier between the two methods and there was a good correlation between them. A laser scanning cytometer (LSCC) method was developed to detect the micronucleus of Cho cells in vitro. The method was used to detect the micronuclei of Cho cells treated with 13 different types of substances, and the results were compared with the microscopic method. The results show that the evaluation results of this method are stable and reliable. The method of in vitro micronucleus flow cytometry and laser scanning cytometer was developed to detect micronucleus induced by many kinds of compounds. The advantages of this method are that the method is simple, the detection speed is fast, and the accuracy is high. It provides a reference for the study of automated detection of micronucleus in vitro, as well as a rapid detection method for the screening of mutagenicity of compounds, the detection of food toxicology and the detection of environmental pollution.
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R114

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本文編號：2003805