本文選題：雙酚A + 炎癥　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景雙酚A(Bisphenol A,BPA)作為一種重要工業(yè)原料,在世界范圍內(nèi)被廣泛生產(chǎn)與使用。BPA主要被用來當(dāng)做塑料制品添加劑,并廣泛存在于罐裝食品,奶瓶,水瓶,密封膠,眼鏡等日常用品中。在加熱或者遇到酸時,BPA會從塑料等制品中釋放出來,導(dǎo)致人類的廣泛暴露。BPA是一種典型的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,具有較弱的雌激素效應(yīng)。近年來,流行學(xué)研究和動物實驗研究均報道BPA暴露與肥胖密切相關(guān)。新興的代謝性炎癥研究表明,肥胖屬于一種全身慢性低度炎癥狀態(tài),這種狀態(tài)主要與脂肪組織炎癥狀態(tài)有關(guān),而脂肪組織炎癥又是肥胖相關(guān)疾病的重要驅(qū)動因素。IL-17是輔助性T細(xì)胞Th17細(xì)胞分泌的主要炎性因子,在炎癥及免疫相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用,已成為近年來炎癥性疾病討論和研究的熱點。目前有關(guān)IL-17在BPA誘導(dǎo)肥胖中對脂肪組織炎癥影響及調(diào)控作用仍然不清楚。研究目的通過動物實驗探討環(huán)境相當(dāng)劑量的BPA暴露對小鼠脂肪組織炎性細(xì)胞浸潤、炎癥細(xì)胞因子表達、IL-17表達和Th17細(xì)胞比例的影響,并用IL-17抗體下調(diào)IL-17,探討IL-17對BPA暴露誘導(dǎo)小鼠脂肪組織炎癥的調(diào)控作用。為制定環(huán)境BPA暴露健康危害的防治措施和策略提供實驗資料依據(jù)。研究方法第一部分:BPA暴露誘導(dǎo)小鼠脂肪組織炎癥中IL-17表達的研究4周齡C57BL/6J野生型雄性小鼠隨機分為溶劑對照組、10nM BPA組、100nM BPA組和1000nM BPA組,每組48只小鼠。每組分別用普通飲食(ND)和高脂飲食(HFD)各喂養(yǎng)24只。小鼠通過飲水?dāng)z入BPA,分別于暴露8周、12周、16周和20周時處死6只動物,取附睪脂肪墊進行后續(xù)實驗。第二部分:IL-17抗體對BPA誘導(dǎo)的小鼠脂肪組織炎癥的影響4周齡C57BL/6J野生型雄性小鼠隨機分為非BPA暴露組和BPA暴露組,BPA暴露組小鼠通過飲水?dāng)z入1000nM BPA,所有小鼠均用HFD喂養(yǎng),每組中再分別設(shè)立溶劑對照組、IgG同型對照組和IL-17抗體處理組,每組16只小鼠。IgG同型對照組和IL-17抗體處理組每周分別腹腔注射100μg IgG和100μg IL-17抗體一次。分別于處理8周和16周后處死小鼠,取附睪脂肪墊進行后續(xù)實驗。用組織病理學(xué)觀察附睪脂肪組織炎性細(xì)胞浸潤情況,用免疫組化和酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測脂肪組織炎性因子IL-17、TNF-α、IL-1β和IL-6的表達和含量,用RT-PCR檢測IL-17 m RNA水平,用流式細(xì)胞術(shù)分析SVF中Th17細(xì)胞比例。結(jié)果1.BPA暴露對小鼠體重的影響與溶劑對照組相比,BPA暴露組ND喂養(yǎng)和HFD喂養(yǎng)小鼠體重均呈現(xiàn)時間和劑量依賴性增加。在ND喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比,小鼠體重增加在100nM BPA暴露組和1000nM BPA暴露組,分別從19周和12周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在HFD喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比,小鼠體重增加在100nM BPA暴露組和1000nM BPA暴露組,分別從15周和11周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與ND喂養(yǎng)相比,BPA對HFD喂養(yǎng)小鼠體重增加的影響更明顯。2.BPA暴露對小鼠脂肪組織炎癥的影響2.1脂肪組織炎癥的組織病理學(xué)觀察結(jié)果與ND喂養(yǎng)小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織脂肪細(xì)胞變大,炎性浸潤增多;與各自溶劑對照組相比,ND和HFD喂養(yǎng)小鼠中,脂肪組織脂肪細(xì)胞變大和炎性浸潤增多均呈時間和BPA暴露劑量依賴性,在HFD喂養(yǎng)小鼠中更明顯。2.2脂肪組織細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果與ND喂養(yǎng)小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織TNF-α、IL-1β和IL-6表達明顯增強,與溶劑對照組相比,BPA暴露組小鼠脂肪組織中TNF-α、IL-1β和IL-6表達都呈現(xiàn)時間和劑量依賴性增強,在HFD喂養(yǎng)小鼠中更明顯。2.3脂肪組織細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量ELISA檢測結(jié)果與ND喂養(yǎng)小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織TNF-α、IL-1β和IL-6含量升高;與溶劑對照組相比,BPA暴露組小鼠脂肪組織TNF-α、IL-1β和IL-6含量呈現(xiàn)時間和劑量依賴性升高。在ND喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,TNF-α和IL-6含量升高在100nM BPA組和1000nM BPA組從12周開始,在10nM BPA組從16周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IL-1β含量升高在1000nM BPA組從12周開始,在100nM BPA組從16周開始,在10nM BPA組從20周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在HFD喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,TNF-α含量升高在1000nM BPA組從8周開始,在100nM BPA組和10nM BPA組從12周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IL-6含量升高在1000nM BPA組和100nM BPA組從8周開始,在10nM BPA組從12周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IL-1β含量升高在1000nM BPA組從8周開始,在100nM BPA組從12周開始,在10nM BPA組從16周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.BPA暴露對小鼠脂肪組織IL-17的影響3.1脂肪組織IL-17表達IHC檢測結(jié)果與ND小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織IL-17表達明顯增加,與溶劑對照組相比,BPA暴露組脂肪組織IL-17表達呈時間和劑量依賴性增加,在HFD喂養(yǎng)小鼠中更明顯。3.2脂肪組織IL-17 m RNA表達RT-PCR檢測結(jié)果與ND喂養(yǎng)小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織IL-17 m RNA的表達上調(diào);與溶劑對照組相比,BPA暴露組脂肪組織IL-17 m RNA表達呈時間和劑量依賴性上調(diào)。在ND喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比,IL-17 m RNA表達上調(diào)在1000nM BPA和100nM BPA組從12周開始,在10nM BPA組從20周時,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在HFD喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,IL-17m RNA表達在1000nM BPA組和100nM BPA組從12周開始,10nM BPA組從16周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.3脂肪組織IL-17含量ELISA檢測結(jié)果與ND喂養(yǎng)小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織IL-17含量升高;與溶劑對照組相比,BPA暴露組脂肪組織IL-17含量呈時間和劑量依賴性升高。在ND喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,IL-17含量升高在1000nM BPA組和100nM BPA組從16周開始,在10nM BPA組從20周時,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在HFD喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,IL-17含量升高在1000nM BPA組和100nM BPA組從12周開始,在10nM BPA組從16周開始,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.BPA暴露對小鼠附睪脂肪組織中Th17細(xì)胞比例的影響與ND喂養(yǎng)小鼠相比,HFD喂養(yǎng)小鼠脂肪組織中Th17細(xì)胞比例升高;與溶劑對照組相比,BPA暴露組脂肪組織Th17細(xì)胞比例呈現(xiàn)時間和劑量依賴性升高。在ND喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,Th17細(xì)胞比例升高在1000nM BPA組從12周開始,在100nM BPA組從16周開始,在10nM BPA組從20周時,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在HFD喂養(yǎng)小鼠中,與溶劑對照組相比較,Th17細(xì)胞比例升高在1000nM BPA組和100nM BPA組從12周開始,在10nM BPA組從20周時,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.IL-17抗體對BPA暴露誘導(dǎo)的小鼠脂肪組織IL-17表達的影響IL-17表達在1000nM BPA暴露組中要比非BPA暴露組中高,在非BPA暴露組和1000nM BPA暴露組中,IgG處理對IL-17表達沒有明顯影響;與各自IgG同型對照相比,IL-17抗體處理HFD喂養(yǎng)小鼠,脂肪組織IL-17表達在非BPA暴露組內(nèi),以及1000nM BPA暴露組內(nèi)均明顯減少,而且1000nM BPA暴露組減少較非BPA暴露組更明顯,表明IL-17抗體可以有效降低BPA暴露誘導(dǎo)的脂肪組織中IL-17水平。6.IL-17抗體對BPA暴露小鼠脂肪組織Th17細(xì)胞比例的影響Th17比例在1000nM BPA暴露組中要比非BPA暴露組中高,在非BPA暴露組和1000nM BPA暴露組中,IgG處理對Th17比例沒有明顯影響;與各自IgG同型對照相比,IL-17抗體處理使得Th17比例有下調(diào)趨勢,但是沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。7.IL-17抗體對BPA暴露誘導(dǎo)的小鼠體重增加的抑制作用1000nM BPA暴露組小鼠體重和附睪脂肪墊系數(shù)高于非BPA暴露組;在非BPA暴露組和1000nM BPA暴露組中,與各自的溶劑對照組相比較,IgG處理對小鼠體重和附睪脂肪墊系數(shù)影響不明顯;與各自IgG同型對照相比,IL-17抗體處理使小鼠體重有下降的趨勢,但是不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與各自IgG同型對照相比,IL-17抗體處理使小鼠附睪脂肪墊系數(shù)有下降的趨勢,但是在非BPA暴露組中不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),在1000nM BPA暴露組中具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。8.IL-17抗體對BPA暴露誘導(dǎo)的小鼠脂肪組織炎癥的改善作用8.1脂肪組織病理學(xué)結(jié)果1000nM BPA暴露組炎性浸潤要比非BPA暴露組嚴(yán)重;在非BPA暴露組中和1000nM BPA暴露組中,與各自的溶劑對照組相比較,IgG處理對炎性浸潤影響不明顯;與各自IgG同型對照相比,IL-17抗體處理使炎性浸潤減輕。8.2小鼠脂肪組織TNF-α、IL-1β和IL-6的組化結(jié)果TNF-α、IL-1β和IL-6的表達在1000nM BPA暴露組中的表達要比非BPA暴露組中的表達高,在非BPA暴露組中和1000nM BPA暴露組中,與各自的溶劑對照組相比較,IgG處理對TNF-α、IL-1β和IL-6的表達影響不明顯;與各自IgG同型對照相比,IL-17抗體處理使得TNF-α、IL-1β和IL-6的表達明顯下調(diào)。結(jié)論1低劑量BPA暴露可以促進小鼠脂肪組織炎性細(xì)胞浸潤和炎性因子表達增加。2低劑量BPA暴露可以誘導(dǎo)小鼠脂肪組織IL-17表達上調(diào)和Th17細(xì)胞比例增加。3 IL-17抗體可以降低BPA暴露引起的小鼠脂肪組織中IL-17水平,但對Th17細(xì)胞數(shù)量沒有顯著作用;4.IL-17抗體可以改善BPA暴露引起的小鼠體重增加、脂肪組織炎性細(xì)胞浸潤和炎性因子分泌。
[Abstract]:The effects of BPA exposure on inflammatory cell infiltration , inflammatory cytokine expression , IL - 17 expression and Th17 cell ratio in mice were studied . The levels of TNF - 偽 , IL - 1尾 and IL - 6 in adipose tissue of mice treated with BPA were significantly increased compared with those in control group . Compared with the control group , the increase of TNF - 偽 , IL - 1尾 and IL - 6 in mice with HFD increased significantly . Compared with the control group , the levels of TNF - 偽 , IL - 1尾 and IL - 6 increased significantly in mice . The expression of IL - 17 mRNA in adipose tissue of mice was increased from 12 weeks to 10 nM BPA group and 10 nM BPA group from 12 weeks . The levels of IL - 17 mRNA increased in 1000 nM BPA group and 100 nM BPA group from 12 weeks . The levels of IL - 17 increased in the 1000 nM BPA group and 100 nM BPA group from 12 weeks , and in the non - BPA exposure group and 1000 nM BPA exposure group , the difference was statistically significant ( P0.05 ) . In the non - BPA exposure group and 1000 nM BPA exposure group , the difference was statistically significant ( P0.05 ) . The expression of TNF - 偽 , IL - 1尾 and IL - 6 in mouse adipose tissue was significantly lower than that in non - BPA exposure group ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

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1 李美玲;李應(yīng)配;冷銀芝;蔣建華;朱啟星;沈彤;;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年06期

2 李云;房魏;李美玲;沈彤;;出生前后母鼠飲水?dāng)z入雙酚A對子代未成年期體重的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年11期

3 歐琪亮;丁宋軍;李云;房魏;李美玲;沈彤;;出生前后雙酚A暴露對小鼠不同時期血清白介素-17白介素-23的影響[J];安徽醫(yī)學(xué);2013年05期

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本文編號：1903060