發(fā)布時間：2018-05-16 17:08

  本文選題：丙烯酰胺 + 髓鞘��； 參考：《廣東藥科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：丙烯酰胺(Acrylamide,ACR)是一種常見的化工原材料,廣泛應(yīng)用于采礦業(yè)、造紙業(yè)、紡織業(yè)、污水處理、土壤調(diào)節(jié)和科研實驗等多種領(lǐng)域。一般來說聚丙烯酰胺沒有毒性,但動物實驗已證實單體ACR具有神經(jīng)毒性、生殖毒性、遺傳毒性和致癌性等。目前已經(jīng)在人體發(fā)現(xiàn)其神經(jīng)毒性,主要表現(xiàn)為肢體乏力、共濟(jì)失調(diào)、感覺過敏等一系列的臨床癥狀。一直以來,關(guān)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究主要集中在大腦皮質(zhì)。近些年來的研究顯示,白質(zhì)的病變與很多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)。由于白質(zhì)血管分布比較少,白質(zhì)比大腦皮質(zhì)更容易受到損傷。有研究顯示,腦白質(zhì)損傷的患兒腦癱發(fā)生率可增加15倍。孕哺期是女性的特殊生理時期,由于抵抗力下降,對各種有害因子更加敏感�？赡芘c激素水平改變有關(guān),女性在產(chǎn)后3個月內(nèi)大腦脫髓鞘改變發(fā)生率較高。近年來由于圍產(chǎn)技術(shù)的提高,新生兒的存活率增加,但小兒神經(jīng)系統(tǒng)疾病亦呈增加的趨勢。嬰幼兒處于生長發(fā)育關(guān)鍵時期,由于各器官功能尚未發(fā)育完善,更容易受到各種因素的干擾而增加發(fā)生多種小兒腦病的風(fēng)險。關(guān)于ACR對孕哺期母嬰腦白質(zhì)或髓鞘的毒性作用,至今在國內(nèi)、外的研究報道較少。關(guān)注ACR對這兩種特殊群體髓鞘的影響,有利于保障母嬰雙方的健康,提高生育質(zhì)量。為此,我們擬建立SD大鼠ACR母源性暴露的模型,通過免疫組織化學(xué)法、western免疫印跡法、堅牢藍(lán)染色和透射電鏡等技術(shù),研究ACR對母鼠髓鞘的神經(jīng)毒性和對仔鼠髓鞘發(fā)育的影響。由于髓鞘是少突膠質(zhì)細(xì)胞的突起纏繞在神經(jīng)元軸突所形成,是神經(jīng)元發(fā)育的重要組成部分,本實驗進(jìn)一步檢測ACR染毒對仔鼠神經(jīng)元和突觸形成與發(fā)育的影響。方法:1.動物模型的建立:SPF級SD大鼠,雌鼠40只,其中備用雌鼠8只,雄鼠16只,均為6周齡鼠,體重180-200g。適應(yīng)性飼養(yǎng)6周后,隨機(jī)以1:1的比例雌雄大鼠同籠交配,逐日早晨檢查陰栓,查到陰栓,則確認(rèn)交配成功,并定當(dāng)天為妊娠第0天。將孕鼠隨機(jī)分為四組,每組8只,于妊娠第15天開始灌胃給藥,實驗組給予ACR劑量分別為4.5mg/kg,9mg/kg,18mg/kg,對照組給予同等劑量的雙蒸水,連續(xù)給藥至仔鼠出生后第14天(出生當(dāng)天為第0天)。每窩幼鼠在出生后第3天稱重并都隨機(jī)保留10只,分別在出生后第7天和第14天各取材5只。2.檢測ACR對母鼠髓鞘的毒性作用:母鼠行為學(xué)檢測;Nissl染色檢測母鼠皮質(zhì)尼氏小體的變化;HE染色檢測母鼠胼胝體結(jié)構(gòu)的變化;LFB染色檢測母鼠胼胝體脂類的表達(dá)情況;免疫組織化學(xué)法和western免疫印跡法檢測母鼠胼胝體GFAP、PLP和MBP蛋白的表達(dá)。3.檢測ACR對仔鼠髓鞘化的影響:仔鼠行為學(xué)檢測;LFB染色檢測仔鼠白質(zhì)脂類的表達(dá)情況;免疫組織化學(xué)法和免疫熒光法檢測P7、P14仔鼠內(nèi)囊和胼胝體髓鞘相關(guān)蛋白PLP、MBP的表達(dá)情況;western免疫印跡法定量分析P7、P14仔鼠大腦PLP、MBP蛋白的表達(dá)情況;透射電鏡觀察P14仔鼠大腦額葉皮質(zhì)下白質(zhì)髓鞘的結(jié)構(gòu)。4.檢測ACR對仔鼠神經(jīng)元和突觸發(fā)育的影響:通過免疫組織化學(xué)法檢測P14仔鼠海馬區(qū)域DCX、GAP-43、GFAP的表達(dá);western免疫印跡法檢測仔鼠大腦DCX、SYP、GFAP的表達(dá)情況;透射電鏡觀察仔鼠額葉皮質(zhì)突觸的結(jié)構(gòu)。結(jié)果:1.ACR對母鼠的影響:ACR染毒結(jié)束后,與對照組和低劑量組母鼠相比較,中、高劑量組母鼠步態(tài)得分明顯增加(P0.01);與對照組相比較,高劑量組母鼠產(chǎn)后體重明顯下降(P0.05);Nissl染色顯示,高劑量組母鼠皮質(zhì)尼氏小體減少、變小;HE染色顯示高劑量組胼胝體較對照組小,內(nèi)部組織疏松改變;ACR各劑量組母鼠LFB染色變淺;免疫組織化學(xué)方法和western免疫印跡法檢測結(jié)果顯示,與對照組相比較,低、中、高劑量組母鼠大腦GFAP的表達(dá)顯著增加(P0.01);與對照組相比較,中、高劑量組母鼠大腦髓鞘蛋白PLP和MBP的表達(dá)均明顯比對照組少(P0.05)。2.ACR對仔鼠大腦髓鞘化的影響:與對照組相比較,高劑量組仔鼠存活率明顯下降(P0.05),P0、P7、P14高劑量組仔鼠體重均明顯降低(P0.05);對照組仔鼠LFB染色呈亮藍(lán)色,ACR染毒后染色變淺甚至消失;免疫組織化學(xué)檢測和western免疫印跡法結(jié)果顯示,ACR染毒后P0、P7、P14各劑量組仔鼠大腦髓鞘蛋白PLP和MBP表達(dá)皆有下降,其中,中、高劑量組與對照組相比表達(dá)下降比較明顯(P0.05);透射電鏡下P14高劑量組仔鼠成熟髓鞘數(shù)量減少,髓鞘板層排列紊亂,板層之間出現(xiàn)松解分離,甚至形成囊泡樣改變。3.ACR對P14仔鼠神經(jīng)元和突觸的影響:免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示,P14仔鼠海馬齒狀回DCX、GAP-43、GFAP陽性表達(dá)均較對照組明顯減少(P0.05);western免疫印跡法結(jié)果顯示,與對照組相比較,高劑量組仔鼠大腦DCX、SYP、GFAP的陽性表達(dá)均顯著下降(P0.05);透射電鏡下,對照組仔鼠大腦額葉皮質(zhì)突觸數(shù)量較多、染色深、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,高劑量組突觸數(shù)目少、著色淺、細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰。結(jié)論:1.ACR母源性暴露后母鼠和仔鼠均出現(xiàn)了神經(jīng)毒性反應(yīng);2.ACR染毒后母鼠胼胝體脂類、PLP和MBP的表達(dá)均減少,可能是導(dǎo)致胼胝體組織結(jié)構(gòu)疏松改變的原因;3.ACR減少仔鼠大腦脂類、PLP和MBP的表達(dá),可能是導(dǎo)致仔鼠大腦髓鞘化延遲的原因之一;4.ACR減少仔鼠大腦SYP、DCX、GAP-43以及GFAP的表達(dá),可能干擾了神經(jīng)元和突觸的發(fā)育。
[Abstract]:In recent years , we have studied the effects of ACR on neurotoxic , reproductive toxicity , genetic toxicity and carcinogenicity . The effects of ACR on rat myelination were detected by immunohistochemical method and Western blotting . The results showed that the rats were given equal doses of double distilled water at the same dose of 4 . 5mg / kg , 9 mg / kg and 18 mg / kg . Compared with the control group , there was a significant decrease in the expression of myelin protein ( P < 0 . 05 ) , P < 0 . 05 ) , P < 0 . 05 ) , P 0 , P7 , and high dose group ( P < 0 . 05 ) . 2 . ACR reduces the expression of brain lipids , PLPs and MBP , which may be one of the causes of the delayed myelination of the rat brain , and 4 . ACR reduces the expression of SYP , K , GAP - 43 , and GFAP in the brain of the newborn mice , which may interfere with the development of neurons and synaptic connections .

【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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2 陳慶友;師巖;王中華;;丁苯酞改善血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能及其對海馬區(qū)GAP-43和突觸素表達(dá)的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2016年08期

3 曹鴻W，

本文編號：1897703