本文選題：食源性致病菌 + 生物膜�。� 參考：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是常見的食源性致病菌,都能影響食品的質(zhì)量安全,對(duì)人體健康造成威脅,嚴(yán)重的可引起死亡。生物膜(biofilm)是由微生物形成的被其自身分泌的胞外基質(zhì)所包裹的一類群體,這種特殊的結(jié)構(gòu)能夠抵御多種抗生素及抗菌劑的作用,從而有助于微生物自身的生存。但在醫(yī)療與食品安全領(lǐng)域,這種機(jī)制則可能引起嚴(yán)重的感染風(fēng)險(xiǎn)。而傳統(tǒng)的用抗生素、消毒劑等處理的策略,不僅效果有限而且容易使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。因此開發(fā)出安全、高效、天然的抗生物膜的物質(zhì)則具有非常重要的意義。本研究采用水提法和醇提法對(duì)10種天然香辛料(花椒、胡椒、丁香、肉桂、迷迭香、辣木葉、辣木莖、大蒜、洋蔥、小茴香)的抑菌物質(zhì)進(jìn)行提取,在研究其抑菌能力的基礎(chǔ)上篩選出抑菌能力強(qiáng)的提取物,進(jìn)一步通過結(jié)晶紫染色法、微量二倍肉湯稀釋法、XTT減低法、苯酚硫酸法以及激光共聚焦掃描顯微鏡(CLSM)等方法來探究香辛料提取物對(duì)三種致病菌生物膜的抑制和清除作用。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.針對(duì)10種香辛料的提取物,用牛津杯法測(cè)定其對(duì)三種致病菌的抑菌作用。結(jié)果表明:不同的香辛料對(duì)不同的菌種有不同的抑制效果,大蒜、肉桂、辣木葉、辣木莖、丁香等都表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗菌作用,而花椒、胡椒、小茴香、迷迭香等則相對(duì)較弱,洋蔥的乙醇提取物和水提取物都沒有表現(xiàn)出抑菌作用�？傮w上乙醇提取物的抑菌效果要強(qiáng)于水提取物,副溶血弧菌對(duì)香辛料的敏感性強(qiáng)于金黃色葡萄球菌和副溶血弧菌。2.根據(jù)抑菌圈的大小,針對(duì)每種致病菌選取兩種抑菌效果最好的提取物并對(duì)其進(jìn)行了復(fù)配,然后進(jìn)行最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定。結(jié)果表明:所有的提取物對(duì)各自對(duì)應(yīng)菌的MIC都在6.25mg/mL與12.5 mg/mL之間;相同的提取物對(duì)不同的菌種,其MIC也有所不同,如大蒜對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為12.5 mg/mL,而對(duì)副溶血弧菌的MIC則為6.25 mg/mL,說明金黃色葡萄球菌對(duì)大蒜的耐受性要強(qiáng)于副溶血弧菌;同時(shí)在復(fù)配實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn),所有的復(fù)配物的抑菌能力并沒有比單一提取物的強(qiáng)。3.通過結(jié)晶紫染色法研究pH、溫度、時(shí)間以及營(yíng)養(yǎng)水平等因素對(duì)生物膜形成的影響。結(jié)果表明:三種致病菌在一定的pH范圍,只要不是過酸或過堿的環(huán)境,都能形成生物膜,但相對(duì)來說它們都更適于偏堿性的環(huán)境;而溫度對(duì)生物膜形成的影響則更顯著,金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最適溫度為37℃,副溶血弧菌的最適溫度為30℃;時(shí)間對(duì)生物膜形成的影響也比較顯著,而且三種致病菌的生物膜都在48h后達(dá)到成熟;富營(yíng)養(yǎng)水平能夠顯著增加生物膜的形成量。4.根據(jù)篩選得到的香辛料提取物,分別研究其對(duì)三種致病菌生物膜形成的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):亞抑菌濃度的提取物都能夠?qū)ι锬さ男纬僧a(chǎn)生抑制作用,而且其還能抑制生物膜內(nèi)細(xì)菌的代謝活性,減少細(xì)菌胞外多糖的分泌。CLSM觀察發(fā)現(xiàn),處理后死細(xì)胞的數(shù)量明顯增多,且生物膜的厚度明顯變小。5.進(jìn)一步研究高抑菌濃度的提取物對(duì)成熟生物膜的清除能力。結(jié)果表明:高濃度的提取物對(duì)成熟的生物膜起到一定的清除作用,且能進(jìn)入生物膜的內(nèi)部殺死細(xì)菌,同時(shí)減少胞外多糖的附著,通過CLSM也觀察到同樣的現(xiàn)象。綜上所述,本研究的香辛料具有一定的抑菌能力,且能夠?qū)ι锬ぎa(chǎn)生抑制及清除作用,具有重要的開發(fā)潛力及應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Escherichia coli (Escherichia coli) and Vibrio parahaemolyticus (Vibrio parahaemolyticus) are common foodborne pathogens, which can affect the quality and safety of food, pose a threat to human health and cause serious death. The biofilm (biofilm) is produced by microbes and is secreted by its own. A group of groups encapsulated in the extracellular matrix that can resist the effects of a variety of antibiotics and antimicrobials to help the survival of the microbes themselves. But in the field of medical and food safety, this mechanism may cause serious infection risk. The traditional strategies for treating the antibiotic and disinfectants are not only effective. It is very important to develop a safe, efficient and natural antibiofilm substance. This study uses water extraction and alcohol extraction to extract 10 natural spices (pepper, pepper, lilac, cinnamon, rosemary, spicy wood, horseradish, garlic, onion, fennel) On the basis of the study of its bacteriostasis ability, the extracts of strong bacteriostasis were screened, and the inhibitory and scavenging effects of spice extracts on the three kinds of pathogenic biofilms were further studied by means of crystal violet staining, micro two times broth dilution, XTT reduction, phenol sulfuric acid and laser confocal scanning microscope (CLSM). The contents and results are as follows: 1. according to the extract of 10 kinds of spices, the bacteriostasis effect of the three kinds of pathogens was determined by Oxford cup. The results showed that different spices had different inhibitory effects on different strains. Garlic, cinnamon, spicy wood leaves, horseradish stems, clove, etc. all showed strong antibacterial effect, and pepper, pepper, fennel, fan. The ethanol extract and water extract of onions did not exhibit bacteriostasis. On the whole, the inhibitory effect of ethanol extract was stronger than that of water extract. The sensitivity of Vibrio parahaemolyticus to spices was stronger than that of Staphylococcus aureus and Vibrio parahaemolyticus.2. according to the size of bacteriostasis, and two of each pathogen was selected. The extracts of the best bacteriostasis were combined, and then the minimum inhibitory concentration (MIC) was measured. The results showed that all the extracts of all the extracts against the corresponding bacteria were between 6.25mg/mL and 12.5 mg/mL; the same extracts were different for different strains, and the MIC was 12.5, for example, the MIC of Staphylococcus aureus was 12.5. Mg/mL, and the MIC of Vibrio parahaemolyticus was 6.25 mg/mL, indicating that the tolerance of Staphylococcus aureus to garlic was stronger than Vibrio parahaemolyticus. At the same time, we found that the Bacteriostasis of all the compounds was not better than the strong.3. of the single extract to study pH, temperature, time and nutrition level by the crystal violet staining method. The effect of factors on the formation of biofilm shows that the three pathogenic bacteria can form a biofilm in a certain range of pH, as long as it is not overacid or overalkali, but they are more suitable for alkaline environment, while temperature has a more significant effect on the formation of biofilm, and the optimum temperature for Staphylococcus aureus and Escherichia coli is 37. The optimum temperature of Vibrio parahaemolyticus was 30 degrees C, and the effect of time on the formation of biofilm was also significant, and the biofilm of the three pathogenic bacteria reached maturity after 48h, and the eutrophic level could significantly increase the formation of biofilm,.4. based on the screened spice extract, and study the formation of the biofilms of three pathogenic bacteria respectively. The results showed that the extract of subinhibitory concentration could inhibit the formation of biofilm, and it could inhibit the metabolic activity of bacteria in the biofilm and reduce the secretion of extracellular polysaccharide by.CLSM observation. The number of dead cells after treatment was significantly increased, and the thickness of the biofilm was obviously reduced by.5. to further study the high inhibition. The results of the scavenging ability of the extract on the mature biofilm show that the high concentration extracts have a certain scavenging effect on the mature biofilm, and can enter the biofilm to kill the bacteria, and reduce the attachment of the extracellular polysaccharide, and also observe the same phenomenon through CLSM. In the summary, the spices of this study are certain. Its bacteriostatic ability and its ability to inhibit and remove biofilms have important development potential and application value.

【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R155.3

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6 李鳴宇,劉正,朱彩蓮;掃描同聚焦顯微鏡觀察血鏈菌和粘性放線菌生物膜的形成[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2001年05期

7 徐蓉蓉,岳松齡,胡濤;生物膜中細(xì)菌的代謝特點(diǎn)及影響因素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);2004年01期

8 馬瑞,朱敏,劉正;十二烷基硫酸鈉對(duì)血鏈菌生物膜的作用[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2005年05期

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10 綦成;張春燕;亓慶國(guó);;白色念珠菌生物膜形成的定量分析和形態(tài)學(xué)觀察[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2006年12期

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1 鄭波;;生物膜研究進(jìn)展[A];第8屆全國(guó)抗菌藥物臨床藥理學(xué)術(shù)會(huì)議暨北京大學(xué)臨床藥理研究所成立三十周年論文集[C];2010年

2 Michael Gittins;;生物膜及其清除[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)第7屆消毒供應(yīng)中心發(fā)展論壇大會(huì)資料[C];2011年

3 于樹云;宋詩(shī)鐸;;萬古霉素聯(lián)合鹽酸氨溴索對(duì)表葡菌生物膜干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)呼吸道感染學(xué)術(shù)大會(huì)暨第一屆多學(xué)科抗感染治療學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

4 隋森芳;;從分子到細(xì)胞——生物膜研究發(fā)展的動(dòng)力[A];第七屆全國(guó)生物膜學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];1999年

5 陳Oz;;生物膜與后基因組時(shí)代[A];后基因組時(shí)代的基因功能研究——青年科學(xué)家論壇第八十次活動(dòng)論文集[C];2003年

6 吳駿逸;陸維昌;陳邦林;;新型懸浮材料上的生物膜降解氮的研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆膠體與界面化學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];2004年

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6 田建軍;生物膜為污水處理提供新模式[N];經(jīng)濟(jì)參考報(bào);2004年

7 遼君;生物膜讓“老慢支”久治不愈[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2003年

8 本報(bào)記者 李穎;生物膜+微孔曝氣 凈化水體初戰(zhàn)告捷[N];中國(guó)花卉報(bào);2006年

9 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院;海水工廠化養(yǎng)殖循環(huán)水凈化系統(tǒng)中生物膜快速構(gòu)建方法[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2013年

10 唐偉;生物膜研究領(lǐng)域的新收獲[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

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2 李培謙;黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucuifimViiiw)生物膜的形成及相關(guān)基因功能分析[D];廣西大學(xué);2015年

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6 王培培;生防枯草芽胞桿菌NCD-2ko株豐產(chǎn)素合成和生物膜形成相關(guān)基因的功能分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1867215