本文選題：雜環(huán)胺 + 半抗原��； 參考：《食品科學(xué)》2017年04期

【摘要】：為建立適用于一類雜環(huán)胺的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),利用改良的碳化二亞胺法將在2-氨基-3,4,8-三甲基咪唑[4,5-f]-喹喔啉(2-amino-3,4,8-trimethyl-3H-imidazo[4,5-f]quinoxaline,4,8-DiMeIQx)的2-氨基處連接丁二酸單甲酯酰氯制備的半抗原偶聯(lián)蛋白獲得人工抗原。該方法利用適當(dāng)pH值的緩沖體系,將酯的水解和蛋白偶合一步完成,與傳統(tǒng)方法相比,有效地節(jié)省了反應(yīng)時(shí)間和成本,且對(duì)人工抗原的紫外掃描驗(yàn)證和多克隆抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果都直接和間接地表明偶合是成功的。最終免疫獲得4,8-DiMeIQx結(jié)構(gòu)類似物的多克隆抗體,該抗體的最高效價(jià)為1∶450 000,且經(jīng)直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè),該抗體對(duì)目標(biāo)物4,8-DiMeIQx的靈敏度(IC50)為24.0μg/L,最低檢測(cè)限(IC15)為1.8μg/L,對(duì)其結(jié)構(gòu)類似物7,8-DiMeIQx、8-Me IQx、2-氨基-3-甲基咪唑[4,5-f]-喹喔啉(IQx)、2-氨基-3,4,7,8-四甲基咪唑[4,5-f]-喹喔啉(Tri Me IQx)的靈敏度分別為35.0、30.0、28.0、40.0μg/L,而其他與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)相差較大的雜環(huán)胺,像2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4,5-b]吡啶(Ph IP)、2-氨基-3-甲基咪唑[4,5-f]喹啉(IQ)和2-氨基-3,4-二氨基咪唑[4,5-f]喹啉(2-amino-3,4-dimethyl-imidazo[4,5-f]quinoline,Me IQ),它們幾乎不與抗體結(jié)合(CR0.01%)。由此可見,可以利用該抗體建立高效快速的雜環(huán)胺ELISA檢測(cè)方法用以定量或定性檢測(cè)肉類加工食品中的一類雜環(huán)胺。
[Abstract]:In order to establish an enzyme-linked immunosorbent assay for a class of heterocyclic amines, 2-amino-3-trimethyl-4H-imidazo [45-f] -amino-3-trimethyl-3H-imidazo [45-f] -oxalineine 48-DiMeIQX was coupled with 2-amino-3-imidazo 2-amino-3-trimethyl-3H-imidazo [45-f] oxalineine 48-DiMeIQx to prepare 2-amino-3-trimethyl-4H-imidazo [45-f] oxalineine 48-DiMeIQxyl chloride by modified carbodiimide method. Hapten conjugated protein obtained artificial antigen. In this method, the hydrolysis of ester and the coupling of protein were completed by using a buffer system with appropriate pH value. Compared with the traditional method, the reaction time and cost were saved effectively. The results of UV scanning and polyclonal antibody titer test showed that the conjugation was successful. Finally, the polyclonal antibody of 4G 8-DiMeIQx structure analogue was obtained. The highest titer of the antibody was 1: 450,000, and the antibody was detected by direct competition ELISA. The sensitivity of the antibody is 24.0 渭 g / L, the lowest detection limit is 1.8 渭 g / L, and the sensitivity of the antibody to its structural analogues is 78-DiMeIQxX 8-me IQxX 2-amino-3-methylimidazole [45-f] -quinoxaline 2-amino-3-trimethyl imidazole (45-f), and the sensitivity of the antibody is 35.0g / L 30.028.0 渭 g / L, respectively, while the sensitivity of the others is 30.028.0 渭 g / L for the structural analogue of the antibody. The sensitivity of the antibody to the target is 24.0 渭 g / L and the lowest detection limit is 1.8 渭 g / L, while the other sensitivities are 35.0g / L 30.028.0 渭 g / L and 40.0 渭 g / L respectively, for the structural analogues of the antibody to the target material (45-DiMeIQx), the lowest detection limit (IC15) is 1.8 渭 g / L, respectively. Heterocyclic amines, which differ greatly from the structure of the target, For example, 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazole [45-b] pyridine (Ph), 2-amino-3-methylimidazole [45-f] quinoline (IQs) and 2-amino-34-dimethyl-imidazo [45-f] quinolineMe IQs, which are hardly bound to the antibody CR10.0T. It can be concluded that this antibody can be used to establish an efficient and rapid ELISA method for the quantitative or qualitative detection of a class of heterocyclic amines in meat processed foods.
【作者單位】： 天津師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院天津市動(dòng)植物抗性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014BAD04B03) 國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(31301487) 天津市科技計(jì)劃項(xiàng)目(142CDGNC00098)
【分類號(hào)】：R155.5

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本文編號(hào)：1862397