本文選題：艱難梭菌 + 毒素基因��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：艱難梭菌（Clostridium difficile）是一種革蘭陽性專性厭氧芽孢桿菌，通常在環(huán)境和人類腸道中正常存在。該菌由于產(chǎn)生毒素A、B而致病。過度應(yīng)用抗生素、免疫抑制劑或化療藥物使耐藥的艱難梭菌產(chǎn)毒株過度繁殖并釋放毒素是導(dǎo)致艱難梭菌相關(guān)性腹瀉（Clostridium difficileassociated diarrhea，CDAD）的主要因素。CDAD的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)不斷增加，尤其是高產(chǎn)毒株在北美地區(qū)造成了醫(yī)院內(nèi)的暴發(fā)流行，引起了世界范圍的關(guān)注。所以，為了了解中國石家莊地區(qū)艱難梭菌的流行情況，我們對艱難梭菌臨床分離株的毒素基因、PCR-核糖體分型、耐藥性及耐藥相關(guān)基因進(jìn)行了一系列研究，為有效防止艱難梭菌的暴發(fā)流行提供依據(jù)。 方法：2010年7月至2011年12月期間，共收集來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院、河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院、河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院、河北省人民醫(yī)院的糞便標(biāo)本235份。首先，對這些標(biāo)本用糞便基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，，采用常規(guī)PCR的方法直接檢測糞便中艱難梭菌毒素A、B基因tcdA和tcdB；然后，對毒素陽性的標(biāo)本通過富集芽孢培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；最后，分離得到的艱難梭菌再通過多重PCR的方法同時檢測艱難梭菌毒素A、B基因tcdA和tcdB、二元毒素基因cdtA和cdtB及16SrDNA基因。用常規(guī)PCR的方法對分離到的艱難梭菌進(jìn)行PCR-核糖體分型，所得條帶用Quantity One軟件進(jìn)行比對分析。采用瓊脂稀釋法測定艱難梭菌對左氧氟沙星、萬古霉素、甲硝唑、克林霉素、替加環(huán)素的最低抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC），并通過PCR的方法檢測克林霉素耐藥相關(guān)基因ermB。 結(jié)果：235份糞便標(biāo)本采用常規(guī)PCR的方法直接檢測糞便中艱難梭菌毒素A、B基因，共檢測出37份陽性標(biāo)本，陽性率為15.7%。對37份PCR毒素陽性的標(biāo)本用富集芽孢培養(yǎng)法進(jìn)行艱難梭菌培養(yǎng)，共培養(yǎng)出32株菌，培養(yǎng)陽性率為86.5%。用多重PCR分別對分離出的32株菌進(jìn)行毒素A、B（tcdA、tcdB）、二元毒素A、B（cdtA、cdtB）及16SrDNA檢測。發(fā)現(xiàn)所有菌株的毒素A、B基因均陽性，未檢出二元毒素基因。32株艱難梭菌分成12種不同的PCR核糖體型。其中SⅠ型最多，占28%，沒有發(fā)現(xiàn)核糖型027和078型。所有菌株對甲硝唑、萬古霉素、替加環(huán)素均高度敏感。但是對克林霉素（MIC128mg/l）和左氧氟沙星（MIC64mg/l）出現(xiàn)了高水平耐藥，并且耐藥率較高，分別為100%和87.5%。對美洛培南的耐藥率較低為18.8%。32株對克林霉素耐藥的艱難梭菌中，檢出18株ermB基因陽性菌株，占56.25%。 結(jié)論：1用常規(guī)PCR的方法檢測艱難梭菌毒素A、B基因，可以對艱難梭菌感染行早期的診斷。2富集芽孢培養(yǎng)法，提高了艱難梭菌培養(yǎng)的陽性率，可作為一種有效的艱難梭菌培養(yǎng)方法在臨床推廣。3我國石家莊地區(qū)流行的32株艱難梭菌產(chǎn)毒株以A+B+的菌株為主，未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)二元毒素的菌株。4在該地區(qū)發(fā)現(xiàn)了12種不同的PCR核糖體型別，流行的菌株以SⅠ型為主（28%），沒有發(fā)現(xiàn)核糖型027和078型。5本實驗通過測定多種抗生素對艱難梭菌的MIC值，發(fā)現(xiàn)其對克林霉素、左氧氟沙星耐藥率較高，部分菌株對美洛培南耐藥，未發(fā)現(xiàn)對甲硝唑、萬古霉素、替加環(huán)素耐藥的菌株。在該地區(qū)甲硝唑和萬古霉素，仍可以作為CDAD治療的首選藥物。
[Abstract]:Objective : Clostridium difficile ( Clostridium difficile ) is a kind of Gram positive specific anaerobic bacillus which is normally present in the environment and human intestinal tract . It is caused by the excessive reproduction and release of toxin A , B . The incidence of CDAD is increasing worldwide . In order to understand the epidemic situation of Clostridium difficileassociated diarrhea ( CDAD ) in Shijiazhuang area of China , we have carried out a series of research on toxin gene , PCR - ribosome typing , drug resistance and drug resistance related genes of Clostridium difficile clinical isolates to provide the basis for effectively preventing the outbreak of Clostridium difficile .

Methods : From July 2010 to December 2011 , 235 samples were collected from the Second Affiliated Hospital of Hebei Medical University , the Fourth Hospital of Hebei Medical University , the First Affiliated Hospital of Hebei Medical University and the People ' s Hospital of Hebei Province . First of all , DNA extraction was carried out on the fecal genomic DNA extraction kit .
and then carrying out culture on the toxin - positive specimen through the enrichment spore culture method ;
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本文編號：1744718