本文選題：內(nèi)毒素 + 人工抗體�。� 參考：《華中科技大學》2013年博士論文

【摘要】：內(nèi)毒素廣泛存在空氣、土壤和水等環(huán)境介質(zhì)中。被內(nèi)毒素污染的水進入人體后,小劑量的內(nèi)毒素(1-5ng/kg體重)即可引起體溫上升,產(chǎn)生內(nèi)毒素休克,播散性血管內(nèi)凝血等癥狀,嚴重威脅人群健康。內(nèi)毒素不易被加熱、氯化消毒破壞,因此,實時監(jiān)測水環(huán)境中的痕量內(nèi)毒素十分重要。人工抗體(又稱分子印跡聚合物,MIP)可特異性識別和結(jié)合靶分子,能夠代替天然抗體,與酶聯(lián)免疫(ELISA)和表面等離子共振(SPR)技術(shù)聯(lián)用,建立快速測定內(nèi)毒素的新方法,用于實時監(jiān)測水環(huán)境中的內(nèi)毒素。 本研究主要包括下述兩個部分： 第一部分人工抗體-酶聯(lián)免疫法檢測痕量內(nèi)毒素 目的：將MIP與ELISA聯(lián)用,建立集特異性樣品預處理和ELISA檢測于一體的人工抗體-酶聯(lián)免疫法(MIP-ELISA),檢測環(huán)境水樣品中痕量內(nèi)毒素。 方法：以多巴胺為功能單體,內(nèi)毒素為模板分子,在酶標板上合成MIP。將該MIP作為包被抗體,特異性分離富集樣品中的痕量內(nèi)毒素,然后加入兔抗內(nèi)毒素多克隆抗體,與MIP結(jié)合的內(nèi)毒素形成抗原-抗體結(jié)合物,再加入酶標二抗,最后加入發(fā)光底物,利用增強化學發(fā)光法(ECL)測定內(nèi)毒素含量。對MIP-ELISA檢測內(nèi)毒素的靈敏度,線性范圍,穩(wěn)定性及特異性進行評價,并利用MIP-ELISA檢測自來水、江水和醫(yī)院污水中痕量的內(nèi)毒素。 結(jié)果：在直接上樣100μL時,MP-ELISA檢測內(nèi)毒素的靈敏度為10ng/mL,線性范圍為10ng/mL～100ng/mL,對內(nèi)毒素加標(10-100ng/mL)的江水樣品回收率在83.6%～101.7%,日內(nèi)和日間偏差均小于5%(n=6)。MIP-ELISA測定革蘭氏陰性菌——大腸桿菌、明亮發(fā)光桿菌和綠膿桿菌(菌液濃度為105cfu/mL)中的內(nèi)毒素濃度分別為99.15±2.79ng/mL,112.63±3.68ng/mL,113.74±3.58ng/mL,革蘭氏陽性菌——金黃色葡萄球菌(菌液濃度為105cfu/mL)的檢測結(jié)果為陰性,測定自來水,江水,醫(yī)院污水中的內(nèi)毒素濃度分別為18.2±2.6ng/mL,52.6±2.9ng/mL,99.3±1.8ng/mL。MIP-ELISA與標準方法(鱟試劑法)的檢測結(jié)果相當(p0.05)。 結(jié)論：MIP-ELISA對內(nèi)毒素的定量準確,可靠,能夠用于環(huán)境水樣品中痕量內(nèi)毒素的檢測。 第二部分人工抗體-SPR法快速檢測內(nèi)毒素 目的：將MIP與SPR聯(lián)用,建立可快速檢測內(nèi)毒素的人工抗體-SPR法(MIP-SPR)。 方法：以多巴胺為功能單體,內(nèi)毒素為模板分子,在SPR芯片金膜表面合成MIP。將MIP-SPR芯片用于SPR儀,快速檢測內(nèi)毒素。對MIP-SPR檢測內(nèi)毒素的靈敏度,線性范圍,穩(wěn)定性及特異性進行評價,檢測自來水、江水和醫(yī)院污水中的內(nèi)毒素含量。 結(jié)果：MIP-SPR檢測內(nèi)毒素的線性范圍為0.01～100ng/mL,靈敏度為0.01ng/mL,對內(nèi)毒素加標(10～40ng/mL)的自來水樣品回收率在86.9%～91.6%,日內(nèi)和日間偏差均小于5%(n=6)。MIP-SPR測定革蘭氏陰性菌——大腸桿菌、明亮發(fā)光桿菌和綠膿桿菌(菌液濃度為103cfu/mL)中的內(nèi)毒素濃度分別為0.86±0.18ng/mL,0.73+0.13ng/mL,1.22±0.08ng/mL,革蘭氏陽性菌——金黃色葡萄球菌(菌液濃度為103cfu/mL)的檢測結(jié)果為陰性,測定自來水,江水,醫(yī)院污水中的內(nèi)毒素濃度分別為14.8±1.9ng/mL,50.1±2.2ng/mL,96.6±2.8ng/mL。MIP-SPR與標準方法(鱟試劑法)的測定結(jié)果相當(p0.05)。 結(jié)論：MIP-SPR對內(nèi)毒素的定量準確,可靠,可直接用于環(huán)境水樣品中內(nèi)毒素的快速檢測。
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【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R123.1

【參考文獻】

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本文編號：1737768