本文選題：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶　切入點：大腸埃希菌　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景及目的食源性動物中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumbeta-lactamases,ESBL)大腸埃希菌向周邊環(huán)境中的傳播已引起廣泛關(guān)注,目前,已有研究大多集中在規(guī)模化養(yǎng)殖場用藥情況以及產(chǎn)ESBL大腸埃希菌耐藥特征及流行趨勢方面。缺少對散養(yǎng)戶,即家庭式飼養(yǎng)模式進行的研究。因此,本研究旨在調(diào)查農(nóng)村家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū)養(yǎng)殖廢棄物及其周邊環(huán)境中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌的流行狀況、藥物敏感性和分子特征,同時探究養(yǎng)殖廢棄物中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌向周邊不同環(huán)境中的傳播情況,進而為今后控制該地區(qū)抗生素耐藥及耐藥菌的蔓延提供理論依據(jù)。方法-本研究于2015年7月19日-24 日開展,選取山東省Z市農(nóng)村家庭式豬飼養(yǎng)地區(qū)的12個村,采集養(yǎng)豬廢棄物(豬糞便、廢水和排污口沉積物)及其周邊環(huán)境樣品(土壤及蔬菜、河水、河流沉積物和井水);通過ESBL篩選性培養(yǎng)基和飛行時間質(zhì)譜儀對產(chǎn)ESBL大腸埃希菌進行篩選和鑒定;采用紙片法進行ESBL確認試驗;參照美國CLSI2016和歐洲藥敏折點標準,采用瓊脂稀釋法對菌株進行MIC測定;采用PCR方法檢測blaCTX-M基因,并通過測序進行確認;應(yīng)用多位點序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和脈沖場凝膠電泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)的方法進行分了分型和同源性分析。結(jié)果1、養(yǎng)殖廢棄物中共檢出產(chǎn)ESBL大腸埃希菌45株,檢出率為47.87%。其中,豬糞便中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌檢出率顯著高于廢水和排污kou 沉積物(P0.001)。藥敏結(jié)果顯示,菌株的多重耐藥率達100%,尤其對頭孢噻肟(97.78%)、四環(huán)素(95.56%)、復(fù)方新諾明(86.67%)和氟苯尼考(80%)等抗菌藥物耐藥程度較高,但所有菌株對美羅培南和替加環(huán)素均不耐藥。此外,共檢出6種CTX-M基因型,主要以blaC-TX-M-65(12株)和blaCTX-M-14(11株)為主;同時,檢測到27種ST型別,優(yōu)勢型別為ST10型及其復(fù)合體,占24.44%(11/45)。2、蔬菜中未檢出產(chǎn)ESBL大腸埃希菌。土壤中共檢出4株產(chǎn)ESBL大腸埃希菌,檢出率為16.67%。藥敏結(jié)果顯示,菌株多重耐藥率達100%,土壤中分離株與養(yǎng)殖廢棄物中分離株耐藥特征總體一致;所攜帶耐藥基因均為CTX-M-9組中的blaCTX-M-65;經(jīng)PFGE分析發(fā)現(xiàn)3株與養(yǎng)殖廢棄物中分離株同源性80%,具有親緣關(guān)系。3、河水與河流沉積物中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌檢出率(河水:64%,河流沉積物:76.47%)高于井水(23.26%)(P0.001)。藥敏結(jié)果顯示,河水與井水中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌耐藥情況與養(yǎng)殖廢棄物的結(jié)果基本一致,并且多重耐藥率達100%。水體環(huán)境中檢出6種CTX-M基因型,以攜帶CTX-M-9組的blaCTX—M-14基因為主;PFGE酶切圖譜顯示大部分菌株表現(xiàn)出唯一的酶切圖譜,無親緣關(guān)系。同時,河水和井水中分別有7株和3株與養(yǎng)殖廢棄物中菌株攜帶相同CTX-M基因或同一 CTX-M組群基因同源性80%,具有親緣關(guān)系。結(jié)論1、山東省農(nóng)村家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū),除蔬菜以外,產(chǎn)ESBL大腸埃希菌在養(yǎng)殖廢棄物及其周邊土壤和水體環(huán)境中廣泛流行,耐藥形勢嚴峻,周邊水體和土壤環(huán)境中與養(yǎng)殖廢棄物中菌株的耐藥特征總體一致。2、山東省農(nóng)村家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū),養(yǎng)殖廢棄物及其周邊土壤和水體環(huán)境中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌分子分型表現(xiàn)出多樣性,沒有明顯集中進化趨勢。3、動物源性耐藥基因blaCTX-M-65和blaCTX-M-14在養(yǎng)殖周邊土壤和水體環(huán)境中廣泛流行,畜禽中廣泛流行的序列型ST10型及其復(fù)合體在本地區(qū)養(yǎng)殖周邊土壤和水體環(huán)境中多見,養(yǎng)殖周邊土壤和水體環(huán)境中與養(yǎng)殖廢棄物中菌株具有親緣關(guān)系,可初步證明耐藥性有從養(yǎng)殖廢棄物向其周邊環(huán)境傳播的趨勢。
[Abstract]:Background and objective animal middle ESBLs (extended-spectrumbeta-lactamases, ESBL) of Escherichia coli to spread in the surrounding environment has aroused widespread concern, at present, most research has been focused on large-scale farms and drug producing ESBL Escherichia coli resistance characteristics and trends. The lack of farmers that is, of the family feeding pattern. Therefore, this study aims to investigate the epidemic status of rural family pig breeding area of livestock waste and its surrounding environment ESBL producing Escherichia coli, drug sensitivity and molecular characteristics, and explore the breeding waste ESBL producing Escherichia coli to spread around in different environments, which provides a theoretical basis for in the area of antibiotic resistance and resistant bacteria spread. This Research on July 19, 2015 -24, and Shandong 鐪乑甯傚啘鏉戝搴紡鐚ゲ鍏誨湴鍖虹殑12涓潙,閲囬泦鍏葷尓搴熷純鐗，

本文編號：1657855