本文選題：蓮子分離蛋白　切入點(diǎn)：DE-52純化　出處：《南京師范大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本文以蓮子作為原料,通過優(yōu)化蛋白質(zhì)的提取條件,采用DEAE-cellulose52純化得到分離蛋白,評(píng)價(jià)其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,并通過D-半乳糖致衰老小鼠實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究分離蛋白的抗衰老作用,結(jié)果如下： 1.采用Tris-HCl緩沖液浸提蓮子中的總蛋白,并利用響應(yīng)面法優(yōu)化其提取條件,得到的最佳提取工藝為：液料比7.2：1,提取時(shí)間2.4h,提取溫度11.1℃,此時(shí)總蛋白的提取率達(dá)到81.35%,與回歸模型的相對(duì)誤差小于0.5%。 2.經(jīng)透析除鹽后的蓮子蛋白再結(jié)合DEAE-cellulose52純化,即用最佳工藝提取的蛋白液上樣,用不同濃度(0.2、0.4、0.6、0.8mo1/L)的Tris-NaCl洗脫液梯度洗脫,得到的分離蛋白蛋白濃度為83.75%。氨基酸分析后得出分離蛋白中氨基酸種類是16種,必需氨基酸的比例為57%,分離蛋白的氨基酸評(píng)分為48.2,化學(xué)評(píng)分為38.4,接近于WHO/FAO的氨基酸模式,生物價(jià)約為47,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較全面。 3.建立D-半乳糖致衰老的動(dòng)物模型,分為正常組、模型組、高劑量組、低劑量組以及陽(yáng)性對(duì)照組,通過測(cè)定血液以及肝臟、心臟、腎臟中的抗氧化指標(biāo)(包括丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱時(shí)肽過氧化物酶(GSH-Px)的酶活力)以及皮膚中的羥脯氨酸的含量來研究蓮子分離蛋白的抗衰老活性,結(jié)果顯示,高劑量的蓮子分離蛋白(500mg/kg/d)能明顯降低血液與內(nèi)臟組織中的MDA含量,能顯著提高CAT、GSH-Px、SOD的活力以及皮膚中的羥脯氨酸含量(P0.05),而低劑量(100mg/kg/d)的作用不顯著(P0.05),但與模型組相比還是有一定的作用,陽(yáng)性對(duì)照組(300mg/kg/d)的作用幾乎介于兩者之間,符合理論的劑量關(guān)系,且蓮子分離蛋白對(duì)于抗氧化酶的作用力大小為：CATSODGSH-Px。并通過石蠟切片后的細(xì)胞觀察,得出模型組中細(xì)胞核內(nèi)含物明顯增多、染色深,高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組均能明顯改善此現(xiàn)象,但低劑量組改善作用不顯著,進(jìn)一步證實(shí)了前面所測(cè)指標(biāo)的準(zhǔn)確性。由于關(guān)于蓮子分離蛋白的抗衰老作用的體內(nèi)研究很少,故本實(shí)驗(yàn)的研究成果為蓮子的進(jìn)一步開發(fā)利用與深入研究提供了科學(xué)得理論依據(jù)。
[Abstract]:In this paper, lotus seed was used as raw material, the protein was purified by DEAE-cellulose52, and its nutritional value was evaluated. The anti-senescence effect of the isolate was further studied by aging mice induced by D-galactose. The results are as follows:. 1. The total protein in lotus seed was extracted with Tris-HCl buffer solution, and the extraction conditions were optimized by response surface method. The optimum extraction conditions were obtained as follows: the ratio of liquid to material was 7.2: 1, the extraction time was 2.4 h, and the extraction temperature was 11.1 鈩，

本文編號(hào)：1623580