本文選題：單增李斯特菌　切入點(diǎn)：環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增　出處：《華南理工大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：單增李斯特菌為革蘭氏陽(yáng)性桿菌，是重要食源性人獸共患病病原微生物，該菌可引起人和多種動(dòng)物的李斯特菌病。世界衛(wèi)生組織已將其列為20世紀(jì)90年代四大食源性致病微生物之一。近年來(lái)世界范圍內(nèi)李斯特菌的發(fā)生有不斷上升趨勢(shì)，在食品中的污染廣泛存在。目前，檢測(cè)食品中單增李斯特菌傳統(tǒng)方法的操作繁瑣，，檢測(cè)周期長(zhǎng)，通常需要4~7天，不能滿足食品中單增李斯特菌快速檢測(cè)的需要。因此需要建立一種快速、方便的單增李斯特菌的檢測(cè)方法。 2000年，Notomi T.等人研究開(kāi)發(fā)出一種新的核酸擴(kuò)增技術(shù)——環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（Loop-mediated isothermal amplification，簡(jiǎn)稱LAMP）。該技術(shù)具有高特異性、高靈敏度、簡(jiǎn)便快速和成本低的特點(diǎn)，已在病毒、細(xì)菌以及轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)中得到應(yīng)用。 本研究以單增李斯特菌的hlyA基因作為靶基因，設(shè)計(jì)特異性引物，利用實(shí)時(shí)濁度監(jiān)測(cè)儀65℃保溫反應(yīng)60min。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：LAMP法的特異性良好，能區(qū)分單增李斯特菌和其它食品中常見(jiàn)的細(xì)菌。靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：檢測(cè)該菌基因組DNA的靈敏度達(dá)92fg/反應(yīng)管，檢測(cè)該菌純培養(yǎng)物的靈敏度達(dá)13CFU/反應(yīng)管，檢測(cè)人工污染樣品的靈敏度達(dá)13CFU/反應(yīng)管，均比PCR法高出10倍；結(jié)合3h的前增菌，LAMP法能檢測(cè)出樣品中極低濃度的單增李斯特菌。檢測(cè)實(shí)際肉類樣品的實(shí)驗(yàn)表明：與GB4789.30－2010培養(yǎng)方法比較，LAMP方法的符合率為96.67%，結(jié)合前增菌的LAMP方法的符合率為100%。 Calcein－Mn~(2+)作為一種新型指示劑，可以直接加到反應(yīng)液中，對(duì)LAMP擴(kuò)增反應(yīng)的影響較少，最后顯色得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果與濁度儀指示結(jié)果一致。Calcein－Mn2+新型指示劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程，降低了實(shí)驗(yàn)污染的概率。 本次研究所建立的LAMP方法能夠直接對(duì)食品樣品中的單增李斯特菌進(jìn)行檢測(cè)，大約1h即可完成，與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法相比，大大縮短了檢測(cè)周期，為食品安全爭(zhēng)取了更為廣泛的時(shí)間范圍。
[Abstract]:Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes) is a Gram-positive bacillus and an important foodborne zoonotic microorganism. In 1990s, the World Health Organization has listed it as one of the four major foodborne pathogenic microorganisms. In recent years, the occurrence of Listeria sp. Has been increasing worldwide. Contamination is widespread in food. At present, the traditional method of detecting Listeria monocytogenes in food is cumbersome, and the detection period is long. It usually takes 4 to 7 days. It can not meet the need of rapid detection of Listeria monocytogenes in food, so it is necessary to establish a rapid and convenient method for the detection of Listeria monocytogenes. In 2000, Notomi T.et al developed a new nucleic acid amplification technique, Loop-mediated isothermal amplification, which is characterized by high specificity, high sensitivity, simplicity and low cost. The detection of bacteria and genetically modified foods has been applied. In this study, the hlyA gene of Listeria monocytogenes was used as the target gene, a specific primer was designed, and the real-time turbidity monitor was used to keep the temperature at 65 鈩

本文編號(hào)：1613581