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納米二氧化硅致人永生化表皮細(xì)胞膜蛋白質(zhì)組的影響

發(fā)布時(shí)間:2018-03-13 16:43

  本文選題:納米二氧化硅 切入點(diǎn):人永生化表皮細(xì)胞 出處:《衛(wèi)生研究》2015年05期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探討15 nm二氧化硅致體外培養(yǎng)的人永生化表皮細(xì)胞(HaCaT)膜蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。方法分別以2.5、5.0和10.0 mg/L的15nm二氧化硅溶液處理HaCaT細(xì)胞24 h,以dd H2O為溶劑對(duì)照。應(yīng)用CCK-8方法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。運(yùn)用亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組提取試劑盒對(duì)10.0 mg/L的15 nm二氧化硅溶液處理24 h的HaCaT細(xì)胞和正常對(duì)照組細(xì)胞進(jìn)行膜蛋白提取,采用差異熒光雙向凝膠電泳(2D-DIGE)分析和基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間(MALDI-TOF/TOF)質(zhì)譜鑒定。對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行GO(gene oncology)功能聚類及跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析,采用Western blot免疫印跡驗(yàn)證差異蛋白的表達(dá)。結(jié)果細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示,15 nm二氧化硅可以引起HaCaT細(xì)胞整體增殖水平下降,呈劑量依賴關(guān)系;與正常細(xì)胞相比,HaCaT細(xì)胞經(jīng)15 nm二氧化硅以2.5、5.0和10.0 mg/L處理24 h后,活力水平分別為(91.3%±6.1%)、(81.7%±7.0%)和(74.0%±2.6%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。質(zhì)譜鑒定了10個(gè)差異表達(dá)蛋白,其中7個(gè)差異蛋白具有1個(gè)以上的跨膜結(jié)構(gòu)域,GO功能聚類表明這些差異蛋白主要涉及結(jié)合活性和結(jié)構(gòu)分子活性。Western blot免疫印跡結(jié)果表明G蛋白偶聯(lián)受體179和L-肌動(dòng)蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)與蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果一致。結(jié)論 15 nm二氧化硅能夠引起HaCaT細(xì)胞增殖水平降低,并且導(dǎo)致膜蛋白表達(dá)水平的下降。
[Abstract]:Objective to investigate the changes of protein expression in cultured human immortalized epidermal cells induced by 15nm silica by proteomics. Methods HaCaT cells were treated with 2.5 mg/L and 10.0 mg/L of 15nm silica solution for 24 h and then treated with dd for 24 h. H _ 2O was used as solvent control. CCK-8 method was used to detect cell proliferation. Membrane protein was extracted from HaCaT cells treated with 10.0 mg/L 15 nm silica solution for 24 h and normal control cells. Differential fluorescence two-dimensional gel electrophoresis (2D-DIGE) analysis and MALDI-TOF / TOF mass spectrometry were used to identify the differential proteins. The differential proteins were clustered by GO(gene oncology and predicted by transmembrane domain. Western blot Western blot was used to detect the differential protein expression. Results Cell proliferation assay showed that 15 nm silica could induce the overall proliferation of HaCaT cells to decrease in a dose-dependent manner. Compared with normal cells, the activity levels of HaCaT cells were 91.3% 鹵6.1% 鹵7.0% and 74.0% 鹵2.6% respectively after treated with 15nm silica for 24 h. Ten differentially expressed proteins were identified by mass spectrometry. Seven of the differential proteins have more than one transmembrane domain go functional cluster. These differential proteins are mainly involved in binding activity and structural molecular activity. Western blot Western blot results show that G protein coupled receptors 179 and L- actin. Conclusion 15 nm silica can reduce the proliferation of HaCaT cells. It also leads to the decrease of membrane protein expression level.
【作者單位】: 暨南大學(xué)藥學(xué)院;深圳市疾病預(yù)防控制中心
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(No.21102094) 廣東省衛(wèi)生計(jì)生委科研項(xiàng)目(No.20132016;No.A2014659)
【分類號(hào)】:R114

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