發(fā)布時間：2018-02-14 13:54

  本文關鍵詞： 甲醛 細胞因子 哮喘 Th1/Th2/Th17類細胞 信號轉導通路　出處：《濟南大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：【目的】通過不同濃度甲醛染毒人支氣管上皮細胞16HBE,檢驗甲醛對人支氣管上皮細胞16HBE毒性,研究甲醛致哮喘機制中Th1/Th2/Th17類與TNF-α細胞因子間的變化規(guī)律與NF-κB、COX-2、JNK、ERK蛋白表達水平的影響,確定評估甲醛致哮喘作用及相關炎性因子生物標志物,探討甲醛致哮喘作用機制�！痉椒ā�1、甲醛染毒人支氣管上皮細胞16HBE增殖活性實驗取對數(shù)生長期內(nèi)細胞接種于96孔板上,在37°,5%CO2條件下培養(yǎng)至細胞單層鋪滿孔底,按實驗要求分6組甲醛染毒24小時(甲醛染毒濃度分別為0.04、0.08、0.16、0.32、0.64mmol/l,用無血清1640培養(yǎng)基與甲醛分析純配置),每個濃度設6個平行孔,用MTT法檢測人支氣管上皮細胞16HBE增殖活性并檢測半數(shù)致死量LC50。2、人支氣管上皮細胞急性甲醛染毒2、4小時后細胞上清液中Th1類細胞因子變化研究取對數(shù)生長期內(nèi)16 HBE細胞接種于48孔板上,用無血清培養(yǎng)基、不同濃度甲醛溶液(用無血清培養(yǎng)基配至濃度為0.04、0.16、0.64、1.2 mmol/l)染毒后,在37°,5%CO2無菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2、4小時后取細胞上清液高速離心后用ELISA試劑盒測Th1類細胞(IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ)因子含量研究人支氣管上皮細胞急性甲醛染毒后Th1類細胞因子作用變化。3、人支氣管上皮細胞急性甲醛染毒2、4小時后細胞上清液中Th2類細胞因子變化研究取對數(shù)生長期內(nèi)16HBE細胞接種于48孔板上,用無血清培養(yǎng)基、不同濃度甲醛溶液(用無血清培養(yǎng)基配至濃度為0.04、0.16、0.64、1.2 mmol/l)染毒后,在37°,5%CO2無菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2、4小時后取細胞上清液高速離心后用ELISA試劑盒測Th2類細胞因子(IL-4、IL-5、IL-6、IL-13)含量研究人支氣管上皮細胞急性甲醛染毒后Th2類細胞因子作用變化。4、人支氣管上皮細胞急性甲醛染毒2、4小時后細胞上清液中Th17類與TNF-α細胞因子變化研究取對數(shù)生長期內(nèi)16HBE細胞接種于48孔板上,用無血清培養(yǎng)基、不同濃度甲醛溶液(用無血清培養(yǎng)基配至濃度為0.04、0.16、0.64、1.2 mmol/l)染毒后,在37°,5%CO2無菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2、4小時后取細胞上清液高速離心后用ELISA試劑盒測Th17(IL-8、IL-17)與TNF-α細胞因子含量研究人支氣管上皮細胞急性甲醛染毒后Th17類及TNF-α細胞因子作用變化。5、用WESTERN BLOT法檢測甲醛染毒后16HBE細胞信號轉導通路蛋白NF-κB、COX-2、ERK表達變化取對數(shù)生長期內(nèi)16HBE細胞接種于6孔板上,用無血清培養(yǎng)基、不同濃度甲醛溶液(用無血清培養(yǎng)基配至濃度為0.04、0.16、0.32、0.64、1.2 mmol/l)染毒后,在37°,5%CO2無菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2、4小時后提取細胞總蛋白后用WESTERN BLOT法測NF-κB、COX-2、ERK的表達含量�！窘Y果】1、人支氣管上皮細胞(16HBE)的細胞存活率與甲醛染毒劑量成反比關系。與對照組(0mmol/l)相比,0.32、0.64mmol/l劑量組的細胞存活率下降明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。甲醛對人支氣管上皮細胞(16HBE)的半數(shù)致死量濃度為0.4658mmol/l。2、TH1類細胞因子檢測結果顯示:2小時甲醛染毒時,與對照組(0.00 mmol/l)相比,0.04、0.16mmol/l甲醛染毒劑量組細胞上清液中IL-2含量降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),IFN-γ、IL-12組間變化均不明顯,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);4小時甲醛染毒時,與對照組(0.00 mmol/l)相比,甲醛染毒劑量組內(nèi)IL-2、IL-12含量下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與對照組(0.00 mmol/l)相比,IFN-γ組間變化不明顯差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、TH2類細胞因子檢測結果顯示:2小時甲醛染毒時,與對照組(0.00 mmol/l)相比,染毒劑量組細胞上清液IL-5含量升高,IL-6含量呈下降趨勢,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),IL-4、IL-10、IL-13組間變化不明顯差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);4小時甲醛染毒時,與對照組(0.00 mmol/l)相比,1.2mmol/l劑量組內(nèi)IL-4含量升高,0.04、0.16、0.64劑量組內(nèi)IL-5含量升高,1.2mmol/l劑量組內(nèi)的IL-5含量降低、IL-6組間含量差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),IL-10、IL-13組間變化不明顯差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、TH17類與TNF-α細胞因子檢測結果顯示:2小時甲醛染毒時,與對照組(0.00mmol/l)相比,染毒劑量組細胞上清液內(nèi)IL-8含量呈下降趨勢,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),IL-17、TNF-α組間變化不明顯差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);4小時甲醛染毒時,經(jīng)多因素方差分析,與對照組(0.00 mmol/l)相比,0.04、0.16mmol/l劑量組內(nèi)IL-8含量升高,繼續(xù)加大甲醛濃度后IL-8含量減少,各組間TNF-α含量均升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),IL-17組間含量變化不明顯,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5、不同濃度的甲醛能明顯上調(diào)核轉錄因子(NF-κB)、COX-2的蛋白表達水平,并在一定程度上呈現(xiàn)劑量反應關系,但是對甲醛對ERK蛋白含量的表達并無明顯的影響【結論】1、低劑量的甲醛對人支氣管上皮細胞增殖率有一定影響,當劑量加大時,會引起細胞死亡。2、急性甲醛染毒可降低Th1類IL-2、IL-12含量,升高Th2類IL-4、IL-5含量,升高Th17類IL-8含量,升高TNF-α含量,加重氣道炎癥,從而促進哮喘的發(fā)生發(fā)展。3、急性甲醛染毒可通過上調(diào)核轉錄因子(NF-κB)、COX-2、JNK、ERK的蛋白表達水平,促進炎性細胞的分泌,加重氣道炎癥。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R114

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 王華光;張佳麗;王鶴堯;齊曼;鄭文婕;;哮喘大鼠血清中IL-4、IL-5、TNF-α和輔助性T淋巴細胞亞群的變化與哮喘關系的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2009年02期

，

本文編號：1510856