本文關鍵詞： 葉酸 大鼠 胎盤 PCNA P16 CyclinD1 游離雌三醇　出處：《承德醫(yī)學院》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 葉酸臨床應用于預防神經(jīng)管畸形等人類出生缺陷的效果已得到肯定。本實驗通過給予妊娠大鼠灌服大、中、小劑量葉酸，采用HE染色方法觀察葉酸對胎盤形態(tài)結構的影響；免疫細胞化學方法分析葉酸對妊娠大鼠胎盤PCNA、P16、CyclinD1表達的作用；應用固相酶聯(lián)免疫法（ELISA），檢測血清游離雌三醇（FE_3）水平的變化，旨在探討葉酸對胎盤生長發(fā)育及功能的影響，為臨床安全、合理應用葉酸預防出生缺陷性疾病提供理論和實驗依據(jù)。 方法： 1實驗動物的分組及干預：8～10周齡健康清潔級SD大鼠60只。雌性40只，雄性20只。雌性大鼠隨機分為四組：對照組、大、中、小劑量葉酸干預組，每組10只。大鼠按1:2雄、雌比例合籠，次晨查陰栓陽性者確定為受孕，記為E0.5d。葉酸干預組自確定受孕之日起，分別灌服0.5mg/kg/d（小劑量組）、1.0mg/kg/d（中劑量組）、2.0mg/kg/d（大劑量組）的葉酸，連續(xù)10天。對照組灌服等容量生理鹽水。 2取材及制片：各組孕鼠均于妊娠13.5天（E13.5d）水合氯醛麻醉取材，每只孕鼠隨機取一個胎盤置于Bouin液固定，常規(guī)脫水、包埋，連續(xù)切片，每隔10張取兩張裱片，待染。經(jīng)心腔所取血液置于離心管離心獲取血清。 3一般組織學技術：切片HE染色，光學顯微鏡下觀察葉酸干預組與對照組胎盤組織結構及細胞形態(tài)的發(fā)育狀態(tài)及變化。 4免疫組織化學技術：采用免疫組化超敏二步法顯示葉酸干預組和對照組胎盤中PCNA、P16、CyclinD1陽性細胞，應用Mivnt顯微圖像分析儀分析陽性面積占分析面積的比率，說明PCNA、P16及CyclinD1表達的情況。 5固相酶聯(lián)免疫技術（ELISA）：檢測葉酸干預組與對照組妊娠大鼠血清FE_3水平及變化，說明胎盤的功能狀態(tài)。 6統(tǒng)計學處理采用單因素方差分析和q檢驗。 結果： 1一般組織學結果 顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，對照組的胎盤組織學分帶出現(xiàn)，從胎鼠面向母體面依次為迷路帶、海綿帶和蛻膜帶。迷路帶絨毛明顯，絨毛外包繞2-3層滋養(yǎng)層細胞，中部可見吻合的絨毛血管。海綿帶細胞滋養(yǎng)層細胞排列成條索狀并交織成網(wǎng)，網(wǎng)眼內(nèi)充以糖原細胞群或母體血管。可見體積較大的滋養(yǎng)層巨細胞。蛻膜帶若干膠原纖維和成纖維樣細胞交錯排列，結構緊湊，嘂膜細胞結構清晰，未見空泡現(xiàn)象。葉酸干預各組大鼠胎盤組織及細胞形態(tài)結構與對照組比較無明顯變化。 2免疫組化結果 2.1PCNA的表達 PCNA在各組胎盤細胞均可見表達。陽性物質呈棕色或黃色顆粒狀，局限分布于細胞核內(nèi)。單因素方差分析顯示，葉酸干預組胎盤細胞PCNA的陽性率明顯高于對照組（P＜0.01），提示葉酸提高了PCNA的表達，具有促進胎盤細胞增殖的作用。不同劑量葉酸組間比較q檢驗表明，大、中劑量葉酸組PCNA的表達均明顯高于小劑量葉酸組，差異顯著（P＜0.05）；中劑量葉酸組PCNA的表達高于大劑量葉酸組，但無明顯差異（P＞0.05），說明葉酸劑量的不同影響了PCNA的表達陽性率，不同劑量葉酸使PCNA表達量不同，對妊娠大鼠胎盤細胞的增殖促進作用有差異，在一定范圍內(nèi)其增殖程度與劑量有關。 2.2P16表達 P16在各組胎盤細胞均可見表達。陽性物質呈棕色或黃色顆粒狀，大部分位于細胞核內(nèi)，少數(shù)可見胞漿和胞核同時有少量表達。單因素方差分析顯示，葉酸干預組胎盤細胞P16的陽性率明顯低于對照組（P＜0.01）,提示葉酸能降低P16的表達，減弱其抑制細胞增殖的作用。不同劑量葉酸組間比較q檢驗表明，大、中劑量葉酸組P16表達均低于小劑量葉酸組，差異顯著（P＜0.05）；大劑量葉酸組P16表達低于中劑量葉酸組，但無明顯差異（P＞0.05）。不同劑量葉酸組P16表達量的差別，提示劑量可影響葉酸調(diào)節(jié)胎盤細胞增殖的作用，在一定范圍內(nèi)其調(diào)節(jié)增殖程度與劑量有關。 2.3CyclinD1表達 CyclinD1在各組胎盤細胞均可見表達。陽性物質呈棕色或黃色顆粒狀，大部分位于細胞核內(nèi)，少數(shù)同時見于胞漿和胞核。單因素方差分析顯示，葉酸干預組胎盤細胞中CyclinD1的表達明顯高于對照組（P＜0.01）,說明葉酸提高了CyclinD1的陽性表達，提示葉酸具有促進胎盤細胞增殖的作用。不同劑量葉酸組間比較q檢驗表明，大、中劑量葉酸組CyclinD1表達均高于小劑量葉酸組，差異顯著（P＜0.05）;大劑量葉酸組CyclinD1的表達高于中劑量葉酸組，，但無明顯差別（P＞0.05）。說明葉酸劑量的不同影響了CyclinD1表達陽性率，反映劑量使葉酸對妊娠大鼠胎盤細胞促進增殖作用不同，在一定范圍內(nèi)其增殖效應與劑量有關。 3FE_3水平檢測結果 FE_3水平按對照組、小劑量葉酸組、中劑量葉酸組、大劑量葉酸干預組順序呈逐漸升高趨勢。單因素方差分析顯示，葉酸干預組孕鼠體內(nèi)FE_3水平明顯高于對照組（P＜0.05），說明葉酸提高了FE_3水平，具有促進胎盤合成功能的作用。不同劑量葉酸組之間比較q檢驗表明，大、中劑量葉酸組FE_3水平均明顯高于小劑量葉酸組（P＜0.05）；大劑量葉酸組與中劑量葉酸組之間比較FE_3水平無明顯差別（P＞0.05）。說明葉酸劑量的不同影響孕鼠體內(nèi)FE_3水平，提示劑量可能影響葉酸促進胎盤細胞合成功能的能力，不同劑量的葉酸對胎盤合成功能的影響不同，在一定范圍內(nèi)其促進合成效應與劑量有關。 結論： 1給予受孕大鼠大、中、小劑量葉酸時，胎盤的正常組織結構與細胞形態(tài)的生長發(fā)育無明顯改變。 2大、中、小劑量葉酸干預能提高胎盤細胞PCNA的表達，葉酸具有促進胎盤細胞增殖的作用。不同劑量的葉酸對胎盤細胞增殖影響程度不同，一定范圍內(nèi)其促增殖效應與劑量有關。 3妊娠大鼠服用大、中、小劑量葉酸可降低胎盤細胞內(nèi)P16的表達，使其抑制細胞增殖作用減弱。不同劑量葉酸影響P16抑制妊娠大鼠胎盤細胞增殖作用程度不同，在一定范圍內(nèi)與劑量有明顯關聯(lián)。 4葉酸干預能明顯提高孕鼠血清FE_3水平，葉酸具有促進胎盤細胞合成功能的作用。不同劑量的葉酸對胎盤合成功能的影響不同，在一定范圍內(nèi)合成效應與劑量有關。 5綜上所述，葉酸可能通過影響細胞增殖正負向調(diào)節(jié)因素CyclinD1和P16的表達，促進妊娠大鼠胎盤細胞的增殖活性。葉酸還通過提高胎盤的合成功能，促進胎盤的發(fā)育。一定劑量葉酸對胎盤的組織結構發(fā)育及功能發(fā)揮起到有益作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R151

【參考文獻】

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1 李智文,張樂,任愛國,李竹;葉酸與人類先天畸形[J];中國生育健康雜志;2003年06期

本文編號：1482397