本文關(guān)鍵詞： 內(nèi)分泌干擾物 哺乳動物 體內(nèi) 聯(lián)苯菊酯　出處：《中國疾病預(yù)防控制中心》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景:我國現(xiàn)有的毒理學(xué)評價方法主要包括急性毒性、慢性毒性、遺傳毒性、致畸性和致癌性試驗等,這些方法檢測不到一些具有潛在的內(nèi)分泌干擾作用的化學(xué)物。因此,盡快建立內(nèi)分泌干擾物體內(nèi)篩選評價體系,對保障人類健康和生態(tài)安全具有極其重要的意義。研究目的:初步建立內(nèi)分泌干擾物哺乳動物體內(nèi)篩選評價體系,并對聯(lián)苯菊酯(BIF)的內(nèi)分泌干擾作用進(jìn)行研究,為我國制定最終的內(nèi)分泌干擾物篩選評價指南提供科學(xué)依據(jù)。研究方法:一級篩選試驗1.子宮增重試驗:90只雌性SD大鼠隨機分為9組,每組10只:溶劑對照組灌胃給予玉米油;BIF低、中、高劑量組分別灌胃給予1.47、4.41和13.23mg/kg bw/d的BIF; 17α-乙炔雌二醇(EE)經(jīng)口陽性組灌胃給予1.0μg/kg bw/d的EE,EE經(jīng)皮陽性組灌胃給予玉米油并皮下注射0.6μg/kg bw/d的EE。EE+BIF低、中、高劑量組,除灌胃給予相對應(yīng)劑量BIF外,同時皮下注射0.6μg/kg bw/d的EE。連續(xù)給藥3d后,稱量大鼠子宮的濕重和干重,計算子宮系數(shù),并觀察子宮病理變化。2. Hershberger試驗:90只去勢雄性SD大鼠隨機分為9組,每組10只:溶劑對照組灌胃給予玉米油;BIF低、中、高劑量組分別灌胃給予1.4、4.2、12.6mg/kg bw/d的BIF; TP+BIF低、中、高劑量組,除灌胃給予相對應(yīng)劑量BIF外,同時皮下注射皮下注射0.2mg/kg bw/d的丙酸睪酮(TP);TP陽性組灌胃給予玉米油,并皮下注射0.2mg/kg bw/d的TP;氟他胺(FLU)陽性組灌胃給予3.0mg/kg bw/d的FLU,并皮下注射皮下注射0.2mg/kgbw/d的TP。連續(xù)給藥10d后,稱量腹側(cè)前列腺(VP)、精囊腺和凝固腺(SVCG)、肛提肌加球海綿體肌(LABC)、陰莖頭(GP)、尿道球腺(COW)、肝、腎和腎上腺的重量,計算其臟器系數(shù),并測定血清中三碘甲腺原氨酸(TT3)和甲狀腺素(TT4)水平。3.環(huán)青春期雌性大鼠甲狀腺功能試驗:70只雌性SD大鼠,隨機分為7組,每組10只:溶劑對照組灌胃給予玉米油,BIF低、中、高劑量組分別灌胃給予1.1、3.3、9.9mg/kg bw/d的BIF, EE陽性組、三苯氧胺(TAM)陽性組和丙基硫氧嘧啶(PTU)陽性組分別灌胃給予0.005 mg/kg bw/d的EE、0.2 mg/kg bw/d的TAM和5.0mg/kg bw/d的PTU。從PND22開始給藥,直至PND42。記錄陰道開口年齡和體重。PND42,處死所有動物,稱量子宮(濕重和干重)、卵巢、肝、腎、腎上腺、甲狀腺(固定后)、垂體的重量,計算其臟器系數(shù)。并測定血清中TT3、TT4、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)和促甲狀腺激素(TSH)水平。4.環(huán)青春期雄性大鼠甲狀腺功能試驗:70只雄性SD大鼠,隨機分為7組,每組10只:溶劑對照組灌胃給予玉米油;BIF低、中、高劑量組分別灌胃給予1.4、4.2、12.6 mg/kg bw/d 的 BIF;甲基睪酮(MT)陽性組、FLU陽性組、PTU陽性組分別灌胃給予 80 mg/kg bw/d 的 MT、50 mg/kg bw/d 的 FLU、5.0mg/kg bw/d的PTU。從PND23開始給藥,直至PND53。記錄包皮分離年齡和體重。PND53,處死動物,稱量VP、DP (背外側(cè)前列腺)、SVCG、LABC、睪丸、附睪、肝、腎、腎上腺、甲狀腺(固定后)、垂體的重量,計算其臟器系數(shù)。并測定血清中TT3、TT4、FT3、FT4 和 TSH 水平。二級檢測試驗一代繁殖擴(kuò)展試驗:100只雌性SD大鼠和100只雄性SD大鼠,隨機平均分為4組(雌雄各25只/組):溶劑對照組給予正常飼料、BIF低、中、高劑量組經(jīng)飼料給予1、3、9mg/kg bw/d的BIF。F0大鼠交配前2w開始給藥,直至仔鼠PND21斷乳。F1大鼠分為兩組試驗:F1a組經(jīng)飼料給藥至13w,F1b組經(jīng)飼料給藥至13w(PND90)后,換用正常飼料至17w(PND120)。1.F0大鼠:繁殖指標(biāo);仔鼠PND21剛斷乳后,處死F0雌鼠和雄鼠,測定血清中TT3、TT4、FT3和FT4水平。稱量大腦、垂體、甲狀腺(固定后)、肝、腎、腎上腺、脾、胸腺、心臟、卵巢、子宮、精囊腺和凝固腺、前列腺、睪丸、附睪的重量,計算其臟器系數(shù),并對這些臟器以及乳腺、陰道進(jìn)行觀察組織病理學(xué)檢查。觀察BIF高劑量組大鼠弓狀核、腺垂體、睪丸和卵巢的超微結(jié)構(gòu)。2. F1大鼠:繁殖指標(biāo);陰道開口時年齡和體重,包皮分離時年齡和體重。(1)F1a組:于第13w (PND90)處死動物,測定血清中TT3、TT4、FT3和FT4水平。稱量大腦、垂體、甲狀腺(固定后)、肝、腎、腎上腺、脾、胸腺、心臟、卵巢、子宮、精囊腺和凝固腺、前列腺、睪丸、附睪的重量,計算其臟器系數(shù),并對這些臟器以及乳腺、陰道進(jìn)行觀察組織病理學(xué)檢查。觀察BIF高劑量組大鼠弓狀核、腺垂體、睪丸和卵巢的超微結(jié)構(gòu)。(2)F1b組:于第17w(PND120)處死動物。測定指標(biāo)同F(xiàn)1a組。研究結(jié)果:一級篩選試驗1.子宮增重試驗:與溶劑對照組相比,EE經(jīng)口陽性組和EE經(jīng)皮陽性組子宮重量和子宮系數(shù)均顯著增加;BIF高劑量組子宮濕重系數(shù)和干重系數(shù)顯著增加。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),EE經(jīng)口陽性組和EE經(jīng)皮陽性組子宮內(nèi)膜增厚、角化,子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞高度顯著增厚。BIF中、高劑量組子宮內(nèi)膜增生、增厚,子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞高度增高。2. Hershberger試驗:TP陽性組,5種雄激素依賴性臟器(VP、SVCG、LABC、GP、COW)重量和臟器系數(shù)均顯著增加,FLU陽性組均顯著減輕。與溶劑對照組相比,BIF高劑量組TT3水平降低;與TP組相比,TP+BIF高劑量組VP、LABC重量顯著減輕,TT3、TT4水平顯著降低。3.環(huán)青春期雌性動物甲狀腺功能試驗:EE陽性組和TAM陽性組雌性大鼠陰道開口年齡顯著提前,陰道開口時體重降低;EE陽性組雌性大鼠子宮重量增加,卵巢重量減輕;TAM陽性組雌性大鼠子宮和卵巢重量減輕。與溶劑對照組相比,BIF中、高劑量組雌性大鼠使陰道開口年齡提前,BIF高劑量組體重明顯降低。PTU陽性組雌性大鼠甲狀腺重量明顯增加,TT3、TT4、FT3、FT4水平明顯降低,TSH水平升高。與溶劑對照組相比,BIF中、高劑量組雌性大鼠TT4降低,TSH升高;BIF高劑量組TT3水平降低。4.環(huán)青春期雄性動物甲狀腺功能試驗:MT陽性組雄性大鼠包皮分離年齡明顯提前,包皮分離時體重明顯降低,SVCG、VP、DP、LABC重量顯著升高,左側(cè)睪丸、左側(cè)附睪重量顯著降低;FLU陽性組雄性大鼠包皮分離年齡推遲,包皮分離時體重明顯增加,SVCG、VP、DP、LABC、左側(cè)附睪重量均顯著減少,左側(cè)睪丸重量顯著升高。與溶劑對照組相比,BIF高劑量組雄性大鼠包皮分離年齡推遲,VP、DP、LABC重量顯著降低。PTU陽性組雄性大鼠甲狀腺重量明顯增加,TT3、TT4、FT3、FT4水平顯著降低,TSH水平升高。與溶劑對照組相比,BIF高劑量組甲狀腺重量增加,TT3、TT4降低,TSH升高;BIF低劑量組TT4水平降低;BIF中劑量組TSH水平升高。二級檢測試驗一代繁殖擴(kuò)展試驗:1.F0大鼠:繁殖指標(biāo)各組間無統(tǒng)計學(xué)差異。與溶劑對照組相比,BIF高劑量組雌性大鼠肝、腎的相對重量顯著升高;與溶劑對照組相比,BIF高劑量組雄性大鼠SVCG、VP的絕對重量顯著降低,大腦、肝、腎的相對重量顯著升高。病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),BIF各劑量組雌性大鼠乳腺發(fā)生病變,BIF中、高劑量組甲狀腺濾泡增生;BIF各劑量組雄性大鼠前列腺發(fā)生病變,甲狀腺濾泡增生。與溶劑對照組相比,BIF中劑量組雌性大鼠血清TT4水平顯著降低,BIF高劑量組雌性大鼠TT3、TT4、FT3水平均顯著降低;與溶劑對照組相比,BIF中、高劑量組雄性大鼠血清TT3、TT4水平顯著降低。BIF高劑量組大鼠弓狀核、腺垂體、卵巢、睪丸的超微結(jié)構(gòu)均發(fā)生改變。2. F1大鼠:繁殖指標(biāo)各組間無統(tǒng)計學(xué)差異。與溶劑對照組相比,BIF各劑量組雌性大鼠陰道開口年齡均顯著提前,BIF高劑量組陰道開口時體重顯著降低;與溶劑對照組相比,BIF中、高劑量組雄性大鼠包皮分離年齡推遲,BIF高劑量組包皮分離時體重增加。(1) F1a組:與溶劑對照組相比,BIF高劑量組雌性大鼠卵巢絕對重量顯著降低,大腦、肝、腎的相對重量顯著增加;與溶劑對照組相比,BIF中劑量組雄性大鼠VP重量降低;BIF高劑量組雄性大鼠終末體重明顯降低,大腦、肝的絕對重量顯著增加,大腦、垂體、甲狀腺、肝、腎和腎上腺的相對重量均顯著升高,VP的絕對重量和相對重量顯著降低。病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),BIF中、高劑量組雌性大鼠可見甲狀腺濾泡增生;雄性大鼠BIF各劑量組均可見前列腺病變,甲狀腺濾泡增生,垂體可見去雄不育細(xì)胞。與溶劑對照組相比,BIF中、高劑量組雌性大鼠TT3、TT4、FT3水平均顯著降低,BIF高劑量組FT4水平顯著降低;與溶劑對照組相比,BIF低劑量組雄性大鼠FT3水平降低,BIF中、高劑量組雄性大鼠TT3、TT4、FT3水平均顯著降低。BIF高劑量組大鼠弓狀核、腺垂體、卵巢、睪丸的超微結(jié)構(gòu)均發(fā)生改變。(2) F1b組:與溶劑對照組相比,BIF高劑量組雌性大鼠卵巢絕對重量顯著降低,大腦、肝、腎的相對重量顯著升高;與溶劑對照組相比,BIF高劑量組雄性大鼠VP絕對重量顯著減低,大腦、肝、腎的相對重量顯著升高。病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),雌性大鼠BIF高劑量組可見甲狀腺濾泡增生;雄性大鼠BIF各劑量組均可見前列腺病變,甲狀腺濾泡增生,BIF中、高劑量組垂體可見去雄不育細(xì)胞。與溶劑對照組相比,BIF中劑量組雌性大鼠FT3水平降低,BIF高劑量組TT4、FT3、FT4均顯著降低;與溶劑對照組相比,BIF中、高劑量組雄性大鼠TT3、FT3水平均顯著降低;BIF高劑量組TT4、FT4水平也顯著降低。BIF高劑量組大鼠弓狀核、腺垂體、卵巢、睪丸的超微結(jié)構(gòu)均發(fā)生改變。研究結(jié)論:一級篩選試驗1.子宮增重試驗:可用于篩選類雌激素或抗雌激素作用的物質(zhì)。陽性受試物EE具有雌激素作用;BIF可能具有類雌激素作用。2. Herhsberger試驗:可用于篩選類雄激素或抗雄激素效應(yīng)以及抗甲狀腺激素作用物質(zhì)。陽性物受試物TP具有雄激素作用,FLU具有抗雄激素作用;BIF可能有抗雄激素效應(yīng)和抗甲狀腺激素作用。3.環(huán)青春期雌性大鼠甲狀腺功能試驗:可用于篩選類雌激素、抗雌激素或抗甲狀腺激素作用的物質(zhì)。陽性受試物EE具有雌激素作用,TAM具有抗雌激素和部分雌激素作用,PTU具有抗甲狀腺激素作用;BIF可能具有雌激素和抗甲狀腺激素的作用。4.環(huán)青春期雄性大鼠甲狀腺功能試驗:可用于篩選類雄激素、抗雄激素或抗甲狀腺激素作用的物質(zhì)。陽性受試物MT具有雄激素作用,FLU具有抗雄激素作用;BIF可能具有抗雄激素和抗甲狀腺激素的作用。一級篩選試驗結(jié)論:BIF可能具有類雌激素、抗雄激素和抗甲狀腺激素作用。二級檢測試驗一代繁殖擴(kuò)展試驗:更明確地確定和描述受試物對內(nèi)分泌系統(tǒng)的潛在危害。通過一代繁殖擴(kuò)展試驗表明BIF具有雌激素、抗雄激素和抗甲狀腺激素的影響,對內(nèi)分泌系統(tǒng)有干擾作用�？赡嫘栽囼烇@示,動物的中毒癥狀有明顯的恢復(fù)作用,但是內(nèi)分泌干擾作用的可逆性并不明顯。在本試驗條件下,BIF的最低有作用劑量LOAEL=1.0mg/kg bw/d。通過本研究建議內(nèi)分泌干擾物哺乳動物體內(nèi)篩選評價體系為:注:1. 一級篩選結(jié)果陽性則進(jìn)入二級檢測試驗;2. Hershberger試驗可加測甲狀腺激素指標(biāo),用于篩選具有抗甲狀腺激素活性的物質(zhì)。
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【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱威;鄭一凡;�；劬�;朱心強;;聯(lián)苯菊酯的抗雄激素作用及其機制[J];毒理學(xué)雜志;2006年05期

2 余剛,黃俊;關(guān)于Endocrine Disruptors的譯名[J];科技術(shù)語研究;2001年03期

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本文編號：1473908