本文關(guān)鍵詞： 赭曲霉毒素A 自噬 氧化損傷 ATM/LKB1/AMPK　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討赭曲霉毒素A(OTA)誘導(dǎo)的腎細(xì)胞(HEK293T細(xì)胞)氧化應(yīng)激以及該過(guò)程與自噬的關(guān)系。方法:以HEK293T細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)OTA對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染毒,運(yùn)用CCK-8增強(qiáng)型試劑盒對(duì)細(xì)胞活性進(jìn)行檢測(cè);運(yùn)用活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ROS表達(dá)水平;通過(guò)Western blot檢測(cè)自噬通路中關(guān)鍵蛋白(p-ULK1、p-Beclin1、p-mTOR、LC3-B)和氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白(ATM/LKB1/AMPK通路及TRAP1、VDAC1和LONP1)的表達(dá)情況。結(jié)果:1.OTA處理HEK293T細(xì)胞24小時(shí)后CCK-8結(jié)果表明:與對(duì)照組(不予以任何處理)相比1μM、3μM和5μM組均促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞存活率分別是105.1%、121.7%和121.3%;7μM、8μM、9μM及10μM組表現(xiàn)為抑制細(xì)胞生長(zhǎng),其中7μM組細(xì)胞存活率為89.6%,8μM組細(xì)胞存活率為49.4%,9μM組細(xì)胞存活率為10.5%,10μM組細(xì)胞存活率為5.7%。2.Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白結(jié)果顯示OTA處理組中p-ULK1、p-Beclin1以及LC3B蛋白的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(不予以任何處理),該結(jié)果表明OTA誘導(dǎo)了HEK293T細(xì)胞自噬的發(fā)生,且8μM組自噬發(fā)生的水平高于7μM組。同時(shí),8μM組及7μM組TRAP1、VDAC1和LONP1蛋白表達(dá)均明顯低于對(duì)照組(不予以任何處理)。表明7μM和8μM OTA處理HEK293T細(xì)胞抑制了TRAP1、VDAC1和LONP1蛋白的表達(dá)。3.活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果表明OTA誘導(dǎo)細(xì)胞ROS水平升高,其中8μM組ROS熒光強(qiáng)度(?)=138.33,7μM組ROS熒光強(qiáng)度(?)=37.70,對(duì)照組(不予以任何處理)熒光強(qiáng)度(?)=1.36。4.與對(duì)照組(不予以任何處理)比較8μM組p-ATM、p-LKB1和p-AMPK蛋白表達(dá)明顯增高,7μM組p-ATM、p-LKB1和p-AMPK蛋白的表達(dá)無(wú)明顯變化,該結(jié)果表明8μM OTA誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激激活了ATM/LKB1/AMPK信號(hào)通路。5.與對(duì)照組(不予以任何處理)比較7μM組p-mTOR蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化,8μM組p-mTOR蛋白的表達(dá)明顯低于對(duì)照組(不予以任何處理)。結(jié)論:(1)OTA處理誘導(dǎo)了HEK293T細(xì)胞氧化應(yīng)激的發(fā)生,并且誘導(dǎo)了自噬發(fā)生,其中8μM處理誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激進(jìn)一步激活A(yù)TM/LKB1/AMPK信號(hào)通路。(2)OTA處理抑制了HEK293T細(xì)胞TRAP1蛋白、LONP1蛋白及VDAC1蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:Objective: to investigate the oxidative stress induced by ochratoxin (ACTA) in renal cell line HEK293T and its relationship with autophagy. Methods: HEK293T cells were used as experimental subjects. The cells were poisoned by OTA and the activity of the cells was detected by CCK-8 enhanced kit. The expression of ROS was detected by reactive oxygen species assay kit. Western blot was used to detect p-ULK1, p-Beclin1 and p-mTOR in autophagy pathway. LC3-B) and oxidative stress-related protein, ATM / LKB1 / AMPK pathway and TRAP1. The expression of VDAC1 and LONP1. Results: 1. The CCK-8 of HEK293T cells treated with OTA for 24 hours showed that it was not treated with any treatment. Compared with 1 渭 M. The cell growth was promoted in 3 渭 M and 5 渭 M groups, the cell survival rate was 105.1% and 121.3%, respectively. The cell growth was inhibited in 7 渭 M 8 渭 M 9 渭 M and 10 渭 M groups. The cell survival rate of 7 渭 M group was 89.6 渭 M and the cell survival rate of 8 渭 M group was 49.4%. The cell survival rate of 9 渭 M group was 10.5%. The cell survival rate of 10 渭 M group was 5.7. 2. The results of the detection of autophagy associated protein by Western blot showed that p-ULK1 was in the OTA treatment group. The expression of p-Beclin1 and LC3B protein was significantly higher than that of the control group (without any treatment), which indicated that OTA induced autophagy of HEK293T cells. The level of autophagy in 8 渭 M group was higher than that in 7 渭 M group, and TRAP1 in 8 渭 M group and 7 渭 M group was higher than that in 7 渭 M group. The expression of VDAC1 and LONP1 protein was significantly lower than that of the control group (no treatment was given, indicating that 7 渭 M and 8 渭 M OTA treatment of HEK293T cells inhibited TRAP1. The expression of VDAC1 and LONP1 protein. 3. The results of reactive oxygen species detection kit showed that OTA induced the increase of ROS level, especially in 8 渭 M group, ROS fluorescence intensity? Fluorescence intensity of ROS in 138.33 渭 M group? The fluorescence intensity of the control group (without any treatment) was 37. 70? Compared with the control group (without any treatment), the expression of p-ATMN p-LKB1 and p-AMPK protein in 8 渭 M group was significantly higher than that in the control group (7 渭 M group), and the expression of p-AMPK protein in 7 渭 M group was significantly higher than that in 7 渭 M group. The expression of p-LKB1 and p-AMPK protein did not change significantly. The results showed that 8 渭 M OTA induced oxidative stress activated ATM/LKB1/AMPK signaling pathway. 5. There was no significant change in p-mTOR protein expression in 7 渭 M group. The expression of p-mTOR protein in 8 渭 M group was significantly lower than that in the control group (no treatment was given). And induced autophagy. The oxidative stress induced by 8 渭 M further activated the ATM/LKB1/AMPK signaling pathway. OTA treatment inhibited the TRAP1 protein in HEK293T cells. Expression of LONP1 protein and VDAC1 protein.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳英,彭心昭,樸英杰;自噬分子機(jī)制的研究動(dòng)向[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2000年04期

2 葉青;鄭民華;;自噬的分子機(jī)制與病理生理意義[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

3 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

4 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年01期

5 趙勇;師長(zhǎng)宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

6 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

7 伍靜;趙勇;師長(zhǎng)宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

8 王雄;譚璐;;自噬研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

9 卞龍艷;;運(yùn)動(dòng)與自噬的關(guān)系進(jìn)展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年07期

10 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過(guò)程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機(jī)制[A];中國(guó)活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（第一冊(cè)）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽(yáng);黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國(guó)生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過(guò)不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對(duì)Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對(duì)活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計(jì)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第8分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動(dòng)力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報(bào);2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會(huì)豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李倩;miRNAs介導(dǎo)的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 黎炳護(hù);激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細(xì)胞泡沫化中作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤(pán)退變中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號(hào)通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對(duì)雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細(xì)胞自噬的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

10 袁揚(yáng);線粒體自噬的抗缺血性腦損傷作用及其調(diào)控機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 匡紅;Jnk2通過(guò)smARF的降解來(lái)調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 洪永桃;自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的作用及甲氨蝶呤對(duì)自噬的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李寧;自噬在嗎啡心肌保護(hù)中的作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 劉冰;腦缺血預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 王存凱;microRNA-30a-5p通過(guò)抑制自噬阻止肝星狀細(xì)胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 唐芙蓉;自噬對(duì)奶山羊雄性生殖干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

8 陳軍童;腎損傷分子1對(duì)高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 魏園玉;P53缺失型HL-60白血病細(xì)胞內(nèi)Nucleostemin下調(diào)對(duì)mTOR通路介導(dǎo)的自噬活性的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1452925