發(fā)布時間：2018-01-14 23:26

  本文關(guān)鍵詞：聚乙二醇修飾對牛乳β-乳球蛋白的致敏性與構(gòu)象變化的研究　出處：《南昌大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：聚乙二醇修飾技術(shù)(PEGylation)是20世紀七十年代中后期發(fā)展起來的一項新技術(shù),通過修飾可以使蛋白藥物的抗原性降低或消除、增加水溶性、提高穩(wěn)定性等一系列優(yōu)點。本課題研究了PEG修飾對β-乳球蛋白致敏性和構(gòu)象變化的影響,初步探討了β-乳球蛋白致敏性與構(gòu)象變化之間的關(guān)系。 導(dǎo)致牛乳過敏的主要過敏原之一為β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg),消除主要致敏原β-乳球蛋白的致敏性始終是國內(nèi)外乳制品加工技術(shù)研究的熱點之一。本文以mPEG-SC (20kDa)修飾β-乳球蛋白,通過間接競爭ELISA研究修飾產(chǎn)物抗原性的變化,結(jié)果表明：修飾反應(yīng)時間對β-Lg抗原性降低的效果影響最大,最佳反應(yīng)條件即修飾反應(yīng)溶液pH7.0、反應(yīng)時間8h、mPEG-SC與β-Lg物質(zhì)的量比3：1時的抗原性為53.64μg/mL (初始值為180μg/mL),抗原性降低率為70.20%; SDS-PAGE得到PEG修飾β-Lg的產(chǎn)物有兩種：兩點修飾產(chǎn)物(di-PEGylated β-Lg,58kDa)和三點修飾產(chǎn)物(tri-PEGylated β-Lg,78kDa)。 通過陽離子交換層析法(樹脂為SP Sepharose Fast Flow)分離純化PEG修飾β-乳球蛋白后的產(chǎn)物,收集洗脫峰。經(jīng)SDS-PAGE實驗得到純化的產(chǎn)物為兩點修飾產(chǎn)物、三點修飾產(chǎn)物。修飾產(chǎn)物的熒光光譜實驗結(jié)果表明,PEGylation過程中發(fā)生熒光淬滅的現(xiàn)象,導(dǎo)致β-Lg的三、四級結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,同時β-Lg抗原性的降低伴隨著相對熒光強度的降低。圓二色譜分析結(jié)果表明,PEGylation過程中,從β-Lg到di-PEGylated β-Lg,再到tri-PEGylatedy β-Lg, β-sheet含量逐漸增加(β-sheet含量:β-Lg33.2%, di-PEGylatedy β-Lg35.7%, tri-PEGylated β-Lg44.6%)；隨著結(jié)合到β-Lg分子上PEG分子的增加,a-helix從14.3%到14.9%,再到19.2%,表明a-helix略有增加。 總之,由構(gòu)象研究可以說明PEG修飾β-Lg后會使β-Lg構(gòu)象表位發(fā)生變化,導(dǎo)致致敏性發(fā)生降低,即PEG修飾β-Lg后可以掩蓋β-Lg的抗原決定簇,使蛋白質(zhì)免疫原性和抗原性產(chǎn)生降低。
[Abstract]:Polyethylene glycol modification ( PEGylation ) is a new technique developed in the middle and late 1970s , and the effect of PEG modification on the sensitization and conformational changes of 尾 - lactoglobulin is studied . The relationship between sensitivity and conformational change of 尾 - lactoglobulin is discussed . One of the main allergens causing milk allergy to milk was 尾 - lactoglobulin ( 尾 - lactoglobulin , 尾 - lg ) . The sensitivity of 尾 - lactoglobulin was modified by indirect competitive ELISA . The results showed that the antigenicity of modified 尾 - lactoglobulin was 53.64 渭g / mL ( initial value was 180 渭g / mL ) . The results showed that the product of PEG - modified 尾 - lg was modified by SDS - PAGE . The results of fluorescence spectrum of modified products show that the three - and four - stage structure of 尾 - lg increased ( 尾 - sheet content : 尾 - Lg33 . 2 % , di - PEGylated 尾 - Lg34.7 % , di - PEGylated 尾 - Lg44.6 % ) . In conclusion , the conformational change can be explained by the conformation study . The conformational epitopes of 尾 - lg can be changed after PEG modification , which results in a decrease in allergenicity , that is , the antigenic determinants of 尾 - lg can be masked after PEG modification of 尾 - lg , which reduces the immunogenicity and antigenicity of the protein .

【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R151

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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8 郭，

本文編號：1425796