本文關(guān)鍵詞：廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉病人隱孢子蟲(chóng)和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)感染的分子流行病學(xué)研究　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景： 人體腸道感染性腹瀉大多是由細(xì)菌、病毒引起,但近年來(lái)由腸道寄生性原蟲(chóng)引起的腹瀉逐漸增多。腸道寄生原蟲(chóng)屬于原生動(dòng)物亞界,廣泛分布于自然界的各種生態(tài)環(huán)境中,不少原蟲(chóng)既可感染人類,又可寄生于某些動(dòng)物,大多以水作為主要傳播載體,是引起腹瀉的主要病原體之一。隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium)和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)(Giardia lamblia,簡(jiǎn)稱賈第蟲(chóng))作為可感染包括人在內(nèi)的大多數(shù)動(dòng)物胃腸道的寄生性原蟲(chóng),可引起宿主輕重不一的感染,具有明顯的發(fā)病率和病死率。免疫功能正常的個(gè)體,感染了隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)(以下合稱為兩蟲(chóng))可導(dǎo)致急性、自身限制性腹瀉；但對(duì)于免疫力較弱者,尤其嬰幼兒、免疫功能缺陷者則可引起嚴(yán)重腹瀉,甚至死亡。隱孢子蟲(chóng)病(Cryptosporidiosis)和賈第蟲(chóng)病(Giardiasis)的發(fā)生和傳播主要通過(guò)糞-口傳播,多種途徑感染,包括人-人接觸,動(dòng)物-人接觸,攝入被卵(包)囊污染的水、食物,與污染的環(huán)境物接觸等。 病原體特征有待深入研究目前國(guó)外對(duì)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的病原學(xué)特征、流行病學(xué)、基因組學(xué)等已進(jìn)行了大量的研究,但國(guó)內(nèi)對(duì)其流行病調(diào)查研究仍僅停留在簡(jiǎn)單粗糙的檢出水平上,尚未見(jiàn)隱孢子蟲(chóng)病和賈第蟲(chóng)病分子流行病學(xué)和基因分型的系統(tǒng)報(bào)道,相關(guān)研究工作還有待進(jìn)一步加強(qiáng)。 病原體檢測(cè)方法有新進(jìn)展檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的方法很多,包括病原學(xué)檢測(cè)、免疫學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)等。應(yīng)用顯微鏡對(duì)糞便標(biāo)本進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)多年來(lái)被認(rèn)為是檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的“黃金方法”,然而該方法極易漏檢,僅適用于有腹瀉癥狀且排出卵(包)囊量較大的患者,并且特異性低、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力；而免疫學(xué)檢測(cè)由于操作復(fù)雜且不能用于早期診斷,其應(yīng)用也受到了一定限制。目前,分子生物學(xué)方法已廣泛應(yīng)用于隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的檢測(cè),該方法相對(duì)其他傳統(tǒng)方法除了具有高靈敏性、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)外,還可以進(jìn)行蟲(chóng)種、基因型及亞基因型的區(qū)分,并且能同時(shí)檢測(cè)大量樣本。研究表明巢式聚合酶鏈反應(yīng)(Nested PCR)檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的敏感性可以達(dá)到1個(gè)卵(包)囊,無(wú)論是檢測(cè)環(huán)境樣本還是臨床樣本,此方法相對(duì)于傳統(tǒng)的方法在敏感性特異性上均有了較大的提高。既往雖然對(duì)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)病例報(bào)道少,但實(shí)際病人或感染者眾多,只是無(wú)癥狀的或癥狀輕的居多,其危害尚未引起足夠的重視。再者以往傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室鏡檢方法檢出率較低,報(bào)道的感染率并不能反映其實(shí)際感染情況,因此,基于靈敏性高特異性強(qiáng)的檢出方法,連續(xù)長(zhǎng)期地對(duì)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的感染情況進(jìn)行監(jiān)測(cè),能為進(jìn)一步研究提供豐富可靠的資料。 流動(dòng)人口兩病的防控有待加強(qiáng)廣州地區(qū)旅游業(yè)發(fā)達(dá),人口密集且流動(dòng)性大,城區(qū)和城鄉(xiāng)結(jié)合部人員構(gòu)成復(fù)雜,經(jīng)濟(jì)條件、知識(shí)水平、行為衛(wèi)生習(xí)慣等參差不齊,而感染性疾病中的腹瀉發(fā)病率一直居高不下。本研究分別采用病原學(xué)檢測(cè)方法和Nested PCR法對(duì)廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院2012年6月～2013年5月期間就診的腹瀉病人進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)病和賈第蟲(chóng)病的分子流行病學(xué)調(diào)查,希望能了解隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)在廣州地區(qū)的感染和流行現(xiàn)況,估計(jì)廣州地區(qū)是否存在暴發(fā)流行的潛在隱患,研究其分子流行病學(xué)和基因型分型特征,為我國(guó)隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的流行病學(xué)調(diào)查提供全面系統(tǒng)的背景資料。 研究目的： 1.了解2012年6月～2013年5月廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院門(mén)診腹瀉病人隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)感染狀況及流行病學(xué)特征,完善我國(guó)原蟲(chóng)性腹瀉的流行病學(xué)基礎(chǔ)資料； 2.了解該地區(qū)腹瀉病人隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的基因型及亞基因型別,探討其流行優(yōu)勢(shì)株,明確分子特征及基因型分布情況； 3.為廣州地區(qū)兒童和成人原蟲(chóng)感染性腹瀉的研究提供豐富的背景資料。 研究方法： 1.標(biāo)本收集： 收集2012年6月至2013年5月期間在廣州市某三甲醫(yī)院及城中村社區(qū)醫(yī)院門(mén)診就診的348例年齡14歲及以下腹瀉兒童和110例年齡18歲及以上的成人腹瀉患者的糞便標(biāo)本、人口學(xué)資料及流行病學(xué)資料。 2.標(biāo)本處理方法： 每份糞便標(biāo)本取5-10g或5～10ml,加入2.5%重鉻酸鉀溶液,震蕩后制成10%的懸液,分裝三管后4℃保存?zhèn)溆谩?3.標(biāo)本中隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)檢測(cè)方法：使用改良抗酸染色法和盧戈氏染色法對(duì)所有樣本分別進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)顯微鏡檢查；利用Nested PCR法,對(duì)所有樣本以18SrRNA基因和磷酸丙糖轉(zhuǎn)移酶(TPI)基因?yàn)槟康幕蚍謩e進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)感染的檢測(cè)；對(duì)PCR陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,應(yīng)用BLAST軟件將測(cè)序結(jié)果在GenBank上尋找各陽(yáng)性株的同源序列,使用MEGA5.0軟件的鄰接法(neighbour-joining method, NJ)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),分析隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的基因型和亞基因型,判斷其流行優(yōu)勢(shì)株。 4.統(tǒng)計(jì)分析方法：采用Epidata2.1軟件對(duì)調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行雙份錄入,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0對(duì)收集的資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,分析廣州地區(qū)隱孢子蟲(chóng)病和賈第蟲(chóng)病的流行病學(xué)特征,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。 結(jié)果： 1.2012年6月至2013年5月共收集廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院14歲及以下腹瀉兒童糞便標(biāo)本和問(wèn)卷共348份。腹瀉兒童監(jiān)護(hù)人文化程度以大專及以上為主,占69.9%(226/323),職業(yè)以辦公室白領(lǐng)占最多,為27.7%(89/321)。 2.調(diào)查了110名18歲及以上符合條件的成人腹瀉患者,平均年齡(38.91±16.62)歲�；颊呶幕潭纫源髮＜吧蠟橹�,為62.7%(69/110),職業(yè)分布以辦公室白領(lǐng)占最多,為22.7%(25/110)。 3.腹瀉兒童隱孢子蟲(chóng)的陽(yáng)性率為3.45%(12/348),發(fā)病高峰以3歲內(nèi)嬰幼兒為主。檢出季節(jié)有兩個(gè)高峰,為3月～4月和11月～12月。陽(yáng)性患兒83%有飯前便后洗手但有67%平時(shí)有吸吮手指的習(xí)慣,生活飲用水種類以自來(lái)水為主。檢出的12株隱孢子蟲(chóng)經(jīng)測(cè)序分型,8株為C.hominis,4株為C.parvum,其中Ia亞型6株,Ib亞型2株,Ⅱa亞型3株,Ⅱd亞型1株。 4.腹瀉成人隱孢子蟲(chóng)的陽(yáng)性率為1.8%(2/110),兩例均為中老年人,未能發(fā)現(xiàn)明顯季節(jié)分布特點(diǎn)。2個(gè)分離株均為C.hominis和Ⅰa基因亞型,未發(fā)現(xiàn)其他基因型別。 5.腹瀉兒童賈第蟲(chóng)的陽(yáng)性率為4.60%(16/348),主要感染3歲以內(nèi)嬰幼兒,以2-3歲年齡段檢出率最高,檢出高峰為7月至10月。75%兒童平時(shí)有飯前便后洗手,但有69%平時(shí)有吸吮手指的習(xí)慣,生活飲用水種類以自來(lái)水為主。16株賈第蟲(chóng)經(jīng)測(cè)序分型,14個(gè)分離株為集聚型A,2個(gè)分離株為集聚型B；集聚體A中9個(gè)為A-Ⅰ亞型,5個(gè)為A-Ⅱ亞型,而2個(gè)集聚體B均為B-Ⅲ亞型。 6.腹瀉成人賈第蟲(chóng)的陽(yáng)性率為3.6%(4/110),年齡分布除了18～30歲間,其余年齡段均有檢出,檢出季節(jié)集中在8-10月夏秋季節(jié),其他月份未有檢出。4份陽(yáng)性產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序,均為集聚型A,未發(fā)現(xiàn)其他基因型。集聚體A中3個(gè)為A-Ⅰ亞型,1個(gè)為A-Ⅱ亞型。 7.兩種診斷方法檢測(cè)腹瀉患者的隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)感染的檢出率有不同,PCR法比染色法的檢出率高。 結(jié)論： 1.原蟲(chóng)性腹瀉也是引起兒童和成人腹瀉的重要病原體,就算是經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的廣州地區(qū),兒童和成人均存在隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)的感染,人群分布主要感染3歲以內(nèi)的兒童為主。隱孢子蟲(chóng)的檢出高峰于春季和冬季,賈第蟲(chóng)在夏秋季節(jié)檢出最高。 2.引起廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉兒童和成人隱孢子蟲(chóng)病的10株為C.hominis,4株為C.parvum,流行株可能為C.hominis及其Ia基因亞型。賈第蟲(chóng)18個(gè)分離株為集聚型A,2個(gè)分離株為集聚型B,可能主要流行集聚型A。兩蟲(chóng)導(dǎo)致腹瀉的基因型別多樣,應(yīng)引起重視。 3.兩種診斷方法檢測(cè)腹瀉患者的隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)感染的檢出率有不同,PCR法比鏡檢染色法的檢出率高,且能分析其種屬和基因型別。運(yùn)用分子生物學(xué)方法能更準(zhǔn)確地揭示兩蟲(chóng)的實(shí)際感染情況。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R181.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1370193